Un modèle de souris pour induite par laser néovascularisation choroïdienne

Résumé

Ici, nous présentons le protocole de néovascularisation choroïdienne induite par laser (CNV) de souris, un modèle expérimental qui recrée les caractéristiques vasculaires de la dégénérescence maculaire liée à l’âge (DMLA) néovasculaire. Une fois maîtrisé, il peut induire de manière fiable et efficace la CNV en tant que système modèle pour tester diverses mesures expérimentales.

Résumé

Le modèle de néovascularisation choroïdienne (CNV) induite par laser chez la souris a été un modèle de pilier crucial pour la recherche sur la dégénérescence maculaire liée à l’âge (DMLA) néovasculaire. En administrant une lésion laser ciblée à l’EPR et à la membrane de Bruch, la procédure induit l’angiogenèse, modélisant la pathologie caractéristique observée dans la DMLA néovasculaire.

Développé pour la première fois chez des primates non humains, le modèle CNV induit par laser a été mis en œuvre dans de nombreuses autres espèces, dont la plus récente est la souris. Les expériences sur les souris sont avantageusement plus rentables, les expériences peuvent être exécutées dans un délai beaucoup plus rapide et elles permettent l’utilisation de divers modèles transgéniques. La taille miniature de l’œil de la souris, cependant, pose un défi particulier lors de l’exécution de la procédure. La manipulation de l’œil pour visualiser la rétine nécessite la pratique de compétences de dextérité fine ainsi qu’une coordination simultanée main-œil-pied pour faire fonctionner le laser. Cependant, une fois maîtrisé, le modèle peut être appliqué à l’étude de nombreux aspects de la DMLA néovasculaire, tels que les mécanismes moléculaires, l’effet des manipulations génétiques et les effets du traitement médicamenteux.

Le modèle CNV induit par laser, bien qu’utile, n’est pas un modèle parfait de la maladie. L’œil de souris de type sauvage est par ailleurs en bonne santé, et l’environnement chorio-rétinien n’imite pas les changements pathologiques de la DMLA humaine. De plus, l’angiogenèse induite par une lésion ne reflète pas les mêmes voies que l’angiogenèse survenant dans un état de maladie chronique lié à l’âge que dans la DMLA.

Malgré ses lacunes, le modèle CNV induit par laser est l’une des meilleures méthodes actuellement disponibles pour étudier la pathologie débilitante de la DMLA néovasculaire. Sa mise en œuvre a permis de mieux comprendre la pathogenèse de la DMLA, et a contribué au développement de nombreuses thérapies contre la DMLA actuellement disponibles.

Introduction

La dégénérescence maculaire (AMD) liée à l'âge est l'un des principales causes de cécité chez les personnes âgées de plus de 50 ^1-3. AMD peut être classée en deux formes: atrophique ("sec") et AMD néovasculaire («humide») AMD. Le premier est caractérisé par une atrophie géographique de l'épithélium pigmentaire rétinien (EPR), choriocapillaire et photorécepteurs, tandis que le second est caractérisé par l'invasion de vaisseaux anormaux de la choroïde dans les couches rétiniennes externes provoquer une fuite, une hémorragie, et la fibrose, et, finalement, conduisant à la cécité ^1,2. Parmi les deux formes, la DMLA néovasculaire repr....

Protocole

Tous les animaux sont traités en conformité avec le Guide de l'entretien et l'utilisation des animaux de laboratoire édition 2013, l'Association pour la recherche en vision et ophtalmologie (ARVO) Déclaration pour l'utilisation des animaux dans ophtalmique et Vision Research, et approuvée par l'animal institutionnel Entretien et utilisation Comité pour l'Université Northwestern.

Remarque: La procédure suivante peut être fait entièrement avec un seul opérateur; cependant, il est beaucoup plus efficacement réalisé avec deux opérateurs avec les tâches réparties en conséquence.

1. Préparez la....

Résultats

La quantification des lésions de NVC peut être effectuée par l'analyse des choroïde plat monté à l'aide de coloration par immunofluorescence pour étiqueter les navires CNV. Les deux méthodes les plus fréquemment employées de préparation de tissu sont étiquetage FITC-dextran, fait par perfusion immédiatement avant le sacrifice animal, ou post-mortem immuno-coloration avec un marqueur des cellules endothéliales. Ces deux méthodes ont été décrites en détail précédemment ^13,14,21; figures<.......

Discussion

Il ya plusieurs facteurs qui peuvent affecter la livraison de laser et le développement des lésions CNV résultante après succès laser induction. Ces facteurs doivent être contrôlés et normalisés afin d'avoir les résultats les plus fiables. Le plus pertinent de ces facteurs sont la sélection de la souris (génotype, âge et sexe), sélection anesthésie, et les paramètres de laser.

Le modèle de souris spécifique utilisé peut avoir un effet significatif sur le cours du développement CNV. Le gé.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Laser ophtalmique à l’argon 532 nm (vert)	IRIDEX	GLx	tout laser à argon ophtalmique 532 nm (vert) peut être utilisé
lampe à fente	Carl Zeiss	30SL-M	toute lampe à fente peut être utilisée tant qu’elle est compatible avec le
laser tribromoéthanol	Sigma	T48402-25G	utilisé pour fabriquer de l’alcool
tert-amylique	anesthésique Sigma	152463-1L	utilisé pour fabriquer des anesthésiques
flacons en verre ambré + septa	Wheaton	WH-223696	de stockage au tribromoéthanol
	VWR	82003-820	divers  ;
1 % Tropicamide	Falcon Pharmaceuticals	RXD2974251	dilatation pupillaire
0,5 % Chlorhydrate de tétracaïne	Alcon	; 0065-0741-12	anesthésie topique
larmes artificielles	Alcon	; 58768-788-25	d’hydratation
(pour le réchauffement des animaux)	Kent Scientific	HTP-1500	utilisé pour maintenir la température corporelle de l’animal
coussin chauffant	Kent Scientific	TPZ-0510EA	maintient la température du corps de l’animal
30 G aiguilles d’insuline	BD	328418	IP Balance d’injection d’anesthésie
	American Weigh Scale	AWS-1KG-BLK	pesée de souris
lamelle de recouvrement (25 mm x 25 mm)	VWR	48366089	aplatir la cornée pour visualiser la rétine de souris
Xylazine	obtenue de l’établissement Obtenue de l’établissement	Anesthésie
Kétamine	obtenue de l’établissement	Anesthésie
Volocité	PerkinElmer		utilisée pour la reconstruction volumétrique
ImageJ	National Institutes of Health		utilisé pour l’analyse d’images

lingettes tissulaires pompe de thérapie thermique de l’établissement