Fast Processing Enzymatic des protéines pour MS de détection avec un microréacteur Flow-through

Résumé

Un protocole rapide pour la digestion protéolytique avec un microréacteur tryptique à flux continu construit en interne et couplé à un spectromètre de masse à ionisation par électronébulisation (ESI) est présenté. La fabrication du microréacteur, le montage expérimental et le processus d’acquisition des données sont décrits.

Résumé

La grande majorité de la spectrométrie de masse (MS) à base de méthodes d'analyse de protéines impliquent une étape de digestion enzymatique avant la détection, généralement avec de la trypsine. Cette étape est nécessaire pour la génération de peptides de poids moléculaire, généralement PM <3000-4000 Da, qui se situent dans la plage de balayage effective de la spectrométrie de masse de l'instrumentation. protocoles classiques impliquent O / N digestion enzymatique à 37 ° C. Des progrès récents ont permis le développement d'une variété de stratégies, impliquant habituellement l'utilisation d'un microréacteur avec des enzymes immobilisées ou d'une série de processus physiques complémentaires qui permettent de réduire le temps nécessaire à la digestion protéolytique , à quelques minutes (par exemple, micro - onde ou de haute activité pression). Dans ce travail, nous décrivons une approche simple et rentable qui peut être mis en œuvre dans un laboratoire pour réaliser une digestion enzymatique rapide d'une protéine. Le (ou mélange de protéines) de la protéine est adsorbé sur C18 lié en phase inverse à haute perfORMANCE chromatographie liquide (HPLC) des particules de silice pré-chargés dans une colonne capillaire, et de la trypsine dans un tampon aqueux est imprégné sur les particules pendant un court laps de temps. Pour activer la détection en ligne MS, les peptides tryptiques sont élues avec un système solvant avec un contenu organique augmenté directement dans la source MS ion. Cette approche évite l'utilisation de particules d'enzymes immobilisées à prix élevé et ne nécessite pas d'aide pour compléter le processus. la digestion des protéines et analyse complète de l'échantillon peut être accompli en moins de 3 min et ~ ~ 30 min, respectivement.

Introduction

L'identification et la caractérisation des protéines purifiées sont fréquemment obtenus en utilisant des techniques de SM. La protéine est digérée par une enzyme et les peptides sont en outre analysés par SM en utilisant un dispositif expérimental de perfusion simple. la digestion protéolytique est nécessaire pour produire des petits fragments peptidiques qui se situent dans la plage de masse utile de la plupart des analyseurs de sclérose en plaques, et qui peut être facilement fragmenté par une faible énergie dissociation induite par collision pour générer des informations de séquence d'acides aminés. Pour les protéines isolées ou mélanges de protéines simples, il n'y a plus besoin d'une séparation chromatographique des peptides avant la détection MS. Un mélange de 25-50 peptides peut être facilement analysé en insufflant de l'échantillon avec une pompe à seringue directement dans la source d'ions SP.

Le spectromètre de masse peut effectuer l'analyse et confirmer la séquence d'une protéine dans un laps de temps court. Avec les méthodes d'acquisition de données modernes, ce processus peut être accompli wurant quelques minutes, voire quelques secondes. Le facteur limitant dans la réalisation de l'ensemble du processus sur une échelle de temps courte est l'étape de digestion protéolytique. En règle générale, ceci est réalisé en quelques heures (ou O / N), en solution, à 37 ° C, en utilisant un substrat: ratios de (50-100) de l'enzyme: 1. Pour réduire le temps de digestion enzymatique minutes ou secondes, microréacteurs d'enzymes immobilisées, sous la forme de réacteurs microfluidiques ou des cartouches disponibles dans le commerce, ont été décrits. ^1-6 Typiquement, l'enzyme est immobilisée par liaison covalente, non covalente / adsorption physique, complexe la formation ou l' encapsulation, ^3,6- l'efficacité accrue du processus enzymatique étant activé par la grande surface-volume et de rapports enzyme-substrat. Des avantages supplémentaires de réacteurs immobilisés comprennent autolyse et l'interférence réduite de l'enzyme dans l'analyse MS, une stabilité améliorée et la réutilisabilité enzyme. Une variété d'approches, en utilisant du verre ou des dispositifs micro-usinés polymères ont été décrits,en utilisant des enzymes immobilisées sur des perles magnétiques par des interactions anticorps-antigène, ^7,8 piégées dans des réseaux de nanoparticules d' or, ⁹ encapsulées dans du dioxyde de titane-alumine sol-gels ¹⁰ et nanozeolites, ¹¹ ou capturés par Ni-NTA ou His-Tag formation du complexe. ⁶ Alternativement , capillaires ouvert tubulaires avec des enzymes immobilisées ont été développés, aussi bien. ¹² par ailleurs, le renforcement de clivage protéolytique a été démontrée en utilisant micro - ondes irradiation contrôlée ¹³ ou de la technologie de vélo assisté à la pression ou à la pression (PCT) pour réduire les temps de réaction à 30-120 min. ¹⁴

Malgré les multiples avantages de réacteurs enzymatiques immobilisés, les coûts des cartouches commerciales est élevé, la disponibilité des dispositifs microfluidiques pour une utilisation de routine est limitée, et l'utilisation des technologies de micro-ondes ou PCT résultats dans le besoin pour l'instrumentation supplémentaire. Le but de ce travail était de développer une méthode qui circumveNTS ces inconvénients, et qui peuvent être facilement mises en œuvre dans tous les laboratoires de permettre aux chercheurs avec une approche simple et efficace pour effectuer un clivage enzymatique de protéines en préparation pour l'analyse MS en quelques minutes. L'approche repose sur l'utilisation de C18 particules hydrophobes qui sont pré-chargés dans un tube capillaire ou d'un dispositif microfluidique, et l'adsorption de la protéine (s) d'intérêt sur ces particules, suivie par une digestion enzymatique pendant la perfusion de l'enzyme au cours de la lit garni et de protéines (s) capturé. Dans cette approche, le substrat est immobilisé par des interactions non covalentes, et l'enzyme est perfusé sur la protéine immobilisée. L'efficacité protéolytique de digestion est augmentée par les grandes surfaces des particules qui exposent la protéine pour le traitement enzymatique, des distances et des temps de diffusion vers et à partir de la surface de particules réduite, améliore le transfert de masse, aucune liaison covalente qui peut affecter l'activité de l'enzyme, l'aptitude rapidement évaluate combinaisons de différentes enzymes, et le multiplexage jetabilité si le procédé est exécuté dans un format microfluidique. Cette approche est démontrée par l'utilisation d'un mélange de protéines standards et trypsine l'enzyme la plus couramment utilisée pour la digestion protéolytique avant la détection ESI-MS. Le spectromètre de masse utilisé pour la détection dans cette étude était un instrument linéaire piège quadripolaire (LTQ).

Protocole

1. Préparation du microréacteur Capillaire

1. Couper le diamètre interne de 100 um (ID) x 360 um de diamètre extérieur (OD) capillaire à une longueur de 7-8 cm et le diamètre intérieur x 20 um 90 um OD capillaire 3-5 cm avec le hachoir à capillaire en verre; vérifier sous le microscope que les deux extrémités capillaires ont, une coupe droite propre, sans bavures saillantes.
2. Insérer le 20 um x 90 um ID OD capillaire dans une extrémité de l'ID de 100 um x 360 um diamètre extérieur capillaire, pour une longueur de ~ 6 mm; en cas de besoin, d'observer cette opération sous un microscope.
3. Appliquer une petite goutte de colle E6000 autour de la jonction des 90 um OD / 100 capillaires um d'identité avec la fin d'un Q-tip, et laisser la colle cure O / N à la température ambiante.
4. Couper l'insertion 20 um x 90 um ID OD capillaire à une longueur de ~ 10 à 15 mm; ce sera l'ionisation électrospray émetteur.
5. Pré-couper le 1/32 "PEEK OD, 1/16" PEEK OD et 1/16 "PTFE baignoire ODtion en morceaux de 4-5 cm de longueur; ce seront les manches utilisés dans les syndicats capillaires pour fournir une connexion sans fuite.
6. Connectez l'autre extrémité du 100 um ID x 360 um OD capillaire à une union de PEEK; utiliser un manchon 1/32 "PEEK pour fournir une connexion sans fuite.
7. Insérer / serrer un morceau de ~ longue 1/16 "tube de PTFE 5 cm dans l'extrémité opposée de l'union.
8. Peser ~ 4 mg de C18 (5 um) des particules dans un pré-nettoyée / séchée de 2 ml du flacon de verre; ajouter 0,5 ml d'isopropanol, fermer le flacon et disperser la boue dans le bain de appareil à ultrasons.
9. Retirer avec une seringue de 250 pi environ 200 en suspension ul, insérer l'aiguille de la seringue dans le "tube de l'union de PEEK 1/16 de PTFE, et distribuer lentement la suspension dans le 100 um ID x 360 um OD capillaire; observer au microscope comme capillaire remplit avec des particules jusqu'à une longueur de 2-3 mm d' emballage est réalisé, ce sera le microréacteur (Figure 1) le 20 μ.m ID capillaire retient les particules dans le microréacteur par un effet Keystone. ¹⁵
10. Rincer le microréacteur avec une solution ~ 50 ul de H ₂ O / CH ₃ CN 50:50 v / v, puis avec une solution ~ 50 ul de H ₂ O / CH ₃ CN 98: 2 v / v.

2. Préparation de l'échantillon Solutions

Remarque: Les opérations qui impliquent la manipulation de solvants et d'acides organiques et de la préparation de la solution doivent être effectuées dans une hotte. Porter des lunettes, des gants et des vêtements de protection.

1. Rinçage avec _CH3OH et sécher quelques flacons en verre (4 ml) et des tubes de polypropylene (15 ml).
2. Préparer 10 ml d'une solution de H ₂ O / CH ₃ CN (98: 2 v / v) dans un tube de 15 ml en polypropylene en mélangeant 9,8 ml de H ₂ O avec 200 pi de _CH3CN; mélanger par sonication.
3. Préparer 10 ml d'une solution de H ₂ O / _CH3CN (50:50 v / v) dans un tube de 15 ml en polypropylene en mélangeant 5 ml de H _{2 <}/ sub> O avec 5 ml CH ₃ CN; mélanger par sonication.
4. Préparer 4 ml d'une solution aqueuse acidifiée (TFA 0,01% v / v) par addition de 4 ul de TFA (10%) à 4 ml d' H ₂ O / CH ₃ CN (98: 2 v / v) dans un flacon de 4 ml en verre; mélanger par sonication.
5. Préparer 4 ml d'une solution organique acidifiée (TFA 0,01% v / v) par addition de 4 ul de TFA (10%) à 4 ml d' H ₂ O / _CH3CN (50:50 v / v) dans un flacon de 4 ml en verre; mélanger par sonication.
6. Peser 16 mg NH ₄ HCO ₃ avec une microbalance analytique dans un flacon de 4 ml en verre; ajouter 4 ml d'H ₂ O / CH ₃ CN (98: 2 v / v) et de se disperser par sonication; il en résulte une solution à 50 mM de NH ₄ HCO ₃ (pH ~ 7,8) dans un tampon aqueux.
7. Peser 5 mg d'une protéine standard (par exemple, l' albumine de sérum bovin, l' hémoglobine α / β, le cytochrome C, l' anhydrase carbonique, l' α-2-HS-glycoprotéine, etc.) avec une micro - balance analytique dans un flacon de 4 ml en verre; ajouter 4 ml DI water et disperser par sonication; cela se traduit généralement par une solution de concentration de niveau élevé iM.
8. Préparer 1 ml de solution de protéine (1-2 uM) en diluant la solution de concentration au niveau iM haut avec un volume approprié de NH ₄ HCO ₃ (50 mM) , un tampon aqueux; mélanger par sonication.
9. Préparer la solution de trypsine (5 uM) en dissolvant 20 ug séquençage teneur trypsine dans 170 pl de NH ₄ HCO ₃ (50 mM) , un tampon aqueux; disperser par sonication.

3. Configuration expérimentale

Remarque: Le système LTQ-MS est équipé d'une source ESI modifiée qui comprend une étape de XYZ-maison construite qui permet l'interface du spectromètre de masse à diverses approches d'entrée d'échantillon.

1. Débranchez le microréacteur capillaire du syndicat PEEK et se connecter au PEEK Tee.
2. Insérez un ~ 2 cm de long fil Pt dans le bras latéral du PEEK Tee; utiliser un "manchon 1/32 PEEK pour fournir unconnexion et pour isoler le fil Pt sans fuite.
3. Connectez un 50 pm ID x 360 um OD (~ 0,5 m de long) transfert d'échantillon capillaire à l'extrémité opposée de la PEEK Tee; utiliser un manchon 1/32 "PEEK pour fournir une connexion sans fuite.
4. Fixer le PEEK T sur le XYZ-scène et positionner l'ESI émetteur ~ 2 mm de la masse capillaire d'entrée du spectromètre.
5. Connectez le fil Pt à la source d'alimentation ESI du spectromètre de masse.
6. Connectez l'autre extrémité du transfert de l'échantillon capillaire à l'union en acier inoxydable; utiliser un manchon 1/16 "PEEK pour fournir une connexion sans fuite.
7. Connectez un 4-5 cm de long 1/16 "tube en PTFE à l'extrémité opposée de l'union en acier inoxydable et insérer l'aiguille de la seringue 250 pi dans le tube de PTFE, tourner sur la pompe et régler le débit à la valeur désirée (par exemple, 2 pl / min).
8. tandem d'entrée d'acquisition de données MS paramètres dans le logiciel qui contrôle l'instrument MSd enregistrer en tant que fichier de méthode pour préparer le programme d'installation pour effectuer l'analyse; pour le système LTQ-MS, utilisez les paramètres d'analyse dépendant de données suivantes: exclusion dynamique activé pour 180 secondes avec une largeur de masse d'exclusion ± 1,5 m / z; un MS scan suivi d'un zoom et MS ² scans sur le top 5 des pics les plus intenses, zoom largeur de balayage ± 5 m / z; dissociation induite par collision (CID) des paramètres fixés à la largeur d'isolement 3 m / z, normalisée énergie de collision de 35%, l'activation Q 0,25, et le temps d'activation de 30 msec.

4. Configuration microfluidique

1. Préparer un dispositif microfluidique à partir de verre ou de substrats polymères; ^16-18 l'agencement du dispositif est pourvu sur la figure 2A, constitué d'un micro - réacteur (1) (0,13 mm Longueur Largeur x 2 mm x 50 um de profondeur) reliée à une entrée (2 ), la sortie (3) et un orifice latéral (4); les canaux d'interconnexion pour les manipulations fluidiques sont ~110 m de large et de ~ 50 um de profondeur; une structure multi - canaux (5), composé de ~ 1,5 à 2 um de profondeur x 10 um de largeur x 100 um de long microcanaux 25 um placés à part, va agir comme un filtre pour retenir les particules dans le microréacteur.
2. Activer les connexions fluides livraison à la puce par collage des connecteurs spécialisés aux ports d'entrée, ou en concevant un stand polymère qui accueille des raccords pour la distribution de fluide (figure 2B). ¹⁶
3. Préparer une suspension de particules C18 (5 um) comme décrit à l'étape 1.8; fournir la suspension dans le microréacteur avec une seringue à l'aide de 16.01 "tube en PTFE relié à l'orifice latéral de la puce (4) scelle l'orifice après le chargement des particules avec de la colle epoxy et durcir pendant 1 heure dans une étuve à 90 ° C ^16.
4. Insérez un capillaire (20 pm ID x 90 um OD x 10 mm de longueur) dans l'orifice de sortie, sceller avec E6000 colle et laisser sécher O / N; cela deviendra l'émetteur ESI ( 6).
5. Connectez un 50 pm ID x 360 OD um (~ 0,5 m de long) transfert d'échantillon capillaire à l'orifice d'entrée de la puce (2); connecter l'extrémité opposée du tube capillaire à une seringue de 250 ul et la pompe de seringue, comme décrit dans 3,6 à 3,7.
6. Placez un léger PEEK Tee connecteur sur la ligne de transfert d'échantillon juste avant l'orifice d'entrée (2) et insérer un fil de Pt sur ​​le côté-bras du T, comme décrit dans 3.2; ce sera l'électrode ESI.
7. Fixer le dispositif microfluidique sur la platine XYZ avec l'émetteur positionné ESI ~ 2 mm par rapport à la masse capillaire d'entrée du spectromètre; préparer le MS pour l'analyse comme décrit dans 3.8.

5. Sample Loading, Digestion protéolytique et Elution pour MS Analysis

Remarque: Toutes les étapes de transfert solution / échantillon sont effectuées à l'aide d'une pompe à seringue et devrait permettre pendant quelques minutes supplémentaires pour terminer, pour compenser les morts-volumes associés aux lignes de transfert vers et depuis le microréacteur; le temps nécessaire dépendra des débits en cause.

1. Rincer le microréacteur et la préparer pour l' analyse par infusion d' une solution aqueuse de NH ₄ HCO ₃ (50 mM) dans du H ₂ O / CH ₃ CN (98: 2 v / v) à 2 ul / min pendant 5 min; utiliser une seringue de 250 pi.
2. Charger l'échantillon de protéine (1 uM) dans le microréacteur en injectant la solution d'échantillon à 2 pi / min pendant 5 min; utiliser une seringue de 250 pi.
3. Perfuser la solution de trypsine (5 uM) sur la protéine adsorbée sur le microréacteur à 2 ul / min pendant 1-3 min.
4. Étancher le processus de digestion protéolytique par rinçage du micro - réacteur avec une solution aqueuse acidifiée de TFA (0,01% v / v) dans _H2O / _CH3CN (98: 2 v / v) à 2 ul / min pendant 5 min; utiliser une seringue de 250 pi.
5. Lancer l'élution de la digestion protéique du microréacteur en infusant une solution organique acidifiée de TFA (0,01%v / v) dans H ₂ O / _CH3CN (50:50 v / v) à 300 Nl / min.
6. Allumez le processus d'acquisition de données MS et la tension ESI (~ 2,000 V); acquérir des données MS en utilisant les paramètres d'acquisition de données fournies à l'étape 3.8; observer l'élution des peptides tryptiques.

6. Traitement des données

1. Traiter les données avec un moteur de recherche compatible avec le format de données MS brut tandem MS.
   1. Traiter les fichiers bruts LTQ-MS à l'aide d'un organisme de base de données spécifique de la protéine peu redondante; télécharger les données brutes dans le moteur de recherche, définissez les parents et le fragment d'ions tolérances de masse à 2 et 1 Da, respectivement, et utiliser des fragments seulement entièrement tryptiques avec jusqu'à deux clivages pour la recherche manquée; ne permettent pas de modifications post-traductionnelles; fixer les taux de découverte haute et moyenne confiance faux (FDR) à 1% et 3%, respectivement, et ne permettent pas de modifications post-traductionnelles.
2. Filtrer les données pour sélectionner seulement de haute confiancepeptide correspond aux protéines contenues dans la base de données; évaluer les protéines et niveau peptide résultats.

Résultats

Un résultat représentatif d'un procédé de digestion protéolytique effectuée simultanément sur ​​un mélange de protéines, avec des microréacteurs (figures 1 et 2) est fournie dans le tableau 1 décrit ci-dessus. Le tableau comprend les séquences peptidiques uniques qui identifient une protéine particulière, la croix score de corrélation (Xcorr) (ie, un score qui caractérise la qualité du match expérimentale à théorique pour le spectre de masse en ...

Discussion

Le microréacteur décrit dans ce travail fournit un outil facile à mettre en œuvre l'installation expérimentale pour effectuer la digestion enzymatique de protéines pour permettre l'analyse MS et l'identification en moins de 30 min. Les avantages distincts de ce système, par rapport aux approches conventionnelles, notamment la simplicité, la rapidité, la faible consommation de réactifs et de faibles coûts. En particulier, il n'y a pas besoin de billes de trypsine immobilisée coûteux et des cartouches. La ...

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Piège à ions ESI-MS	Thermo Electron	LTQ	Le spectromètre de masse LTQ est utilisé pour l’acquisition de données MS en tandem
Étage XYZ Newport	Pièces multiples	L’étage XYZ de fabrication artisanale est utilisé pour adapter la source nano-ESI commerciale LTQ afin de recevoir des informations de divers systèmes de distribution d’échantillons
Stéréomicroscope	Edmund optics	G81-278	Le microscope est utilisé pour observer le processus d’emballage du microréacteur
Balance analytique/Metler	VWR	46600-204	La balance est utilisée pour peser les échantillons de protéines
Bain à ultrasons/Branson	VWR	33995-540	Le bain sonique est utilisé pour mélanger/homogénéiser les échantillons et disperser la boue de particules C18
Pompe à seringue 22	Appareil de Harvard	552222	La micropompe est utilisée pour le chargement, le rinçage et l’élution de l’échantillon et de l’enzyme sur et depuis le microréacteur capillaire à garnissage
Système d’eau ultrapure Milli-Q	EMD Millipore	ZD5311595  ;	Le système d’eau MilliQ est utilisé pour préparer de l’eau DI purifiée
Pipettor/Eppendorf (1 000  ; et micro ; l)	VWR	53513-410	La pipette est utilisée pour mesurer de petits volumes de solutions d’échantillons
Pipettor/Eppendorf (100  ; et micro ; l)	VWR	53513-406	La pipette est utilisée pour mesurer de petits volumes de solutions d’échantillons
Pipettor/Eppendorf (10  ; et micro ; l)	VWR	53513-402	La pipette est utilisée pour mesurer de petits volumes de solutions d’échantillons
Capillaire en silice fondue (100 & micro ; m ID x 360 & micro ; m OD)	Polymicro Technologies	TSP100375	Ce capillaire est utilisé pour la fabrication du microréacteur
Capillaire en silice fondue (20  ; et micro ; m ID x 100 & micro ; m OD)	Polymicro Technologies	TSP020090	Ce capillaire est utilisé pour la fabrication de l’émetteur ESI
Capillaire en silice fondue (50  ; et micro ; m ID x 360 & micro ; m OD)	Polymicro Technologies	TSP050375	Ce capillaire est utilisé pour transférer les échantillons et l’éluant de la pompe à seringue au microréacteur capillaire
Couperet capillaire en verre	Supelco	23740-U	Il s’agit d’un outil permettant de couper les capillaires en silice fondue à la longueur souhaitée
Colle	Eclectic Products	E6000 Craft	Cette colle est utilisée pour fixer l’émetteur ESI dans le microréacteur capillaire ou la puce microfluidique
Colle époxy	Epo-Tek	353NDT	Cette colle est utilisée pour sceller le trou d’entrée microfluidique par lequel les particules de C18 sont chargées
Particules de C18 en phase inverse (5  ; et micro ; m)	Agilent Technologies	Zorbax 300SB-C18	Il s’agit de particules C18 sur lesquelles les protéines sont adsorbées ; les particules ont été extraites d’un 4  ; mm x 20 cm C18 LC colonne en
seringue/verre Agilent (250 & micro ; l)	Hamilton	81130-1725RN	Les seringues en verre sont utilisées pour charger la suspension de particules de C18 dans le microréacteur capillaire et pour livrer l’échantillon et les éluants au microréacteur
réductrice interne PEEK (1/16 » à 1/32 »)	Valco	ZRU1.5FPK	Ce raccord est utilisé pour connecter les 250 & ; micro ; l seringue au microréacteur pour charger le 5 & micro ; Raccord en
acier inoxydable (1/16")	Valco	ZU1XC	L’union en acier inoxydable est utilisée pour connecter l’aiguille de la seringue en verre au
connecteur en T Microvolume PEEK capillaire à perfusion (1/32")	Valco	MT.5XCPK	Le té Peek est utilisé pour connecter le capillaire de transfert d’échantillons au microréacteur capillaire ; sur son bras latéral, il permet l’insertion du connecteur en T du fil Pt
(poids léger)	Valco	C-NTXFPK	Ce connecteur en T est utilisé pour appliquer une tension ESI à la puce microfluidique par le biais de la ligne de transfert d’échantillons
Fil Pt (0,404 mm)	VWR	66260-126	Le fil Pt fournit une connexion électrique pour la génération d’ESI et est connecté au tube PTFE d’alimentation du spectromètre de masse ESI
(1/16" OD)	Valco	TTF115-10FT	Le tube en téflon est utilisé pour permettre une connexion étanche à l’air entre l’aiguille de la seringue et le raccord en acier inoxydable.
Tube PEEK (0,015" ID x 1/16 po OD)	Upchurch Scientific	1565	Le tube Peek est utilisé comme manchon pour permettre une connexion étanche à l’air entre le raccord en acier inoxydable et le 50  ; et micro ; Tube PEEK capillaire de transfert m ID
(0,015" ID x 1/32 po OD)	Valco	TPK.515-25	Le tube Peek est utilisé comme manchon pour permettre une connexion sans fuite entre les capillaires en silice fondue et le
coupe-tube en polymère Peek Tee Clean-cut	Valco	JR-797	Ce coupe-tube est utilisé pour pré-découper les 1/16" et 1/32' Tube en polymère Peek qui est utilisé comme manchon pour des connexions étanches en morceaux de ~4-5 cm de longueur
Flacon ambré (2 ml)	Agilent  ;	HP-5183-2069	Les flacons sont utilisés pour préparer des solutions d’échantillon et la suspension de particules C18.
Flacon ambré (4 ml)	VWR	66011-948	Les flacons sont utilisés pour préparer des solutions d’échantillons
Tube en polypropylène (15  ; ml)	Fisher	12-565-286D	Les flacons sont utilisés pour préparer des solutions tampons
Cylindre (100 ml)	VWR	24710-463	Le cylindre est utilisé pour mesurer les volumes de solvant
Cylindre (10 ml)	VWR	24710-441	Le cylindre est utilisé pour mesurer les volumes de solvant
Pointes de pipette (1 000 & micro ; l)	VWR	83007-386	Les pointes de pipette sont utilisées pour mesurer de petits volumes de solutions d’échantillon
Pointes de pipette (100 µ ; l)	VWR	53503-781	Les pointes de pipette sont utilisées pour mesurer de petits volumes de solutions d’échantillon
Pointes de pipette (10 & micro ; l)	VWR	53511-681	Les pointes de pipette sont utilisées pour mesurer de petits volumes de solutions d’échantillons
Substrats en verre	Nanofilm	B270 couronne blanche, 3 » x 3 »	Il s’agit de substrats en verre pour la fabrication de micropuces
Raccord à écrou mâle (1/16")	Upchurch	P203X	Ce raccord est utilisé pour connecter les capillaires de transfert à la puce microfluidique
Assemblage de nanoports	Upchurch	N-122H	Ce raccord est utilisé pour connecter les capillaires de transfert à la puce microfluidique
Étalons de protéines	Sigma	Multiple #
Acetonitrile, qualité HPLC	Fisher	A955
Méthanol, qualité	HPLCFisher	A452
Isopropanol, grade HPLC	Sigma	650447
Acide trifluoroacétique	Sigma	302031
Bicarbonate d’ammonium	Aldrich	A6141
Trypsine, grade de séquençage	Promega	V5111