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Article de méthode

Induction de la mère Immune Activation chez la souris à mi-gestation scène avec Viral Mimic Poly (I: C)

19.4K vues

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DOI :

10.3791/53643

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25 mars 2016

 ,  , 

* These authors contributed equally

Dans cet article

Résumé

L’activation immunitaire maternelle (MIA) est un modèle pour un facteur de risque environnemental de l’autisme et de la schizophrénie. L’objectif de cet article est de fournir une procédure étape par étape sur la façon d’induire une MIA chez les souris enceintes afin d’améliorer la reproductibilité de ce modèle.

Résumé

Le modèle d’activation immunitaire maternelle (AMI) est de plus en plus apprécié comme modèle de rongeur pour le facteur de risque environnemental de divers troubles psychiatriques. De nombreuses études ont démontré que le modèle MIA est capable de montrer la valeur faciale, conceptuelle et prédictive qui sont pertinentes pour l’autisme et la schizophrénie. Pour modéliser l’AIM, les chercheurs utilisent souvent l’imitation virale polyinosinique :acide polycytidylique (poly(I :C)) pour activer le système immunitaire chez les rongeurs enceintes. Généralement, la progéniture de la digue activée par le système immunitaire présente des anomalies comportementales et des altérations physiologiques associées à l’autisme et à la schizophrénie. Cependant, l’injection poly(I :C) avec différents dosages et à différents moments pourrait conduire à des résultats différents en perturbant le développement du cerveau à différents stades. Nous présentons ici une méthode détaillée pour induire une MIA par injection intrapéritonéale (i.p.) de 20 mg/kg de poly(I :C) à 12,5 jours embryonnaires au milieu de la gestation (E12.5). Il a été démontré que cette méthode induit une réponse inflammatoire aiguë dans l’axe mère-placentaire-fœtal, ce qui entraîne finalement les perturbations cérébrales et les phénotypes comportementaux associés à l’autisme et à la schizophrénie.

Introduction

Le concept de l' activation immunitaire maternelle (MIA) provient des études épidémiologiques sur l'association de l' infection maternelle avec l' autisme et la schizophrénie 1. En raison de l'absence d'agents pathogènes viraux replication détectables dans le placenta ou le cerveau du fœtus après l' infection virale de la mère 2,3, l'effet de l'infection sur la descendance est supposée être provoquée par l'activation du système immunitaire maternel plutôt que les agents pathogènes eux - mêmes .

Pour élucider la relation et de cause à effet entre MIA et les troubles psychiatriqu....

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Protocole

Tous les protocoles ont été réalisées sous l'approbation du California Institute of Care Committee et l'utilisation des animaux Institutionnel Technologie (IACUC).

1. Préparation des paires Timed-accouplement

  1. Utilisez au moins 6 barrages pour des expériences comportementales et 3 pour l'analyse de l'expression des gènes.
    REMARQUE: Utilisez le double du nombre de souris femelles estimés, puisque seulement environ 50% des souris sera branché du chronométré-accouplement.
  2. Utilisez la souris femelle sans grossesse préalable et à 8-16 semaines d'âge.
    NOTE: Des souris femelles qui ont une ex....

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Résultats

L' injection de 20 mg / kg de poly (I: C) à E12.5 pourrait provoquer une réponse inflammatoire aiguë dans l'axe de la mère-placentaire fœtal et précipiter un effet chronique au développement du cerveau et de phénotypes comportementaux 12,13. Des niveaux élevés d'une cytokine pro-inflammatoire, l'interleukine (IL) -6, est un indicateur fiable de la réponse inflammatoire aiguë après MIA. Le temps de pointe pour l' expression du gène IL6 dans le.......

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Discussion

MIA induction à différentes fenêtres de temps perturbe différents événements de développement du cerveau chez les rongeurs, et conduit par conséquent à différentes anomalies comportementales et neuropathologies chez la progéniture. Ici, nous avons décrit un protocole pour induire MIA chez la souris avec le poly (I: C) injection à E12.5. Cette méthode de MIA conduit à l' induction de comportement, neurologiques, immunologiques et des anomalies gastro - intestinaux associés à l' autisme et la schizophrénie chez la.......

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Déclarations de divulgation

Les auteurs n’ont rien à divulguer.

Remerciements

Nous tenons à rendre hommage à feu le Dr Paul H. Patterson pour sa contribution à l'avancement du modèle MIA, l'autisme et la recherche sur la schizophrénie. Nous reconnaissons Sarkis K. Mazmanian pour son grand soutien sur ce protocole; Ruben M. Bayon, Yvette Garcia-Flores, Karen C. Lencioni et Leslie A. Neumann d'assistance administrative; Ali Khoshnan et Jan C. Ko pour l'assistance sur le tournage; Elaine Y. Hsiao et Natalia Malkova pour leurs conseils sur MIA induction; Jeffrey S. Cochrane, Joaquin Gutierrez, Kwan F. Lee, Jaime Rodriguez, Lorena C. Sandoval, et Natalie A. Verduzco pour leur élevage expert. Ce travail a été soutenu par le Conte Centre Award NIH (NIH 5P....

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Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article
NomEntrepriseNuméro de catalogueCommentaires
Polyinosinique&ndash ; sel de potassium d’acide polycytidyliqueSIGMAP9582
0,9 % chlorure de sodium INJ. USPHOSPIRANDC 0409-4888-10
MONOJECT insuline syrinage 3/10 ml 29 G x 1/2"COVIDIEN8881600145
50 ml tubes coniques à visUSA SCIENTIFIC1500-1211
Spectrophotomètre Nanodrop 1000THERMO SCIENTIFIC1000Stéréomicroscope en option
Wild HeerbruggM5A
Pince Dumont #5 en option Taille de la pointe .10 x .06 mmRobozRS-5045en option
Réactif de stabilisation de l’ARN ARNlateren option Qiagen76104
Réactif TRIzolen option Life Technologies15596-026  ;optionnel
DNase sans RNASE RQ1PromegaM610A
Kit de synthèse d’ADNc iScriptBio-Rad170-8891
FastStart universal SYBR green master mix en option avec ROX  ;Roche4913922001en option
PCR en temps réelABI7300Introduction en option
: Il6 forwardLife TechnologiesTAGTCCTTCCTACCCCAATTTCCEntrée en option
: Il6 ReverseLife TechnologiesTTGGTCCTTAGCCACTCCTTCAmorce en option
: bêta-actine forwardLife TechnologiesAGAGGGAAATCGTGCGTGACEn option
Amorce : bêta-actine ReverseLife TechnologiesCAATAGTGATGACCTGGCCGT
Plaque de réaction optique à 96 puits MicroAmpTechnologies4306737
Optionl MicroAmp film adhésif optique  ;Life Technologies4311971Optionl
EthoVisionNoldusEthoVisionOptionl
Appareil SR-LAB (PPI)San Diego Instruments  ;SR-LABOptionl
MarbresPENN-PLAXPierres précieuses bleues marbresOptionl
Dulbecco’s Phosphate-Buffered Saline (DPBS)Life Technologies21600-069Optionl
ParaformaldéhydeMACRON2621-59Optionl
VibratomeLeicaVT1000 SOptionl
Azoture de sodiumSigmaS2002Optionl
Triton x-100SigmaX100Optionl
Solution de peroxyde d’hydrogèneSigma18312Optionl
Sérum de chèvreVector LaboratoriesS-1000Optionl
Rabbit anti-calbindineanticorps Abcamab11426Optionl
Chèvre biotinlysée anti-lapin IgGantibodyVector LaboratoriesBA-1000Option
VECTASTAIN ABC KitVector LaboratoriesPK-4000Option
en option en option Life

Références

  1. Brown, A. S. Epidemiologic studies of exposure to prenatal infection and risk of schizophrenia and autism. Dev Neurobiol. 72 (10), 1272-1276 (2012).
  2. Fatemi, S. H., et al.

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Réimpressions et autorisations

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