Déclaration d'éthique: Les procédures impliquant des participants humains ont été approuvés par les droits de l'éthique de la recherche des participants Comité / Conseil d'examen institutionnel à l'Academia Sinica, Taiwan.
1. Stimuli et Expérimentale Préparation du programme
- Préparer un bassin de plus de 60 photographies de face émotionnelles 29 classées en trois expressions faciales ( en colère, heureux, et neutre). Utilisez un logiciel graphique pour masquer les parties de cheveux et de l' oreille dans les photographies avec un fond noir comme le montre la figure 1A afin que les participants puissent se concentrer sur les traits du visage dans les photographies.
- Ouvrez une photo dans le logiciel graphique. Utilisez la boîte à outils de sélection pour dessiner une région elliptique et ajuster la taille de la région de sorte que les oreilles et les cheveux les plus ne tombent pas dans l'ellipse.
- Inverser la région sélectionnée. Cliquez sur "Supprimer" pour supprimer la région non désirée de la photographie et le remplacer par la couleur de fond noir.

Figure 1. Exemples de stimuli faciaux émotionnels. (A) faces photographie où les cheveux et les oreilles ont été masqués dans la couleur de fond noir, et (B) ligne dessin visages qui sont édités à partir de (A) par le logiciel graphique. Les visages montrent des émotions neutres, heureux, et en colère , respectivement de haut en rangées inférieures. S'il vous plaît cliquer ici pour voir une version plus grande de cette figure.
- Créer une étude pilote. Recruter les participants pilotes pour la sélection des stimuli appropriés à partir du pool de photographie.
Note: Les participants pilotes ne devraient pas participer à l'expérience EEG. - Configurer le programme de présentation du stimulus en commençant par le premier écran d'ordinateur présentant la tâche instruction, suivie par 5 familessais de iarization. Commencez chaque essai avec une croix de fixation, suivi par un stimulus de visage, et par une équipe d'évaluation de l'émotivité. Voir code supplémentaire Fichier pour un exemple de programme.
Note: Les vrais essais pilotes suivent immédiatement les essais de familiarisation en sélectionnant des photos de visage dans un ordre aléatoire de la piscine. - Créer un programme expérimental, y compris les écrans d'instruction et un écran central eye-fixation. Créer l'écran de stimulation de visage comme illustré sur la figure 2 en configurant la taille de la photo pour 18,3 x 24,4 cm 2 (largeur x hauteur) avec la couleur de fond noir, étant donné la taille de l' écran d'ordinateur 41 x 25,6 cm 2 avec une résolution 1680 x 1050. Voir code supplémentaire Fichier pour un exemple de programme.
- Créer un système de notation pour l' évaluation de l' émotivité dans le programme , comme illustré sur la figure 3. Placez une ligne horizontale allant de -100 à 100 dans une échelle continue dans le centre de l'écran without des graduations, sauf pour la centrale et les paramètres. Préparer le programme de telle sorte que les participants puissent évaluer librement l'émotion d'un visage de photographie en faisant glisser le curseur de pointage vers la gauche pour très en colère (-100) et à droite pour très heureux (+100), et appuyez sur le bouton GO.
Note: La ligne de notation est conçu sans graduations parce que les patients avec AS peuvent facilement se coincer à placer le curseur entre les tiques lors de l'évaluation de l'émotivité. Par conséquent, une échelle continue est préférée pour les patients. - Assurez - vous que le programme enregistre des résultats du comportement d'un participant (par exemple , le temps de réaction et les scores de émotionnalité), qui sont utilisés comme critères pour le choix des photographies de la piscine (voir étape 1.3.1).
- Recruter les participants pilotes (5 de contrôle et 5 participants AS pilotes). Diagnostiquer patients cliniques selon Gillberg 30 et les critères du DSM-IV 26 et administrer le court-forme clinique dérivé de Wechsler pour adultes Intelligence Scale (WAIS-III) 31. Faites correspondre les contrôles à leurs homologues AS aussi étroitement que possible sur le sexe, et verbale / performances scores de QI.
- Exécutez la procédure expérimentale dans l'étude pilote pour chaque participant. Après avoir terminé la tâche émotionnelle de reconnaissance de visage, interviewer chaque pilote AS participant sur la durée raisonnable des périodes de fixation des yeux central et la présentation du stimulus, de la difficulté de la tâche, la facilité d'utilisation du système de notation et le nombre maximum d'essais pour garder son / sa la concentration, sur la base desquelles le programme peut être reconfiguré pour l'expérience EEG (voir l'étape 1.3.2)

Figure 2. Une capture d' écran d'un stimulus de visage dans le programme. La taille de la face est configuré pour correspondre à la hauteur de l'écran. La zone vide est rempli avec la couleur noire.télécharger / 53962 / 53962fig2large.jpg "target =" _ blank "> S'il vous plaît cliquer ici pour voir une version plus grande de cette figure.

Figure 3. Une capture d' écran du système de notation pour l' évaluation de l' émotivité. La barre de notation est conçu pour avoir aucune coche. Le participant doit faire glisser la souris pour sélectionner la note attribuée à une face et appuyez sur le bouton GO pour terminer la tâche. S'il vous plaît cliquer ici pour voir une version plus grande de cette figure.
- Programme pour la tâche 1: Photograph session.
- Choisissez parmi la piscine 30 photographies, comprenant 10 chacun pour les expressions du visage heureux, en colère, et neutres (5 mâles et 5 femelles faces pour chaque type d'expressions), qui donnent les moments les plus comparables de réaction moyenne et moyenne des scores de émotionnalité entre le 5 AS et 5 participants au projet pilote de contrôle.
- Mettre à jour les configurations de programme expérimental en incorporant les réactions des patients pilotes, comme la période centrale oculaire fixation optimale ( par exemple, 1 000 ms), durée de l' impulsion de présentation ( par exemple 1000 ms), l' intervalle entre stimuli ( par exemple, répartis de façon aléatoire dans -entre 4 et 7 sec), et à l' échelle du système de notation (ie, -100 à 100). Ajouter cinq essais de familiarisation avant les 30 essais expérimentaux dans le programme.
- Modifier le nombre de stimuli et des intervalles de temps dans un fichier externe de texte de configuration associé au programme expérimental.
Remarque: Le fichier texte peut être modifié pour adapter à différentes conditions expérimentales sans intervention des ingénieurs logiciels. - Ne pas compter les cinq photographies pour les essais de familiarisation aux 30 photographies sélectionnées. Ne pas utiliser les électroencéphalogrammes et les données comportementales enregistrées dans les essais de familiarisation dans l'analyse des données.
- Programme fou Tâche 2: Ligne-dessin Session.
- Créer des images de ligne de dessin des 35 photographies (5 pour les essais de familiarisation, 30 pour les essais expérimentaux) utilisés dans la tâche 1 en traçant les bords de chaque face. Utilisez un logiciel graphique pour modifier les images d'échelle de gris en dessins au trait en noir et blanc comme le montre la figure 1B.
Remarque: Les étapes ci-dessous pour l'édition de photo est l'une des solutions possibles pour la fabrication de dessins au trait. - Dans le logiciel graphique, régler la luminosité / contraste de la photo de telle sorte que l'original intensité d'échelle de gris dans les pixels de la majorité tombe en noir ou blanc.
- Appliquer "effet sketch" dans l ' "effet" ou le menu "Filtre" du logiciel pour une photographie d'échelle de gris de sorte que seul le contour de la partie haute fréquence spatiale est préservée, et d'appliquer «l'effet de détresse" pour augmenter la dilatation des lignes de contour .
- Utilisez un outil pinceau pour rehausser les contours et d'utiliser un outil gomme pournettoyer les parties non désirées. Assurez-vous de garder les traits du visage importants en vérifiant et-vient entre la photographie originale et son homologue de la ligne de dessin.
- Faites une copie du programme de la tâche 1 dans l'étape 1.3 pour créer un programme pour la tâche 2 et remplacer les 35 photographies Tâche 1 avec les dessins au trait correspondants.
2. Procédure d'enregistrement EEG
- Les préparatifs
- Recruter 10 témoins sains et 10 patients avec AS pour des expériences EEG sur la base des lignes directrices de l'éthique de la recherche en participant humain comité local / Institutional Review Board.
- Administrer le court-forme de WAIS-III 31 aux patients avec AS individuellement avant les expériences, et de trouver les commandes qui correspondent aux patients aussi étroitement que possible sur le genre et sur les scores de QI / performance verbale.
- enregistrement EEG
- Siège du participant dans un fauteuil confortable dans un insulate sond (faiblement éclairé) chambre et régler la position de la chaise de telle sorte que l'écran d'ordinateur est de 60 cm en face du participant. Après un tutoriel sur la procédure expérimentale, ont le participant de remplir les formulaires de consentement ainsi que quelques questions sur sa / son impartialité.
- Utilisez un bouchon EEG avec 132 électrodes Ag / AgCl (y compris 122 10-10 système EEG, et l'VEOG bipolaire, HEOG, ECG, électrodes EMG, ainsi que six canaux facial-musculaires) pour enregistrer EEGs. Branchez le bouchon à deux amplificateurs 64 canaux avec 0,1-100 Hz analogique filtre passe-bande pour numériser EEGs premières à 1000 le taux d'échantillonnage de Hz.
- Monter le 128-canal EEG bouchon standard à la tête de chaque participant. Ajuster le capot de telle sorte que l'électrode étiqueté "référence" est placé à la position "Cz", qui est situé par rapport aux repères de la ligne médiane antérieure / postérieure (c. -à- milieu de la nasion à distance de inion), et à gauche / repères droite (c. -à- milieu de la tragis gauche / droite), d' après le EEG système international 10/10.
- utiliser doucement une aiguille émoussée pour injecter un gel conducteur dans toutes les électrodes. Remuer avec l'aiguille lentement à l' intérieur de l'électrode pour assurer un bon contact de gel entre le cuir chevelu et l'électrode (ie, pour maintenir l'impédance inférieure à 5 kQ). vérifier en permanence la condition de contact de gel au niveau des électrodes étiquetés «de référence» et «terre» sur le bouchon EEG pour vous assurer que la mesure d'impédance est correcte.
- Observer l'impédance de l' électrode en regardant l'écran d'impédance d'électrode supportée par le logiciel d'enregistrement EEG (par exemple SCAN 4.5 dans cette étude) qui va généralement avec le système EEG. Sur l'écran, les électrodes sont représentées dans des couleurs et différentes couleurs indiquent les niveaux d'impédance.
- Placer une électrode de HEOG au niveau du canthus de l'œil (site positif), et la seconde électrode au niveau du canthus de l'autre oeil (site négatif), une électrode de VEOG ci-dessus et l'autre au-dessous du loeil auche, électrodes ECG bipolaires sur le dos des électrodes EMG bipolaires mains gauche et droite, et dans la zone située entre le pouce et l'index de la main droite, et les six électrodes du visage autour du sourcil et la joue.
- Enregistrer dans un cahier ces mauvais canaux dans lesquels l'impédance est supérieure à 5 kQ, ou directement enregistrer l'impédance d'écran montrant à toutes les électrodes. Utilisez cette référence future pour rejeter les mauvais canaux à l'étape du traitement des données EEG.
- Enregistrez EEGs d'état de repos après l'instruction au participant de fermer les yeux pendant 12 min. Pendant ce temps, vérifier doublement la qualité du flux d'EEG instant montré sur l'écran pris en charge par le logiciel d'enregistrement EEG.
Note: Il devrait y avoir des ondes alpha claires distribuées dans les canaux occipitales pendant la condition des yeux-fermés par rapport à l'état des yeux ouverts. Si les ondes alpha sont trop bruyants (en ignorant les mauvais canaux) ou déformée, revenir à l'étape 2.2.4 et régler le contact de gel. - Démarrez les deux tâches expérimentales dans un ordre de contre-équilibrée entre participants. EEGs Record en cliquant sur l'icône d'enregistrement sur l'écran pris en charge par le logiciel d'enregistrement.
- Après avoir lu la tâche instructions affichées à l'écran, demandez à chaque participant effectue les 5 essais de familiarisation, suivis par les essais 30 de la tâche. Utilisez la même procédure pour les photographier et les tâches de ligne de dessin. Dans la tâche instruction, encourager les participants à attribuer une note à l'émotivité d'un stimulus de visage aussi vite que possible.
- IMPORTANT: Vérifiez les programmes préparés dans les étapes 1.3.2 et 1.4.2 pour l'envoi d'événements correctement le temps verrouillé à l'apparition de l'œil-fixation centrale, face à la présentation du stimulus, et en appuyant sur le bouton GO pour le logiciel d'enregistrement lors de l'évaluation de l'émotivité. Ces temps d'apparition sont codés comme numérique et peuvent être vérifiés sur l'écran pris en charge par le logiciel d'enregistrement.
Remarque: Le participant peut prendre une pause entre les deux tâches. Il n'y a pas EEG reCording pendant la pause.
- Utilisez un numériseur (par exemple , le numériseur Polhemus FASTRAK 3D dans cette étude) pour enregistrer les positions 3D des électrodes et de l' enregistrer dans un fichier (par exemple .3dd ou fichier .dat) pour les bouchons EEG co-enregistrement à travers les participants à l' analyse des données.
- Après l'expérience EEG, ont le participant de remplir un inventaire de 35 questions sur son / ses comportements et sentiments pendant l'expérience EEG (par exemple, avoir des émotions négatives, presque tombé dans le sommeil), et de leur fournir le paiement pour participer à l'expérience.
- Amener le participant aux toilettes pour nettoyer / sécher son / ses cheveux.
- Nettoyez et stérilisez le bouchon EEG selon les instructions cliniques.
3. Traitement des données EEG
Remarque: Les commandes logicielles fournies dans cette section sont spécifiques pour EEGLAB.
- Filtrer les signaux EEG à l'aide d'un filtre passe-haut de 1 Hz et un filtre passe-bas de 50 Hz en appelant lefonction pop_eegfilt.m 32.
Remarque: Utilisez un filtre passe-bas de 40 Hz pour certains pays qui ont 50 Hz fréquence du réseau électrique - Jeter mauvais canaux avec impédance supérieure à 5 kQ après vérification de l'impédance de l'électrode enregistrée à l'étape 2.2.6. Jeter ces mauvais canaux avec spectre de puissance très différente par rapport aux canaux voisins par inspection visuelle des caractéristiques du spectre de puissance (par exemple, la valeur maximale, la courbure, etc.) dans chaque canal.
- Calculer et tracer le spectre du signal EEG de puissance en appelant la fonction de pop_spectopo.m 32.
- Re-référencer les signaux EEG avec la moyenne des canaux du cerveau sans les mauvais canaux en appelant la fonction de pop_reref.m.
- EEGs sectoriels dans les époques de relance sans littoral, dont chacun varie de -2.0 sec avant à 1,5 sec post-début du stimulus. Correct pour la ligne de base (-2,0 à -1,2 sec avant le début du stimulus) en supprimant la moyenne des valeu de basees de chaque époque.
- Appelez les fonctions pop_epoch.m et pop_rmbase.m, respectivement. Choisissez l'intervalle de référence avant la période eye-fixation centrale et le début du stimulus de visage.
- Marquer les mauvaises époques qui semblent contenir des artefacts. Jeter les mauvaises époques tout en se réservant les époques contaminées par des clignements d'yeux. Les époques avec des artefacts regardent habituellement bruyants ou ont une valeur de crête extrêmement élevé (par exemple supérieur à 100 mV) par rapport aux époques typiques.
- Appelez la fonction pop_rejmenu.m de lancer une procédure semi-automatique. Une fenêtre d'interaction va sortir de re-confirmer les mauvaises époques auto-sélectionné par l'utilisateur via une inspection visuelle. Bien que la majorité des époques sont contaminés par des clignements d'yeux, ces époques peuvent être provisoirement réservées pour le retrait ultérieur par une analyse en composantes indépendantes (ICA) 33 à l' étape 3.8.
- Après avoir jeté les mauvais canaux et les mauvaises époques, exécutez ICA sur les données EEG élagués en utilisant le pop_runifonction ca.m.
- Parmi les composantes estimées indépendantes (CI), identifier les artefacts résultant du mouvement des yeux / blink, l' activité musculaire, le rythme cardiaque, et le bruit de la ligne 32.
Note: Une corrélation significativement élevée (R 2> 0,9) entre IC scores d'un composant et ceux de tous les canaux de référence (VEOG, HEOG, ECG, et les canaux du visage) indique que cette composante est principalement contribué par des artefacts. Les scores IC estimés expliqués par les artefacts peuvent être nettoyés à l'aide de l'analyse de régression multiple. - Retirer CI d'artefacts et d'estimer les EEGs propres qui sont dérivés par le produit de l'ICA de mélange matrice et IC matrice de score d'artefact nettoyé. Save the EEGs propres pour une analyse plus approfondie.
- Garder les résidus de prédiction de circuits intégrés d'artefacts (R 2> 0,9) de la référence VEOG, HEOG, ECG et les canaux du visage dans la matrice de score IC. Retirez les autres circuits d'artefact par la fonction pop_subcomp.m. La fonction retourne les EEGs artefacts nettoyés.
4. Analyse statistique
- canaux Partition EEG dans des régions homogènes de onze pour réduire le nombre de comparaisons statistiques en ERP et ERSP analyse, qui est, gauche (10 canaux), midline- (14), et à droite-frontal (10); gauche (13) et à droite temporelle (13); gauche (9), midline- (14) et le centre-droit (9); gauche (9), midline- (12) et à droite-occipitale pariétale (9) comme le montre la figure 4. Ces régions sont définies en fonction de l'anatomie fonctionnelle du cortex 34. Homogénéité fonctionnelle des signaux EEG dans ces régions a été validé dans différentes expériences 13,35,36.

Figure 4. La partition de canal. Les canaux sont divisés en onze régions. LF:-frontal gauche (10 canaux), MF: midline-frontal (14), RF: droit frontal (10), LT: gauche-temporelle (13), RT: droit temporel (13), LC: gauche-centrale (9), MC: midline-central (14), RC: central droit (9), LP: pariétale gauche-occipitale (9), MP: pariétale midline-occipitale (12), RP :. pariétale droite-occipitale (9) S'il vous plaît cliquer ici pour voir une version plus grande de cette figure.
- Chargez les EEGs propres à l'étape 3.8. Calculer l'ERP de canal en calculant la moyenne des signaux à travers les époques dans chaque canal, et ERP régionale en faisant la moyenne ERPs dans la même région.
Note: Lorsque EEGs sont chargés à l'aide de la fonction pop_loadset.m dans EEGLAB, les signaux sont stockés dans la structure variable "EEG.data" dans un tableau canal par temps par époque. - Dans la fenêtre de commande Matlab, calculer l'ERP de canal en faisant la moyenne EEG.data à travers les époques pour chaque canal (par exemple, channelERP = moyenne (EEG.dat, 3)). Calculer l'ERP régionale en faisant la moyenne des ERPs de canal au sein de chaque région en fonction de la partition en 4.1 (par exemple, regionalERP = moyenne (channelERP (index, :), 1), où "index" représente les indices de canal dans une région donnée).
- Calculer les ERSPs de canal en appliquant une transformée temps-fréquence (par exemple transformée en ondelettes) à epoch signaux dans chaque canal, et ERSPs régionaux en faisant la moyenne canal ERSPs dans la même région.
- Effectuer le temps-fréquence transformée en appelant la fonction de pop_newtimef.m.
Remarque: Dans cette étude, le "cycles ondelettes" entrée est réglé sur [1, 0,5] et "de base" est réglé sur [-2000 à -1200] msec. Les ERSPs de canal résultant seront stockés dans un tableau de fréquence par le temps par canal. - Dans la fenêtre de commande Matlab, calculer la ERSP régionale en faisant la moyenne ERSPs à travers des canaux dans chaque région en fonction de la partition en 4.1 (par exemple, regionalERSP = moyenne (channelERSP (:,:, index), 3), où "channelERSP" est la sortie de la fonction pop_newtimef.m et "index" représente les indices de canal dans agrégion Iven).
- Calculer les valeurs moyennes dans différents intervalles de temps (par exemple 50-150, 150-250, 250-350, 350-450 msec) pour ERPs régional. Calculer les valeurs moyennes dans différents intervalles temps-fréquence (par exemple 50-150, 150-250, 250-350, 350-450, 450-800 msec 1-7 Hz et 200-800 msec à 8-30 Hz) pour la région ERSPs.
- Appliquer MANOVA dans le logiciel statistique (par exemple IBM SPSS) pour les valeurs moyennes des ERPs régionales et ERSPs pour évaluer les effets principaux de la tâche (photographie vs. dessin au trait), la région (onze régions du cuir chevelu), et le groupe (AS vs contrôle) ainsi que les effets de l'interaction entre la tâche, de la région et du groupe.
- Dans l'analyse statistique, tenir compte du sexe (hommes vs femmes) comme covariable, et d'estimer les principaux et l'interaction des effets en tenant la constante d'effet de genre.