Le nerf fibulaire Méthode Blessure: Un test fiable pour identifier et tester les facteurs qui réparation neuromusculaires Jonctions

Résumé

Nous avons développé une méthode de lésion nerveuse pour examiner de manière fiable la réinnervation musculaire, et donc la régénération des jonctions neuromusculaires chez la souris. Cette technique consiste à lézarder le nerf fibulaire commun via une chirurgie simple et hautement reproductible. La réinnervation musculaire est ensuite évaluée par montage entier du muscle long extenseur des doigts.

Résumé

La jonction neuromusculaire (JNM) subit des changements structurels et fonctionnels délétères en raison du vieillissement, les blessures et la maladie. Ainsi, il est impératif de comprendre les changements cellulaires et moléculaires impliqués dans le maintien et la réparation des NMJs. A cet effet, nous avons développé une méthode pour examiner de manière fiable et constante régénération NMJs chez la souris. Cette méthode de lésion du nerf implique l'écrasement du nerf fibulaire commun, car elle passe au-dessus de la tête latérale du tendon du muscle gastrocnémien près du genou. Utilisation de vieilles souris femelles 70 jours, nous démontrons que les axones moteurs commencent à reinnervate cibles postsynaptiques précédents dans les 7 jours après l'écrasement. Ils réoccuper complètement leurs zones synaptiques précédents en 12 jours. Pour déterminer la fiabilité de cette méthode de blessure, nous avons comparé les taux de réinnervation entre 70 jour vieilles souris femelles individuelles. Nous avons constaté que le nombre de sites postsynaptiques réinnervé était similaire entre les souris à 7, 9, et 12 jours après l'écrasement. Pour déterminer sicet essai de lésion peut également être utilisé pour comparer les changements moléculaires dans les muscles, nous avons examiné les niveaux de la sous-unité gamma du récepteur nicotinique musculaire (gamma-AChR) et la kinase spécifique du muscle (MuSK). La sous-unité gamma-RACh et MuSK à sont fortement surexprimés dénervation suivant et revenir à des niveaux normaux après réinnervation des NMJs. Nous avons trouvé une relation étroite entre les niveaux de transcription de ces gènes et de l'état de l'innervation des muscles. Nous croyons que cette méthode permettra d'accélérer notre compréhension des changements cellulaires et moléculaires impliqués dans la réparation de la NMJ et d'autres synapses.

Introduction

Chez les jeunes adultes et les animaux en bonne santé, la jonction neuromusculaire (JNM) est une connexion très stable entre la présynapse, la terminaison nerveuse d’un axone α-moteur, et la postsynapse, la région spécialisée d’une fibre musculaire extrafusale où les récepteurs nicotiniques de l’acétylcholine (AChR) s’agrègent sélectivement¹. L’apposition presque parfaite des appareils pré et post-synaptiques est nécessaire à la bonne neurotransmission, à la survie des neurones α-moteurs et des fibres musculaires et à la fonction motrice. Malheureusement, la fonction de la NMJ est affectée négativement par le vieillissement, des maladies telles que la scl....

Protocole

Toutes les expériences ont été réalisées conformément aux directives du NIH et des protocoles d'animaux approuvés par le Comité Tech soin et l'utilisation des animaux institutionnels Virginie.

1. Préparer les animaux destinés à la chirurgie

1. Anesthésier les souris avec un mélange de kétamine (90 mg / kg) et de xylazine (10 mg / kg) par injection sous-cutanée inguinale avec une seringue de 1 ml d'insuline stérile. solution véhiculaire contient un mélange d'une solution saline à 0,9%, 17,4 mg / ml de kétamine et de 2,6 mg / ml de xylazine. Placez les animaux de retour dans des cages en attendant des médicaments à p....

Résultats

Le nerf fibulaire commun, aussi appelé le nerf fibulaire commun, provient du nerf sciatique au- dessus du creux poplité, où il oscille autour de la tête du péroné à la face antérieure de la jambe (figure 1A). Là, il se ramifie en les nerfs fibulaires superficiels et profonds, fournissant ainsi les dorsiflexors du pied et des orteils (anterior tibial, extensor digitorum longus et brevis et hallux extenseurs muscles des orteils), et les everters du pied (muscles péroniers).......

Discussion

La méthode présentée dans ce manuscrit offre des occasions uniques pour identifier les mécanismes impliqués dans la réparation des jonctions neuromusculaires (NMJ). Cette méthode consiste à écraser le nerf fibulaire commun, car elle passe au-dessus du tendon gastrocnémien près du genou. Nous montrons que, après seulement 5 secondes de la compression du nerf avec une pince, la dégénérescence complète est noté par 4 jours après une blessure. Chez les souris jeunes adultes, les axones alpha-moteur commencent à reinnervate .......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Kétamine	VetOne	501072
Xylazine	Lloyd Inc.	003437  ;
Buprénorphine	; Zoopharm	1Z-73000-150910  ;
Nair	Nair
Kim-wipes	Kimtech	34155
Rasoir électrique	Braintree Scientific	CLP-64800
80 % EtOH/H20
10 % Proviodine
1 ml Seringue
insuline Ciseaux	à ressortVannas	91500-09
N° 15 scalpel	Braintree Scientific	SSS 15
#5 Forceps	Dumont	11252-00
6-0 suture en soie sur aiguille de coupe inversée	; Suture Express	752B  ;
Coussin chauffant pour rongeurs	Braintree Scientific	AP-R-18.5
Sondes moléculaires	conjuguées alpha-BTX	B35451
Vectashield	Vector Labs	H-1000
Microscope stéréo zoom Olympus Olympus		562037192
Microscope confocal Zeiss 700	Zeiss
Pompe de perfusion péristaltique à débit variable	Fisher Scientific	13-876-3
Aurum Total RNA Mini Kit	Bio-Rad	7326820
Bio-Rad iScript RT Supermix	Bio-Rad	1708840
SsoFast Evagreen Supermix	Bio-Rad	1725200
Bio-Rad CFX96	Bio-Rad	1855196
Puralube Pommade	vétérinairePuralube	1621
Anticorps anti-Synaptotagmine-2-En	ligne	ABIN401605
Anticorps anticorps de neurofilaments-En	ligne	ABIN2475842

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