Fémur Fenêtre Chambre Modèle pour<em&gt; In Vivo</em&gt; Suivi des cellules dans la moelle osseuse murine

Yonghong Chen; Azusa Maeda; Jiachuan Bu; Ralph DaCosta

doi:10.3791/54205

Un abonnement JoVE est requis pour visualiser ce contenu. Connectez-vous ou commencez votre période d'essai gratuite.

Article de méthode

Fémur Fenêtre Chambre Modèle pour

8K vues

⸱

DOI :

10.3791/54205

⸱

28 juillet 2016

Yonghong Chen^*¹ , Azusa Maeda^*¹^,² , Jiachuan Bu¹ , Ralph DaCosta¹^,²^,³

¹Princess Margaret Cancer Centre, ²Department of Medical Biophysics, University of Toronto, ³Techna Institute, University Health Network

^* These authors contributed equally

Dans cet article

Résumé

Le protocole décrit un nouveau modèle de chambre fenêtre du fémur murin qui peut être utilisé pour suivre le mouvement des cellules dans la moelle osseuse fémorale in vivo. La microscopie à fluorescence multiphotonique intravitale est utilisée pour imager trois composants de la moelle osseuse fémorale (système vasculaire, matrice de collagène et neutrophiles) au fil du temps.

Résumé

La moelle osseuse est un organe complexe qui contient diverses cellules hématopoïétiques et non hématopoïétiques. Ces cellules sont impliquées dans de nombreux processus biologiques, notamment l’hématopoïèse, la régulation immunitaire et la régulation tumorale. Les méthodes couramment utilisées pour comprendre les actions cellulaires dans la moelle osseuse, telles que l’histologie et la numération globulaire, fournissent des informations statiques plutôt que de capturer l’action dynamique de plusieurs composants cellulaires in vivo. Pour compléter les méthodes standard, un modèle basé sur une chambre fenêtre (WC) a été développé pour permettre l’imagerie in vivo en série des cellules et des structures de la moelle osseuse murine. Ce protocole décrit une intervention chirurgicale pour l’installation du WC dans le fémur, afin de faciliter l’accès optique à long terme à la moelle osseuse fémorale. En particulier, pour démontrer son utilité expérimentale, cette approche WC a été utilisée pour imager et suivre les neutrophiles dans le réseau vasculaire du fémur, fournissant ainsi une nouvelle méthode pour visualiser et quantifier le trafic et la régulation des cellules immunitaires dans la moelle osseuse. Cette méthode peut être appliquée pour étudier divers processus biologiques dans la moelle osseuse murine, tels que l’hématopoïèse, la greffe de cellules souches et les réponses immunitaires dans des conditions pathologiques, y compris le cancer.

Introduction

La moelle osseuse est un organe important impliqué dans l'hématopoïèse et la régulation immunitaire. Il se compose d'un composant hématopoïétique contenant des cellules souches et progénitrices hématopoïétiques (hspC), et un composant de stroma contenant des cellules progénitrices non hématopoïétiques qui donnent naissance à des cellules mésenchymateuses ^1. Deux tiers de l' activité hématopoïétique est dédié à la génération de cellules myéloïdes ^2. En particulier, un grand nombre de neutrophiles sont produites dans la moelle osseuse, avec 1-2 x 10 cellules ¹¹ produites par jour chez un humain adulte normal ^2. Le....