L&#39;élevage du Fruit Fly<em&gt; Drosophila melanogaster</em&gt; Sous axéniques et gnotobiotique Conditions

Melinda L. Koyle; Madeline Veloz; Alec M. Judd; Adam C.-N. Wong; Peter D. Newell; Angela E. Douglas; John M. Chaston

doi:10.3791/54219

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Article de méthode

L'élevage du Fruit Fly

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DOI :

10.3791/54219

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30 juillet 2016

Melinda L. Koyle¹ , Madeline Veloz¹ , Alec M. Judd¹ , Adam C.-N. Wong²^,⁴ , Peter D. Newell²^,⁵ , Angela E. Douglas²^,³ , John M. Chaston¹^,²

¹Department of Plant and Wildlife Sciences, Brigham Young University, ²Department of Entomology, Cornell University, ³Department of Molecular Biology and Genetics, Cornell University, ⁴Division of Infectious Diseases, Boston Children's Hospital, Harvard Medical School, ⁵Biological Sciences, SUNY Oswego

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Résumé

Une méthode pour l' élevage Drosophila melanogaster dans des conditions axéniques et gnotobiotiques est présenté. Fly embryons sont dechorionated dans l'hypochlorite de sodium, transférés de manière aseptique à l'alimentation stérile, et élevés dans des récipients fermés. Inoculant régime alimentaire et les embryons avec des bactéries conduit à des associations gnotobiotiques, et la présence bactérienne est confirmée par plaquage du corps entier homogénats drosophile.

Résumé

L’influence des microbes sur une myriade de traits et de comportements animaux a été de plus en plus reconnue ces dernières années. La mouche des fruits Drosophila melanogaster est un modèle permettant de comprendre les interactions microbiennes avec des hôtes animaux, facilité par des approches visant à élever de grandes tailles d’échantillons de drosophile dans des conditions exemptes de micro-organismes (axéniques) ou avec des communautés microbiennes définies (gnotobiotiques). Ce travail décrit une méthode de collecte d’embryons de drosophile, de déchorionisation et de stérilisation à l’hypochlorite, et de transfert dans un régime stérile. Les embryons stérilisés sont transférés dans un régime stérile dans des tubes à centrifuger de 50 ml, et les larves et les adultes en développement restent exempts de tout microbe exogène jusqu’à ce que les flacons soient ouverts. Alternativement, les mouches avec un microbiote défini peuvent être élevées en inoculant un régime stérile et des embryons avec des espèces microbiennes d’intérêt. Nous décrivons l’introduction de 4 espèces bactériennes pour établir un microbiote gnotobiotique représentatif chez la drosophile. Enfin, nous décrivons des approches pour confirmer la composition de la communauté bactérienne, y compris des tests pour savoir si la drosophile axénique reste exempte de bactéries à l’âge adulte.

Introduction

La plupart des animaux sont intimement associés à des bactéries ( «microbiote») de la naissance à la mort ^1. Les comparaisons de ( «classique») des animaux exempts de micro - organismes ( 'axénique') et un micro-organisme associé ont montré microbes influencent divers aspects de la santé animale, y compris métabolique, nutritionnel, vasculaire, hépatique, respiratoire, immunologique, endocrinien, et la fonction neurologique ^2. La mouche des fruits Drosophila melanogaster est un modèle clé pour comprendre un grand nombre de ces processus dans la présence de microbes ^3,4 et pour l' étude microbiote influence sur