Comportements olfactifs dosées par Tracking Computer Of Drosophila Dans un Olfactométre quatre quadrants

Résumé

Nous décrivons ici une configuration comportementale et une méthode d’analyse de données permettant de doser les réponses olfactives de jusqu’à 100 mouches du vinaigre (Drosophila melanogaster). Ce système peut être utilisé avec un ou plusieurs stimuli olfactifs, et adaptable pour l’activation optogénétique ou le silençage de sous-ensembles neuronaux.

Résumé

Un défi majeur en neurobiologie est de comprendre comment les circuits neuronaux fonctionner pour guider les comportements des animaux appropriés. Drosophila melanogaster est un excellent modèle pour de telles enquêtes en raison de ses comportements complexes, techniques génétiques puissants, et le système nerveux compact. Laboratoire des essais de comportement ont longtemps été utilisés avec la drosophile pour simuler les propriétés de l'environnement naturel et d' étudier les mécanismes neuronaux sous - jacents aux comportements correspondants (par exemple phototaxie, chimiotactisme, apprentissage sensoriel et de la mémoire) ^1-3. Avec la récente disponibilité de grandes collections de lignées transgéniques Drosophila qui étiquettent des sous - ensembles de neurones spécifiques, tests comportementaux ont pris un rôle de premier plan pour relier les neurones avec des comportements ^4-11. paradigmes polyvalents et reproductibles, ainsi que les routines de calcul sous-jacentes à l'analyse des données, sont indispensables pour des tests rapides de lignes de mouches des candidats avec divers genotypes. Sont particulièrement utiles les configurations qui sont flexibles dans le nombre d'animaux testés, la durée des essais et la nature des stimuli présentés. Le dosage de choix devrait également générer des données reproductibles qui sont faciles à acquérir et à analyser. Ici, nous présentons une description détaillée d'un système et d'un protocole pour tester les réponses comportementales de Drosophila vole dans une grande arène de quatre champs. La configuration est utilisée ici pour évaluer la réponse de mouches à un seul stimulus olfactif; cependant, la même configuration peut être modifiée pour tester olfactives multiples, des stimuli visuels ou optogénétiques, ou une combinaison de ceux-ci. La configuration de l'olfactomètre enregistre l'activité des populations de mouches répondant aux odeurs, et les méthodes analytiques de calcul sont appliquées pour quantifier les comportements de mouche. Les données recueillies sont analysées pour obtenir une lecture rapide d'un essai expérimental, ce qui est essentiel pour la collecte de données efficace et l'optimisation des conditions expérimentales.

Introduction

La capacité d'adaptation et de répondre à l'environnement extérieur est essentiel pour la survie de tous les animaux. Un animal a besoin pour éviter les dangers, chercher la nourriture et trouver des partenaires, et d'apprendre des expériences précédentes. Les systèmes sensoriels fonctionnent pour recevoir une variété de stimuli, tels que visuelle, chimique et mécanosensorielle, et envoie ces signaux au système nerveux central doit être interprété et décodé. Le cerveau dirige ensuite les comportements moteurs appropriés en fonction de l'environnement perçu, comme la recherche de nourriture ou échapper à un prédateur. Comprendre comment les systèmes sensoriels détectent le monde extérieur, et comment le cerveau décode et dirige les décisions, est un défi majeur en neurobiologie.

Drosophila melanogaster est un système de modèle puissant pour étudier comment neuronal comportements de guidage des circuits. En plus d' être simple et peu coûteux à entretenir, la drosophile présentent de nombreux comportements divers et complexes stéréotypés, mais le faire avec un compact système nerveux d'environ 100.000 neurones. Techniques génétiques puissants existent pour manipuler le génome de la Drosophile, et des milliers de lignées transgéniques ont été générées que sélectivement et de façon reproductible étiqueter les mêmes sous - ensembles de neurones ^10-13. Ces lignées transgéniques peuvent être utilisées pour manipuler sélectivement l'activité des neurones marqués (activer ou inhiber), et ces manipulations peuvent être utilisées pour étudier comment neuronal comportements de guidage des fonctions.

Plusieurs tests comportementaux ont été développés pour étudier divers comportements drosophile. Drosophila, comme beaucoup d' animaux, utilisent leur sens de l' odorat pour guider de nombreux choix de comportement, tels que trouver de la nourriture, trouver copains, et en évitant les dangers. L'olfaction est donc un bon système sensoriel pour étudier comment les stimuli externes sont détectés et interprétés par le système nerveux d'un animal pour guider les choix appropriés. A ce titre, un certain nombre d'essais ont été développés pour Investigating larvaire et les comportements olfactifs adultes. Traditionnellement, les comportements olfactifs chez la drosophile ont été analysés par un paradigme labyrinthe en T à deux choix, qui peut être utilisé pour doser innée et les comportements appris olfactifs ^3. Dans cet essai, environ 50 mouches ont le choix entre deux tubes: un tube contenant l'odeur en question et l'autre contient un odorant de commande (généralement le solvant d'odeur). Les mouches sont donnés une période de temps définie pour faire un choix, puis le nombre de mouches qui sont dans les différentes chambres sont comptées. Bien que le labyrinthe en T est un simple test pour de nombreuses expériences, il existe plusieurs limites. Par exemple, les comportements olfactifs sont évalués à un seul point de temps, et les différents choix effectués avant ce point de temps sont rejetées. De même, les comportements individuels des mouches dans la population sont négligées. En outre, le labyrinthe en T nécessite un comptage manuel des mouches, ce qui pourrait introduire des erreurs. Enfin, comme il n'y a que deux choix mesurés, ceréduit la puissance statistique souvent nécessaire pour détecter les changements de comportement subtils. Une alternative à un labyrinthe en T à deux choix est un à quatre quadrants (quatre champs) olfactomètre ^14-18. Dans cet essai, les animaux explorent une arène dans laquelle chacun des quatre coins de l'arène est remplie d'une source potentielle d'air odorisé. L'arène a une forme d'étoile froncé pour maximiser la formation de quatre quadrants d'odeurs expérimentalement définis. Si l'odeur est fourni dans l'un des coins, puis il est contenu seulement en ce qu 'un quadrant. Les comportements des animaux peuvent être suivis comme ils entrent et sortent le quadrant des odeurs, et facilement par rapport à leur comportement dans les trois quadrants de contrôle. Le dosage de olfactomètre à quatre quadrants ainsi les dossiers de réponse comportementale spatiale et temporelle des stimuli d'odeurs sur une grande arène expérimentale.

Le olfactomètre à quatre quadrants a d' abord été développé par Pettersson et al. ¹⁵ et Vet et al. ¹⁷ pour étudier l'olusine réponses comportementales des hyménoptères parasites individuels. Faucher et al ^18. Et Semmelhack et Wang ¹⁶ adapté le programme d' installation pour surveiller les réponses olfactives de Drosophila individuelle. Le olfactomètre à quatre quadrants est également sensible aux réponses attractives et répulsives, permettant une large gamme de produits odorants et conditions d'essai. Logiciel de suivi de la mouche Custom-écrit, développé par Alex Katsov ¹⁹ et actuellement maintenu par Julian Brown (détaillées dans les matériaux), a présenté des avantages supplémentaires aux implémentations plus récentes de l'olfactomètre à quatre quadrants ^14,20-23. Il est maintenant possible de tester jusqu'à 100 mouches simultanément à haute spatiale (27,5 pixels / cm) et temporels (30 images par seconde) de résolution, qui permet d'extraire différents paramètres, tels que la position, la vitesse et l'accélération des mouches à tout point de temps. Cela permet à des enquêtes sur la dynamique des réactions comportementales des mouches à odeurs ²⁰ . Il convient de noter toutefois que l'identité des mouches individuelles au sein de la population au cours de la période de suivi de piste entière n'a pas été maintenue. Au lieu de cela, chaque piste de mouche est enregistré pour aussi longtemps que deux pistes de mouche ne se croisent pas. À ce moment-là, de nouvelles pistes sont attribuées après vol divergent. En intégrant d' autres logiciels de vidéo-capture (détaillées dans le tableau Matériaux), la même configuration permet des périodes de suivi flexibles et pourrait être utilisé pour suivre les mouches jusqu'à 24 heures en prenant des images à une vitesse inférieure. Cette option a été utilisée pour étudier les comportements de ponte de mouches et de comparer leurs positions du corps avec les préférences de ponte ^14. Le olfactomètre quatre champ peut également être utilisé pour étudier les réponses à multimodal (par exemple , olfactives et visuelles) stimuli, ou de combiner optogenetic ⁹ ou thermogénique ²¹ stimulation avec des présentations de stimuli sensoriels. En outre, la haute résolution temporelle permet l'extraction de trajectoires for chaque mouche individuelle dans l'ensemble de données ensemble. Par conséquent, la méthode permet enquête sur les comportements de la population olfactifs guidée et aussi les interactions sociales individuelles. Les données générées par cet essai sont robustes et très reproductible, ce qui permet l'utilisation de l'olfactomètre quatre trames pour les écrans de comportement.

Nous décrivons ici l'ensemble de configuration pour un olfactomètre à quatre quadrants. Nous démontrons en outre son utilisation dans le dosage de l'attraction olfactive en réponse à vinaigre de cidre et de répulsion en réponse au propionate d'éthyle très concentré. Enfin, nous décrivons et fournissons un exemple de code pour l'analyse des données de suivi de vol enregistrées.

Protocole

1. Configuration Assemblée

1. Fabrication l'arène en forme d'étoile (19,5 cm par 19,5 cm par 0,7 cm) de polytétrafluoroéthylène (PTFE) selon le dessin (les matériaux supplémentaires, de SupplementalSketch_StarShapedArena.pdf) fournies. L'arène peut être fabriquée par un commercial ou d'une installation personnalisée.
2. L'acquisition de deux plaques de verre (20,25 cm par 20,25 cm avec une épaisseur de 2 mm), et percer un trou (~ 0,7 cm de diamètre) exactement au centre de l'une des plaques de verre à l'aide d'un trépan diamanté.
3. Fabrication d'une boîte de comportement étanche à la lumière pour l'arène comportementale. fabriquer également une boîte de caméra étanche à la lumière pour la caméra CCD vidéo infra-rouge selon les dessins fournis (matériaux supplémentaires, SupplementalSketch_LightTightBox.pdf). Les boîtes peuvent être fabriquées par un commercial ou d'une installation personnalisée.
4. Monter l'unité de conditionnement d'air sur la paroi postérieure et les réseaux de LED sur les parois latérales de la boîte de comportement. Placer la sonde de températuredans la zone de comportement à travers un trou latéral pour rétroaction en temps réel de la température et de réglage (voir les figures 1 et 2 pour plus de détails).
5. Fixer le filtre IR et polarisant circulaire à la caméra, et monter l'ensemble dans la zone de la caméra. La boîte de comportement et boîte de la caméra sont séparés par une fenêtre en verre pour une meilleure régulation de la température de la boîte de comportement (voir les figures 1 et 2 pour les détails).
6. Branchez la caméra CCD infrarouge à un adaptateur de caméra. Branchez l'adaptateur de l'appareil photo à un convertisseur USB. Branchez le convertisseur USB à un port USB de l'ordinateur pour l'acquisition de données.
7. Installez le pilote pour le convertisseur de vidéo sur l'ordinateur selon les instructions du fabricant. En option, installez le logiciel de traitement d'image fournie par le fabricant du convertisseur vidéo USB pour accéder à une plus large gamme de réglages de l'appareil et des paramètres d'acquisition.
8. Branchez le climatiseur (par "sortie"Sur le dos du régulateur de température) et la sonde de température (par" thermocouple "sur le dos du régulateur de température) au régulateur de température. Placer la sonde dans la zone de comportement.
   Remarque: Le système de régulation de température dans la mise en page est capable de maintenir la température de la boîte comprise entre 18 ° C et 30 ° C. Des températures plus élevées ou plus basses ambiantes pourraient être utiles pour thermogénique (dTrpA1, TRPM8 ou shibire ^ts) des expériences pour manipuler l' activité neuronale ou inhiber la transmission synaptique. Pour la plupart des expériences, la température est maintenue à 25 ° C.
9. Assembler le système de distribution des odeurs dans les étapes suivantes (s'il vous plaît voir la figure 1B pour les schémas détaillés et raccords):
   1. Utiliser le régulateur de pression d'air pour commander l'entrée d'air du système d'air central. Connecter un filtre à air en carbone (rempli de charbon de bois) pour le régulateur de pression pour purifier l'air provenant de la centralesystème de ir.
   2. Assembler le système de contrôle de débit comprenant plusieurs canaux réglementés par des tubes du débitmètre à haute résolution.
   3. Connecter la sortie du filtre à air en carbone sur les tubes du débitmètre par l' intermédiaire d' une tubulure comme représenté sur la figure 1B et 2F. Diriger la sortie des tubes du débitmètre à 3 voies électrovannes commandées électroniquement pour réguler si l' air pur en laissant les débitmètres est expulsé dans la pièce ou est entrée en odeur des chambres faites sur mesure ^24.
   4. Installez le contrôleur d'électrovanne selon le manuel du fabricant.
10. Installer le débitmètre d'air électronique en le reliant à un dispositif d'acquisition de données (DAQ) et une alimentation électrique selon le manuel du fabricant. Installez le logiciel d'interface DAQ pour vérifier des débits égaux dans chaque quadrant de l'arène avant chaque expérience.

2. Olfactive Stimuli Préparation

1. Préparer 5 odeurchambres de fourmis ²⁴ qui se composent d'un récipient extérieur en plastique, le verre contenant intérieur, un couvercle PTFE insert sur ​​-mesure, le couvercle du récipient d' origine avec une partie centrale enlevés, et deux clapets anti-retour.
   Remarque: Un joint torique autour du couvercle de PTFE peut être utilisé pour empêcher la fuite d'air de la chambre d'odeur pendant odeur perfusion. Voir la Figure 1 pour schématique et la figure 2 pour les photos des chambres.
2. Utilisez quatre chambres odorants pour les contrôles de solvant, et une chambre pour un odorant de test. Remplissez les récipients en verre avec 1000 ul de solvant ou odorant dilution (odorants de test + solvants appropriés, bien mélanger avant les expériences), placez le récipient en verre à l'intérieur de la chambre de plastique correspondante (ne pas renverser le liquide dans la chambre en plastique) et serrer le couvercle . Assurez-vous de toujours utiliser une chambre propre pour le odorant d'essai et les contrôles de solvants.
   Note: attraction olfactive peut être déclenchée par 1/16 dilution du vinaigre de cidre (5% d'acidité) dans water. En revanche, le comportement de répulsion olfactif peut être étudié à l'aide d'une dilution à 10% de propionate d'éthyle dans de l'huile minérale. stimuli de contrôle dans ces cas sont des chambres d'odeur avec une huile minérale pure.

3. Préparation Fly

1. Arrière vole sur le milieu de la semoule de maïs standard. Placez 30 hommes et 30 mouches parentales femelles dans une bouteille standard, et laissez-les pondent des œufs pendant 5 jours à 25 ° C ou à température ambiante.
2. Pour chaque expérience, collecter nouvellement éclos (<1 jour) 25 hommes et 25 femmes mouches sous brèves CO ₂ anesthésie.
3. Gardez les mouches dans un flacon avec un milieu de mouche standard pour 2-4 jours.
4. 40-42 h avant l'expérience, transférer les mouches sans CO ₂ anesthésie   un flacon contenant un gel d'agarose ~ 10 ml de 1%. Cela permet de garder les mouches humidifiés sans nourriture, ce qui contribue à augmenter leur activité locomotrice.
   Note: Plus de 90% des mouches devrait survivre à la famine. Certains génotypes sont moins guérirton et ne peut pas le faire à travers une famine de 40 h. Dans ces cas, des périodes plus courtes telles que 24-28 h sont acceptables, mais doivent être conservés les mêmes pour toutes les conditions expérimentales et répétitions.

4. Les réponses comportementales à Odorants attractifs et répulsifs

1. Mettez le régulateur de température et réglez-le à 25 ° C.
2. Connecter les chambres odorants (les odorants contrôle et de test) en insérant le tuyau à la sortie de la chambre odorant et à la poussée to-connect montage sur la boîte de comportement.
3. Vérifiez le débit dans chaque quadrant en utilisant le débitmètre d'air pour vous assurer que le contrôle et la airstreams odorants sont égales à 100 ml / min.
4. Nettoyez l'arène à la mouche de PTFE et les plaques de verre avec 70% d'éthanol 2-3 fois et leur permettre de sécher à l'air complètement (~ 3-4 min).
5. Apposer les plaques de verre à l'arène avec des pinces.
6. Transfert vole sans CO ₂ anesthésie dans l'arène à travers le trou dans l' une des plaques de verre. à l'arrièreer le transfert, placez un maillage circulaire sur le trou pour empêcher les mouches de s'échapper.
   Remarque: CO ₂ anesthésie a été montré pour affecter le comportement Drosophila ²⁵ et ne doit pas être utilisé dans les 24 heures d'une expérience comportementale.
7. Placez l'arène avec des mouches dans la chambre étanche à la lumière, relier les courants d'air quatre de contrôle en raccordant le tube attaché à la mise en place sur la boîte de comportement aux coins de l'aréna push-to-connect, fermer la porte de la chambre et attendre 10 15 min pour laisser les mouches acclimater à ce nouvel environnement. Si possible, éteindre la lumière dans la pièce où les expériences sont réalisées, afin d'éviter toute fuite de lumière minimale qui peut fausser le résultat expérimental.
8. Exécuter une expérience de contrôle 5-10 min, dans laquelle les mouches sont exposés à des courants d'air 4 de contrôle.
9. Analyser les données immédiatement (voir la section d'analyse des données ci-dessous) pour vous assurer que les mouches sont répartis uniformément dans l'arène, et l'indice de l'activité est procheà 0. Cette étape est essentielle, car elle vérifie qu'il n'y a pas de sources non contrôlées de préférence ou d' éviter dans l'arène (par exemple , la lumière qui fuit de l'extérieur, la distribution inégale de la température, l' arène inégale, la contamination des odeurs, etc.). Si les mouches sont inégalement répartis ou de leur activité locomotrice est faible, jeter les mouches, nettoyer à nouveau la scène (étape 4.4) et utiliser un nouveau lot de mouches de répéter l'expérience.
10. Connecter la chambre de odorant d'essai à la configuration en activant les vannes 3 voies ou re-brancher les tubes de connexion.
11. Exécutez l' expérience de test pendant 5-10 minutes et analyser les données comme décrit dans la section 5 ci - dessous (voir également référence 14 et Figure 3). Les enregistrements de plus de 20 min peut entraîner des fichiers de données qui peuvent être difficiles à traiter informatiquement. Si les enregistrements plus expérimentaux sont souhaités, arrêter rapidement et re-démarrer le programme de suivi. Il en résulte un écart ~ 10 sec entre les enregistrements expérimentaux.
12. Discarvol d.
13. arène et plaques de verre propres avec 70% d'éthanol (étape 4.4), et remplacer les tubes de connexion dans l'enceinte étanche à la lumière. Pour accélérer les expériences, une nouvelle arène propre peut être utilisé, et l'arène sale nettoyé tout en effectuant essais expérimentaux.
14. Exécutez une autre expérience avec un nouveau lot de mouches, si nécessaire. Si plusieurs expériences sont exécutées le même jour, prenez un soin extrême pour veiller à ce qu'aucun odorant est laissé dans le système à partir d'un essai précédent. Ceci est normalement pas un problème avec de faibles concentrations de substances odorantes ou avec CO _2, mais stimuli pour très concentrées jusqu'à un intervalle de 24 heures entre les essais expérimentaux peut être nécessaire. En outre, tous les tubes après que l'écoulement des tubes peut être remplacée en cas de contamination odorant est suspectée au cours des expériences de contrôle. Toujours laisser l'air sec sur entre les expériences pour rincer en permanence le système

Analyse 5. Données

Note: La mouche a suggéré l'acquisition de suivi software (détaillées dans les matériaux), suit des mouches en temps réel lors de l'acquisition, et enregistre l'horodatage et les coordonnées de toutes les mouches détectées au format * .dat. Nous avons développé une routine Matlab fait sur commande pour convertir les données en un format Matlab, et d'analyser les données. Les exemples de code sont fournis dans les matériaux supplémentaires, mais les détails de la mise en œuvre dépendra du logiciel utilisé pour l'acquisition de données.

1. Charger les données brutes. Créer un masque spatial qui suit les contours de l'arène et appliquer le masque aux données brutes pour supprimer tous les points de données qui ne relèvent pas de l'arène , car ils représentent le bruit (figure 4A, complémentaire code MaskSpatialFiltering.m, Score.m, DrawCircularMask. m).
2. Supprimer tous les points de données qui se déplacent à une vitesse inférieure à 0,163 cm / s pendant plus de 3s, car ces données sont susceptibles d'être le bruit généré par les mouches ou non mobiles (figure 4B, complémentaire code TemporalFiltering.m).
3. Visualiser les données restantesdes points en les traçant une seule fois ou que les trajectoires individuelles (Figure 3, Code complémentaire SingleTrajectoryViewer.m).
   Remarque: L'emplacement des limites d'odeur dans le champ quatre dépend probablement un certain nombre de facteurs, tels que les caractéristiques de chaque odorant et les débits d'air utilisé. Par exemple, odorants très volatils vont probablement remplir le quadrant des odeurs plus complètement que odorants moins volatils. Ainsi, il est probable que chaque substance odorante peut présenter légèrement différentes limites d'odeur. L'utilisation d'un détecteur de photoionisation pour mesurer les limites des odeurs peut être problématique car il utilise un vide pour prélever l'air à partir d'un endroit particulier, et ainsi perturbe la concentration odorant à cet endroit. Néanmoins, les limites d'odeurs peuvent être estimées rapidement sur la base de données comportementales de mouches. Par exemple, une limite d'odeur basée sur des pistes de braguette cumulée en réponse à différentes odeurs peut être clairement observé sur les figures 3C et 3D.
4. Calculer un indice d'attraction pour déterminer si des expériences de contrôle génèrent pas de réponse préférence, ainsi que pour accéder à la réponse à un odorant (ou optogenetic ⁹⁾ stimulus. Pour calculer une activité Index (AI), utilisez les 5 dernières minutes d'un contrôle ou d'enregistrement de test. Pour obtenir une mesure de l'attraction qui se situe entre +1 (attraction absolue) et -1 (répulsion absolue), la formule suivante est utilisée pour calculer l'AI:
   
   où N _test est le nombre de points de données dans le quadrant de test, le _contrôle N est le nombre moyen de points de données dans les trois quarts de cercle de contrôle. Cette mesure est intuitive car aucune préférence serait indiquée par des valeurs proches de zéro. Toutefois, cela ne signifie pas correctement la proportion du nombre total de mouches qui sont situées dans le quadrant odorante. Pour obtenir cette mesure, un indice Pourcentage (PI) peut être utilisé:
   où N _test est le nombre de points de données dans le quadrant de test, et le N _total est le nombre total de points de données dans les quatre quadrants. Cette formule donne une mesure qui se situe entre 0 et 1, avec 0,25 correspondant à aucune préférence comportementale (figure 3E et 4C, le code supplémentaire AttractionIndex.m).
5. Exécutez 5-10 répétitions de chaque condition expérimentale, en utilisant un nouveau groupe de mouches pour chaque répétition. Comparer les indices d'attraction entre les conditions ou contre les contrôles en utilisant le test non paramétrique de Kolmogorov-Smirnov (Figure 3F, fonction kstest2 en Matlab).

Résultats

Les quatre quadrants olfactomètre dossiers d'analyse et analyse les activités de marche de beaucoup de mouches sur un grand espace de comportement. Odorants peuvent être introduits dans les air-courants qui entrent dans un, deux, trois ou les quatre quadrants. En l'absence d'odeurs, les mouches se déplacer librement entre les quatre quadrants. Ce comportement est essentiel d'observer car elle indique que les biais un-intentionnel n'a pas été introduit dans le dosage. Ces biais peuvent co...

Discussion

Le olfactomètre quatre champ décrit ici est un système polyvalent de comportement pour étudier les réponses olfactives des grandes populations de type sauvage et mutant drosophile mouches. Chaque expérience prend ~ 1 h (y compris l'installation, essais expérimentaux, et le nettoyage), et 4-6 expériences peut être effectuée régulièrement chaque jour. Un essai typique utilisant 40-50 mouches pendant 5 minutes génère environ 450.000 suivis de points de données pour l'analyse. La configuration décrite peut ...

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
air puissantnbsp ;			(Quantité nécessaire)
Tubes et connecteurs
Thermoplastic NPT(F) Manifolds	Cole-Parmer, IL, USA	R-31522-31	1
Mamelon réducteur hexagonal (1/4MNPT->1/8MNPT)	McMaster-Carr, IL, USA	5232T314	1
Tube ( ID :1/8)	McMaster-Carr, IL, USA	5108K43	50 pieds
(ID :1/16)	McMaster-Carr, IL, USA	52355K41	100 Ft
Raccords de tubes barbelés	McMaster-Carr, IL, USA	5117K71	1 paquet
raccords de tubes Push-to-connect	McMaster-Carr, IL, USA	5779K102	4
raccords de tubes barbelés (1/4MNPT->1/8BF)	McMaster-Carr, IL, États-Unis	5463K439	1 paquet (10)
Raccords de tubes cannelés (1/8MNPT->1/8BF)	McMaster-Carr, IL, USA	5463K438 paquet de	2 (10)  ;
Raccords de tubes barbelés (1/8MNPT->1/16BF)	McMaster-Carr, IL, USA	5463K4	paquet de 2 (10)  ;
Raccords de tubes barbelés (1/4MNPT->1/4BF)	McMaster-Carr, IL, USA&	nbsp ; 5670K84	1
Bouchon à tête hexagonale	McMaster-Carr, IL, USA	48335K152	1
Régulateur de pression d’air, filtre à air et débitmètres			(Quantité nécessaire)
Unité de séchage de gaz labatoire	W A HAMMOND DRIERITE CO LTD, OH, USA	Modèle : L68-NP-303 ; stock #26840	1
Cadres multitubes pour tubes d’écoulement de 150 mm	Cole-Parmer, IL, USA	R03215-30	1
Cadres multitubes pour tubes d’écoulement de 150 mm	Cole-Parmer, IL, USA	R03215-76	1
Tubes d’écoulement de 150 mm	Cole-Parmer, IL, USA	R-03217-15	Cartouche
9 vannes	Cole-Parmer, IL, USA	R-03218-72	9
Régulateur d’air de précision	McMaster-Carr, IL, USA	6162K13	1
Électrovannes	Automate Scientific, Berkeley, CA	02-10i	4
Contrôleur d’électrovanne	ValveLink 8.2, Automate Scientific, Berkeley, CA	01-18	1
Débitmètre électronique	Honeywell	AWM3100V	1
DAQ (NI USB-6009, National Instruments) et a  ;	National Instruments	NI USB-6009	1
Bloc d’alimentation	Extech Instruments	382200	1
Chambres anti-odeurs Pot
en polypropylène à large ouverture 2 oz ; 60 ml	Nalgene	562118-0002	Au moins 5 sont nécessaires par expérience, mais une chambre distincte est nécessaire pour chaque distribution de chaque odorisant. Disponible chez Container Store, pièce #635114)
Chambre odorante en verre, bouteille Sunburst de 0,25 oz		LB4B	Au moins 5 sont nécessaires par expérience.
Vanne « In » pour chambre d’odorat	Smart Products, Inc., CA, USA	214224PB-0011S000-4074	1 de ces pièces est utilisée par chambre d’odorat mais elles doivent être remplacées fréquemmentVanne
de sortie pour chambre d’odorat	Smart Products, Inc., CA, USA	224214PB-0011S000-4074	1 de ces pièces est utilisée par chambre d’odorat mais elles doivent être remplacées fréquemment
Joint torique	RT Dygert International, MN, USA	AS568-029 Buna-N O-R	1 paquet (100)
Fly arena, camera et behavior boxes			(Quantité nécessaire)
Behavior and camera box material	Interstate plastics, CA, USA	ABS noir extrudé (https://www.interstateplastics.com/Abs-Black-Extruded-Sheet-ABSBE~~ST.php)	1803 sq inch
Téflon pour manège à mouches et chambres à odeurs, 3/8 » d’épaisseur, 12 » x 12	McMaster-Carr, IL, USA	8545K27  ;	1
Plaques de verre, 1/8 » d’épaisseur, 9 » x 9"	McMaster-Carr, IL, États-Unis	8476K191  ;	deux
Contrôleur thermoélectrique à double action	WAtronix Inc, CA, USA	DA12V-K-0	1
IR LED array	Advanced Illumination, Rochester, VT, USA	AL4554-88024, PS24-TL	2 matrices de LED et une alimentation électrique
Climatiseur Unité	Melcor Store	; MAA280T-12	1
Système d’imagerie			(Quantité nécessaire)
Cosmicar/Pentax C21211TH (12.5 mm F/1.4) Objectif à monture C	B ET H PHOTO AND ELECTRONICS CORP, NY, USA	KP	1
CCXC-12P05N Câble d’interconnexion	B ET H PHOTO AND ELECTRONICS CORP, NY, États-Unis	SOCCXC12P05N	1
DC-700 Adaptateur d’appareil photo	B ET H PHOTO AND ELECTRONICS CORP, NY, USA		1
B+W 40,5 093 Filtre IR	B ET H PHOTO AND ELECTRONICS CORP, NY, USA	65-072442	1
TiFFEN 40.5 mm Polariseur circulaire	Amazon		1
Caméra vidéo IR	Source de vision industrielle, FL, États-Unis	Sony XC-EI50 (SY-XC-E150)	1
Convertisseur vidéo USB	The Imagingsource, NC, USA	DFG/USB2-It	1
iFlySpy2 (logiciel de suivi des mouches)	Julian Brown, Stanford, Calfornia : julianrbrown@gmail.com	iFlySpy2	1
IC Capture 2.2 software	The Imagingsource, NC, États-Unis (http://www.theimagingsource.com/en_US/products/software/iccapture/)
Divers			(Quantité nécessaire)
Outil rotatif Dremel	Dremel, Racine, WI, USA	Dremel 8000-03  ;	1
Forets diamantés pour la découpe du verre	Disponible auprès de différents fournisseurs ; MSC industrial Supply Co, Melville, NY	90606328	1