Infection des voies urinaires chez un modèle Animal petit : cathétérisme transuréthrale de souris mâles et femelles

Résumé

Le modèle établi de cathétérisme transuréthrale de la souris permet l’étude des pathologies de la vessie, y compris les infections urinaires, mais ne peut être effectué chez les femelles. Un nouveau modèle de mâle instillation transurétrale, présenté ici, permettra des recherches dans une région marquée par fortes différences cliniques et épidémiologiques entre les sexes.

Résumé

Infections des voies urinaires (IVU) sont extrêmement répandues dans le monde entier, encourir une morbidité significative et des dépenses associées aux soins. Petits modèles animaux, qui reflètent la progression et l’établissement de la maladie, permettent la dissection des interactions hôte-pathogène et génération d’immunité aux infections. Chez la souris, l’instillation intravésicale des uropathogènes e. coli, l’agent causal dans plus de 85 % de la communauté acquis UTI, reprend bon nombre des étapes de l’infection chez les humains. Jusqu'à récemment, toutefois, UTI pourrait seulement être modélisé chez les femelles. Cette limitation a freiné l’étude des différences liées au sexe dans l’infection urinaire, mais aussi des autres pathologies de la vessie, comme le cancer. Nous décrivons ici une méthode pour inculquer des souris mâles qui permet une comparaison directe entre mâles et femelles animaux et fournir un protocole détaillé afin d’évaluer le tissu de la vessie par cytométrie en flux comme un moyen de mieux comprendre les réactions de l’hôte à l’infection. Ensemble, ces approches facilitera l’identification des facteurs de l’hôte qui contribuent à des biais de sexe observées dans l’infection urinaire et d’autres maladies associées à la vessie.

Introduction

Infections des voies urinaires (IVU) sont l’une des infections plus courantes dans les pays développés,¹. Les taux d’infection sont similaires entre les femmes et les hommes chez les nouveau-nés et les personnes âgées². Premenopausal femmes adultes, cependant, ont une incidence beaucoup plue d’UTI extra-hospitalière par rapport aux hommes^2,3. Étant donné que cette maladie produit des effets principalement femmes, recherche fondamentale et clinique vise une écrasante majorité le UTI chez les femelles. Toutefois, l’infection urinaire chez les hommes est un défi de ....

Protocole

Expériences de souris ont été réalisées conformément à l’approbation du protocole numéro 2012-0024 par le Comité de "éthique en expérimentation animale Paris Centre et Sud (le Comité d’éthique pour l’expérimentation animale), en application de la Directive 2010/63 européen UNION EUROPÉENNE.

1. préparation des cathéters

1. Préparer une canule intraveineuse-accès pédiatrique pour chaque groupe de souris infectées. En utilisant le mécanisme à ressort intégré, dépouiller chaque canule de son aiguille, tel qu’indiqué par le fabricant. Jeter les aiguilles, conservant seulement la canule intraveineuse en plastique.
2. Stériliser les ....

Résultats

Dans l’élaboration du présent protocole, des cohortes de souris C57Bl/6 femelles et mâles âgés de 6 à 8 semaines ont été instillée et bactérienne charge évaluée dans les vessies aux points de temps allant de 1 h à 30 jours. Les résultats de ces études sont détaillées ailleurs (Zychlinsky Scharff et al., en attente). Ici, nous présentons des données représentatives d’infections 24hr. Notamment, la charge bactérienne était équivalente entre les souris mâles et femelles à 24 heures .......

Discussion

Instillation transuréthrale de souris mâles vous propose de nombreuses nouvelles possibilités de recherche sur l’influence du sexe sur la maladie muqueuse de la vessie, mais présente aussi plusieurs défis. Avant tout, une seule limitation est que l’instillation au départ pourrait pour être techniquement difficile, ce qui entraîne une inflammation excessive durant l’insertion du cathéter. Amélioration de la technique est possible par l’instillation de souris mortes avec une solution colorée, comme colorant bleu d’Evans. P.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Cathéters IV blindés BD Insyte Autoguard 24 G, diamètre externe de 0,7 mm, longueur 14 mM	de catalogue de la 381811 ou 381411*	de BD Medical dépend du pays
	Greiner Bio-One	731171
LB Miller bouillon	Difco	244620
LB Gélose Miller	Difco	244520
Cuvettes	Bio-rad	223-9955
seringues	B Braun	9166017V
Pince à pouce (Adson)	Outils de science fine	11006-12
Tubes de 5 ml, polypropylène	Sondes	352063
Tissue Ruptor	Qiagen	990890
Tubes à capuchon rabattable de 15 ml	Thermo Scientific	362694
DNAse	Invitrogen	18047019
Liberase TM	Sigma-Aldrich	5401119001	doivent être aliquottées et stockées à -20 ° ; C pour éviter la congélation-décongélation répétée
100 µ ; M MACS SmartStrainers  ;	Miltenyi	130-098-463	compatible avec les tubes de 15 ml, préféré
100 & micro ; crépines à cellules M  ;	Falcon	352360	compatible avec les tubes de 50 ml, si les passoires intelligentes MACS ne sont pas disponibles
Plaque à 96 puits	Falcon	353077
Fc block	BD Pharmingen	553142	anti-CD16/CD32 anti-souris
Anticorps CD45	BD Biosciences	561487	de nombreuses options de conjugaison fluorescente différentes sont disponibles
Tubes de 5 ml en polystyrène avec capuchon filtrant	Falcon
seringue à insuline	Terumo	BS05M2913
homogénéisateur à main	Qiagen	9001272	TissueCytomètre
flux	Ruptor BD Biosciences	N/A	Fortessa SORP  ;
Logiciel de cytométrie en flux	BD Biosciences	N/A	Diva

Le numéro * jetables Falcon 352235 en