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Article de méthode

Ouvrir trachéotomie acide gastrique Aspiration modèle murin de lésion pulmonaire aiguë Résultats dans Maximal aiguë non létaux Lung Injury

9.5K vues

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DOI :

10.3791/54700

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26 février 2017

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Dans cet article

Résumé

Ce protocole induit une lésion pulmonaire aiguë chez une souris qui est étroitement liée à la pathogenèse de la pneumopathie acide observée chez l’homme. Nous générons une lésion pulmonaire aiguë non létale maximale à faible pH et tenons compte des différences dans la structure respiratoire anatomique entre rongeurs et humains à l’aide d’une trachéotomie ouverte couplée à une libération de la pression circonférentielle.

Résumé

pneumonite Acid est une cause majeure de lésion pulmonaire aiguë stérile (ALI) chez les humains. pneumonite Acid couvre le spectre clinique asymptomatique au syndrome de détresse respiratoire aiguë (SDRA), caractérisé par alvéolite neutrophile, et des blessures à la fois l'épithélium alvéolaire et l'endothélium vasculaire. Cliniquement, SDRA est définie par l'apparition soudaine d'hypoxémie, infiltrats pulmonaires bilatéraux inégaux et un œdème pulmonaire non cardiogénique. Les études humaines nous ont fourni des informations précieuses sur les changements physiologiques et inflammatoires dans les poumons causées par SDRA, qui a conduit à diverses hypothèses sur les mécanismes sous-fifre. Malheureusement, les difficultés qui déterminent l'étiologie du SDRA, ainsi qu'une large gamme de physiopathologie ont abouti à un manque d'informations critiques qui pourraient être utiles dans l'élaboration de stratégies thérapeutiques.

modèles animaux translationnelle sont précieux lorsque leur pathogenèse et la physiopathologie REPRODUC précisele concept ea prouvé à la fois in vitro et les paramètres cliniques. Bien que les modèles de grands animaux (par exemple, les moutons) partagent des caractéristiques de l'anatomie de l' arbre de la trachée-bronchiques humaines, des modèles murins fournissent une foule d'autres avantages , notamment: un faible coût; prêts à court cycle de reproduction lui-même pour l'acquisition de données plus important; un système immunitaire bien compris; et un génome bien caractérisée conduisant à la disponibilité d'une variété de délétion du gène et des souches transgéniques. Un modèle robuste de pH induite par SDRA faible nécessite une murin ALI qui cible principalement l'épithélium alvéolaire, secondairement l'endothélium vasculaire, ainsi que les petites voies respiratoires menant aux alvéoles. En outre, une blessure reproductible avec de larges différences entre les insultes préjudiciables et non préjudiciables est important.

Le modèle d'aspiration d'acide gastrique murine présenté ici en utilisant l'acide chlorhydrique emploie une trachéotomie ouverte et recrée un scénario pathogène qui reproduit le faible pneumon pHitis blessures chez les humains. En outre, ce modèle peut être utilisé pour examiner l' interaction d'un faible pH insulte avec d' autres entités pulmonaires dommageables (par exemple, les particules de nourriture, des bactéries pathogènes).

Introduction

SDRA est caractérisée par une inflammation pulmonaire répandue et est cliniquement considéré comme l'essoufflement aigu de souffle avec hypoxémie. Ces symptômes se produisent souvent moins de 24 h après un événement d'incitation telles que les traumatismes, la septicémie, transfusionnelle réactions de sang ou d'aspiration. Elle se caractérise histopathologique par alvéolite neutrophile (ie, une inflammation généralisée) localisée à l' épithélium alvéolaire et l' endothélium vasculaire entraînant une fuite de protéines et de formation de la membrane hyaline ultérieurement. Aspiration est classé comme une pneumonie chimique ou d'une pne....

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Protocole

Tous les matériaux et l'équipement doivent être recueillies et adéquatement organisée avant l'intervention. La procédure doit être conduite avec des transitions en douceur d'une étape à l'autre afin de fournir des données reproductibles cohérentes. Ce protocole fait suite à des politiques institutionnelles établies par le Comité soin et l'utilisation des animaux institutionnels au Buffalo Veterans Affairs Medical Center.
NOTE: C57BL / 6 mâles et femelles ont été utilisés pour ce protocole. Il n'y a pas de différence significative de fuite d'albumine entre les sexes.

1. Préparation d'acide chlorhydrique

  1. HCl 56,....

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Résultats

Pulmonaire histopathologie du modèle murin de l'acide Aspiration Pneumopathie

Les souris ont été blessés comme décrit ci - dessus et les poumons ont été retirés 24 heures après un pH faible insulte, sectionnés et H & E colorées (Figure 1). Les cellules nécrotiques, la perte de l'architecture du parenchyme pulmonaire, les cellules et les débris dans les espaces aériens et importante infiltration PMN sont clair.......

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Discussion

L'objectif était de développer un modèle animal ALI par aspiration acide gastrique qui ressemble étroitement à la physiopathologie qui se produit chez l'homme au cours du développement de pneumopathie acide et SDRA ultérieures. Lors de l' élaboration d' un modèle, nous avons choisi une espèce animale qui offre l' acquisition élevée de données de débit en raison de son faible coût, cycle de reproduction court, et un système immunologique bien compris avec une abondance d'outils d' enquêt.......

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Déclarations de divulgation

Les auteurs n’ont aucun intérêt financier concurrent à divulguer.

Remerciements

Ravi Alluri et Hilliard L. Kutscher sont soutenus par la bourse de formation en recherche institutionnelle Ruth L. Kirschstein National Research Service Award (NRSA) 1T32GM099607.

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Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article
NomEntrepriseNuméro de catalogueCommentaires
seringue, 1 ccSeringue 309628
, 5 ccBecton Dickinson309646
aiguille, 22 G x 1 1/2 « Becton Dickinson305159
aiguille, 26 G x 1 1/2 »Becton Dickinson305111
1-O Suture en soie tresséeHarvard Apparatus517730
3 » Courbé pince dentelée pour tissusFine Science Tools11065-07
Pince à tissus incurvés « dentée » de 3 po, 1 x 2 dentsFine Science Tools11067-07
Ciseaux de micro-dissection incurvés de 4 poFine Science Tools14061-10
ciseaux à ressort pour couper les osFine Science Tools16144-13
Hémostat verrouillable incurvée de 3 1/2 poFine Science Tools13021-12
Agrafeuse cutanée jetable3MDS-25
canule trachéale (adaptateur de tube en acier inoxydable de calibre 20 x 1/2 po)Becton Dickinson408210
Planche
degrés 0,5 % de bupivacaïne
isoflurane
en coton bétadine et coton-tige « Q-tip »
Becton Dickinsonde dissection inclinée à 60Applicateur

Références

  1. Knight, P. R., Rutter, T., Tait, A. R., Coleman, E., Johnson, K. Pathogenesis of gastric particulate lung injury: a comparison and interaction with acidic pneumonitis. Anesth Analg. 77 (4), 754-760 (1993).
  2. Raghavendran, K., Nemzek, J., Napolitano, L. M., Knight, P. R. Aspiration-ind....

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Réimpressions et autorisations

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