Une méthode de détermination des niveaux de graisse dans la base Flottabilité-<em&gt; Drosophila</em

Résumé

Nous présentons ici une méthode pour mesurer les niveaux de graisse organismales dans le troisième stade (L3) de stade larvaire de Drosophila melanogaster. Cette méthode exploite la densité relativement faible du tissu adipeux pour différencier les larves avec des réserves de graisse altérées. analyse basée sur Buoyancy est un outil précieux pour le dépistage rapide, reproductible et économique.

Résumé

Drosophila melanogaster est un système expérimental clé dans l’étude de la régulation des graisses. De nombreuses techniques existent actuellement pour mesurer les niveaux de graisse stockée chez la drosophile, mais la plupart sont coûteuses et/ou laborieuses et ont des limites évidentes. Ici, nous présentons une méthode pour déterminer rapidement et à moindre coût les niveaux de graisse de l’organisme dans les larves de drosophile L3. La technique repose sur les différences de densité entre les tissus adipeux et maigre et permet de détecter rapidement les phénotypes gras et maigres. Nous avons vérifié la précision de cette méthode par rapport au pourcentage de graisse corporelle déterminé par extraction lipidique neutre et chromatographie en phase gazeuse couplée à la spectrométrie de masse (GCMS). Nous décrivons en outre des protocoles détaillés pour la collecte et la synchronisation des larves ainsi que des recettes expérimentales pertinentes. La technique présentée ci-dessous permet de pallier les principales lacunes des méthodes de quantification des lipides les plus largement utilisées et constitue un moyen puissant de dépister rapidement et avec sensibilité les phénotypes de régulation des graisses chez les larves L3 tout en préservant l’intégrité des larves. Ce test a de nombreuses applications pour l’étude du métabolisme et de la régulation des graisses chez la drosophile.

Introduction

Drosophila melanogaster a été utilisé pendant plus d' un siècle dans l'étude de la génétique et d' autres questions biologiques de base. Au cours des dernières décennies, il est devenu clair que la drosophile est un outil puissant dans l'étude de nombreuses maladies humaines. Comme 70 - 80% des gènes associés à des maladies humaines ont une mouche orthologue identifié : ^{1 - 4,} Drosophila fournit un système encore traduisible simplifié dans lequel pour étudier les maladies complexes. Métabolisme en particulier, a bénéficié d'une telle étude. Non seulement la génétique du métabolisme bien c....

Protocole

1. Collecter des oeufs de mouches avec Génotype d'intérêt

NOTE: croix Idéal se composent de 150 mouches vierges et au moins 75 hommes. collections d'actions devraient se composer d'au moins 200 mouches.

1. Préparer des plaques de raisin.
   1. Ajouter 37,5 g d'agar à 1,5 L d'eau distillée dans un 4 L flacon.
   2. Autoclave mélange eau / agar pendant 50 minutes à 121 ºC (250 ºF).
   3. Alors que l'eau / mélange agar est autoclavage, ajouter 50 g de saccharose à 500 ml de jus de raisin et remuer avec une barre d'agitation sur une plaque d'agitation chauffé jusqu'à ce que le saccharose est dissous.

Résultats

La figure 1 représente un exemple de la façon dont le dosage à base de flottabilité peut détecter à la fois les réserves de graisse supérieures et inférieures dans les larves génétiquement manipulées. La figure 1A montre que l' excitation ou le silençage d'un certain sous - ensemble de neurones (E347) dans le cerveau des larves induit moins de gras et plus stocke respectivement. Le même contrôle d'arrière - plan génétique a été utilisé dans l.......

Discussion

Il existe une multitude de techniques qui ont été développées pour mesurer les niveaux de lipides ^8-10. Cependant, chacun de ces procédés est fourni avec quelques inconvénients majeurs qui sont traités par le dosage à base de flottabilité décrit ci-dessus. Tout d'abord, cet essai est extrêmement rapide. Test d'un gradient de concentration complète prend pas plus de 30 - 60 min. Ceci est une énorme amélioration sur la plupart des techniques actuellement utilisées. Par exemple, des.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Bacto Agar	VWR	214030
Welch’s Original 100 % Jus
Saccharose	Fisher	S512
Tegosept	Genesee Scientific	20-259
Éthanol			200 proof
Levure de boulanger	Fleichmann’s
Yellow Semoule de maïs	Gélose drosophile dégermée enrichie	Quaker
Type II	Apex	66-104
Farine de soja	ADM Ingrédients de spécialité	062-100
Extrait de malt	Breiss	5748
Sirop de maïs léger	Karo
	VWR	U330-09
Chlorure de sodium	Fisher	50147491
Phosphate de potassium monobasique	Sigma	P5655-100G
Phosphate de sodium anhydre	Fisher	S3933
Chlorure de potassium	Fisher	P330-500
35 x 10 mm Plaque de Petri	Fisher	08-757-100A
50 ml Conique	Fisher	50-869-569

de raisin Acide propionique Karo