Article de méthode
Nous avons mis au point un système modulaire de criblage à haut débit pour la découverte de nouveaux composés contre la tuberculose Mycobacterium, ciblant les bactéries à croissance intracellulaire et en bouillon ainsi que cytotoxicité contre la cellule hôte mammifère.
Mycobacterium tuberculosis, l’agent causal de la tuberculose (TB), est l’une des principales causes de morbidité et de mortalité dans le monde. Avec la propagation accrue de la tuberculose multirésistante (TB-MR), il est urgent de développer de nouvelles stratégies thérapeutiques contre les infections à M. tuberculosis. Traditionnellement, les composés sont évalués en fonction de leur activité antibactérienne dans des conditions de croissance in vitro en bouillon ; cependant, les résultats sont souvent trompeurs pour les agents pathogènes intracellulaires comme M. tuberculosis, car les conditions de dépistage phénotypique dans le bouillon sont significativement différentes des conditions réelles de la maladie dans le corps humain. Le dépistage des inhibiteurs qui agissent à l’intérieur des macrophages a toujours été difficile en raison de la complexité, de la variabilité de l’infection et de la lenteur du taux de réplication de M. tuberculosis. Dans cette étude, nous présentons une nouvelle approche pour évaluer rapidement l’efficacité des composés sur la viabilité de M. tuberculosis dans un modèle d’infection par les macrophages. En utilisant la combinaison d’un test de cytotoxicité et d’un test de viabilité de M. tuberculosis en bouillon, nous avons pu créer un système de dépistage qui génère une analyse complète des composés d’intérêt. Ce système est capable de produire des données quantitatives à faible coût, ce qui est à la portée de la plupart des laboratoires, tout en étant hautement évolutif pour s’adapter aux grands environnements industriels.
Mycobacterium tuberculosis, l'agent causal de la tuberculose (TB), est une des principales causes de morbidité et de mortalité dans le monde. TB sensible aux drogues est une maladie traitable qui nécessite de multiples antibiotiques pour une période de 6 mois. En dépit d' être une maladie curable, la tuberculose mortalité a été estimée à 1,5 million en 2015 1. Au cours des 10 dernières années, il y a eu des préoccupations croissantes quant à la prévalence de la tuberculose M. pharmacorésistante. TB multirésistante (MDR-TB) est définie comme la tuberculose qui est résistante à au moins l'isoniazide (INH) et rifampi....
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1. La souche bactérienne et la croissance moyenne
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Criblage intracellulaire à haut débit en utilisant M. tuberculosis exprimant le gène de la luciférase
La figure 2A et le tableau 1 contiennent les données brutes recueillies par le luminomètre, exprimés en unités luminescentes relatives (RLU), montrant l'effet d'une concentration croissante de la rifampicine aux antituberculeux de M. tuberculosis dans les cellules THP-1........
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L'objectif de cette étude était de créer une méthode simple et rentable en utilisant un modèle HTS d'infection intracellulaire humaine pour M. tuberculosis. La tuberculose est une maladie humaine caractérisée par l'infection des macrophages alvéolaires par M. tuberculosis. En raison de problèmes de biosécurité, la recherche sur des modèles biologiques à la fois la bactérie et les cellules hôtes a été utilisé dans le passé. Cependant, il a été démontré que l'utilisation des bactéries de .......
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Les auteurs ne déclarent aucun intérêt financier concurrent pour ce travail.
Ce travail a été soutenu par l’Association pulmonaire de la Colombie-Britannique et Mitacs.
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| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| RPMI 1640 | Sigma-Aldrich | R5886 | |
| L-glutamine | Sigma-Aldrich | G7513 | |
| Sérum fœtal bovin (FBS) | Thermo Fisher Scientific | 12483020 | |
| Middlebrook 7H9 | Becton, Dickinson and Company | 271210 | |
| Tween80 | Fisher Scientific | T164 | |
| Albumine bovine pH7 | Affymetrix | 10857 | |
| Dextrose | Fisher Scientific | BP350 | |
| Chlorure de sodium | Fisher Scientific | BP358 | |
| Sulfate de kanamycine | Fisher Scientific | BP906 | |
| PMA | Sigma-Aldrich | P8139 | |
| MTT | Sigma-Aldrich | M2128 | |
| N,N- Diméthylformamide (DMF) | Fisher Scientific | D131 | |
| 1 M Acide hydrocholorique (HCl) | Fisher Scientific | 351279212 | |
| Acide acétique | Fisher Scientific | 351269 | |
| FDS | Fisher Scientific | BP166 | |
| Resazurin | Alfa Aesar | B21187 | |
| DMSO | Sigma-Aldrich | D5879 | |
| Glycérol | Fisher Scientific | BP229 | |
| THP-1 | American Type Culture Collection | TIB-202 | |
| M. tuberculosis H37Rv | |||
| 96-well flat bottom white plate | plate Corning | 3917 | |
| 95-well flat bottom clear plate | plate Corning | 3595 | |
| Scelleuse de plaques transparentes | Spectrophotomètre Thermo Fisher Scientific | AB-0580 | |
| Spectrophotomètre | Thermo Fisher Scientific | Biomate 3 | |
| Spectrophotomètre à microplaques | Biotek | Epoch | |
| Luminomètre | Applied Biosystems | Tropix TR717 |
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