L&#39;induction d&#39;une réponse inflammatoire dans les cultures hépatocytes primaires de souris

Brian Czaya; Saurav Singh; Christopher Yanucil; Karla Schramm; Christian Faul; Alexander Grabner

doi:10.3791/55319

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Article de méthode

L'induction d'une réponse inflammatoire dans les cultures hépatocytes primaires de souris

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DOI :

10.3791/55319

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10 mars 2017

Brian Czaya^*¹^,² , Saurav Singh^*¹^,² , Christopher Yanucil¹^,² , Karla Schramm¹^,² , Christian Faul¹^,² , Alexander Grabner¹

¹Katz Family Drug Discovery Center and Division of Nephrology and Hypertension, Department of Medicine, University of Miami Leonard M. Miller School of Medicine, ²Department of Cell Biology and Anatomy, University of Miami Leonard M. Miller School of Medicine

^* These authors contributed equally

Dans cet article

Résumé

Ici, nous montrons une approche enzymatique pour isoler des hépatocytes primaires de souris adultes, et nous décrivons la quantification d'une réponse inflammatoire par ELISA et la PCR en temps réel.

Résumé

Le foie joue un rôle décisif dans la régulation de l'inflammation systémique. Dans la maladie rénale chronique, en particulier, le foie réagit en réponse au milieu urémique, le stress oxydatif, l'endotoxémie et la diminution de la clairance de la circulation cytokines pro-inflammatoires par la production d'un grand nombre de réactifs de phase aiguë. inflammation des outils expérimentaux pour étudier et le rôle sous-jacent des hépatocytes sont cruciales pour comprendre la régulation et la contribution des cytokines hépatiques à une réponse en phase aiguë systémique et un scénario pro-inflammatoire prolongée, en particulier dans un cadre complexe comme la maladie rénale chronique. Depuis l' étude des mécanismes complexes de l' inflammation in vivo reste difficile, de ressources et nécessite généralement l'utilisation d'animaux transgéniques, les hépatocytes isolés primaires constituent un outil robuste pour acquérir des connaissances mécanistes dans la réponse de phase aiguë hépatique. Cette technique in vitro comporte des coûts modérés, élevés reproductibilité et de la connaissance technique commune, hépatocytes isolés primaires peuvent également être facilement utilisé comme une approche de dépistage. Ici, nous décrivons une méthode enzymatique basée à isoler les hépatocytes primaires de souris, et on décrit l'évaluation d'une réponse inflammatoire dans ces cellules en utilisant la méthode ELISA et la PCR quantitative en temps réel.

Introduction

L' insuffisance rénale chronique (CKD) peut être définie comme un état d'inflammation aiguë et chronique ^1. Chez les patients atteints de néphropathie chronique, les niveaux de l'hormone de croissance des fibroblastes facteur phosphaturique 23 (FGF23) sériques augmentent progressivement afin de maintenir l' homéostasie du phosphate sérique ^2. Niveaux de FGF23 sérique accrus sont indépendamment associés à la morbidité et la mortalité cardiovasculaire chez les patients qui commencent un traitement d'hémodialyse ^{^3,} ^4. En outre, plusieurs études ....