Un dispositif pour effectuer la migration cellulaire / Wound Healing dans une plaque à 96 puits

Résumé

Ici, nous présentons un protocole pour effectuer un test de migration des cellules semi-haut débit sur une plaque de culture cellulaire de 96 puits. Ce protocole est une méthode rapide, simple et économique pour créer des blessures à gratter cohérentes sur une monocouche cellulaire.

Résumé

La migration cellulaire / blessure dosage est une méthode couramment utilisée pour étudier la migration cellulaire et d'autres processus biologiques tels que l'angiogenèse et les métastases tumorales. Dans cet essai, les cellules sont cultivées pour former une monocouche confluente et une blessure mécanique est créée par grattage avec un périphérique. Ensuite, le taux des cellules vers la zone dénudée de migration peut être surveillé par imagerie. Notre wounder mécanique à 8 canaux est conçu pour traiter la plupart des problèmes liés à la détermination de la migration cellulaire. Tout d'abord, notre wounder peut être facilement stérilisé par autoclavage ou avec des désinfectants courants. Deuxièmement, les broches individuels réglables permettent même le contact avec la plaque de culture cellulaire de telle sorte que les plaies vives et reproductibles peuvent être créés. Troisièmement, les barres de guidage des deux côtés de la position de wounder assurent une blessure constante dans chaque puits. L'utilisation de jetables conseils de pipette en plastique pour blesser peut en outre assurer une meilleure gestion de la wounder ainsi que pour minimiser les contre-contamination. En conclusion, notre wounder cellulaire peut fournir aux chercheurs un dispositif convivial et reproductible utilisateur pour effectuer le test de migration des cellules en utilisant la plaque standard de culture de 96 puits.

Introduction

La migration cellulaire joue un rôle important dans les processus cellulaires, tels que l' embryogenèse, la neurogenèse, l' angiogenèse, la cicatrisation, la réparation des muqueuses, épithélio-mésenchymateuse transitions en cours de développement normal et la situation de la maladie ^1. Il est un processus complexe qui implique la coordination de nombreux événements internationaux et intra-cellulaires , y compris la signalisation des interactions moléculaires, la polarisation de la cellule, la réorganisation du cytosquelette, remodelage de la matrice, protrusion de la membrane et cellule-cellule dynamique adhérence modulation

Protocole

1. Introduction aux parties du wounder (Figure 1)

1. Préparer le porte-broche en fixant les broches blessantes à des distances égales. Tenez les embouts de pipette et d'ajuster la hauteur de la pointe en déplaçant les broches blessantes réglables de haut en bas.
2. Monter le guidage-bar ajustable sur différentes marques de plaques de culture de 96 puits et de veiller à ce que la zone de la blessure est dans une position fixe.
3. Fixer la tige de blessure réglable en serrant la vis à tête hexagonale. Fixer la barre de guidage en position en serrant la tête bouchons à six pans creux sur les deux extrémités.

2. ....

Résultats

Cette wounder mécanique 8 canaux est construit de façon à gratter une monocouche cellulaire afin d'effectuer le test de migration des cellules. Il est un dispositif convivial qui peut effectuer des essais grattage de cellules dans des plaques à 96 puits en moins d'une minute sans formation spéciale. Ce wounder peut introduire des zones enroulées sur des monocouches de cellules avec une largeur uniforme d'environ 600 pm et présentant des arêtes vives (figures 5

Discussion

Notre wounder cellulaire a plusieurs caractéristiques uniques pour résoudre les problèmes des tests traditionnels de migration cellulaire. La wounder mécanique à 8 canaux cellule est réalisée en acier inoxydable de haute qualité (acier 304) avec une longue durée de vie qui peut être stérilisé par autoclavage. Presque toutes les marques commerciales de plaques de culture à 96 puits disponibles sur le marché peuvent être utilisés avec ce wounder mécanique des cellules en raison de la barre de guidage réglable. La concepti.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Plaque de culture cellulaire à 96 puits	Nunc	167008	D’autres marques de plaque de culture cellulaire à 96 puits peuvent également être utilisées
Pointes de pipette P10	Axygen	301-03-051	La pointe de pipette courte P10 est plus facile à créer une plaie claire
Wounder	R& P Technology Limited
Medium 199	Sigma	M2520-1L	Pour la culture cellulaire de cellules endothéliales de veine ombilicale humaine. Utiliser un milieu de culture approprié et une condition pour d’autres types de cellules.
Sérum fœtal bovin	Gibco	26140079	Pour la culture cellulaire de cellules endothéliales de la veine ombilicale humaine. Utiliser un milieu de culture et une condition appropriés pour d’autres types de cellules.
Pénicilline/Streptomycine	Gibco	15140122	Pour la culture cellulaire de cellules endothéliales de la veine ombilicale humaine. Utiliser un milieu de culture et une condition appropriés pour d’autres types de cellules.
Sel d’héparine sodique de la muqueuse intestinale porcine	Sigma	H3393	Pour la culture cellulaire de cellules endothéliales de la veine ombilicale humaine. Utiliser un milieu de culture approprié et des conditions pour d’autres types de cellules.
Gélatine de peau bovine	Sigma	G9391	Pour la culture cellulaire de cellules endothéliales de la veine ombilicale humaine. Utiliser un milieu de culture et une condition appropriés pour d’autres types de cellules.