Quantification des molécules d&#39;endosome et de lysosome dans les neurones cultivés utilisant des sondes fluorescentes

Fuminori Tsuruta; Tomomi Okajima; Sarasa Yano; Tomoki Chiba

doi:10.3791/55488

Article de méthode

Quantification des molécules d'endosome et de lysosome dans les neurones cultivés utilisant des sondes fluorescentes

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DOI :

10.3791/55488

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22 mai 2017

Fuminori Tsuruta¹^,²^,³ , Tomomi Okajima¹ , Sarasa Yano¹ , Tomoki Chiba¹^,²^,³

¹Graduate School of Life and Environmental Sciences, University of Tsukuba, ²PhD Program in Human Biology, School of Integrative and Global Majors, University of Tsukuba, ³Life Science Center of Tsukuba Advanced Research Alliance (TARA), University of Tsukuba

Dans cet article

Résumé

L'étude du trafic membranaire est cruciale pour comprendre les fonctions neuronales. Ici, nous introduisons un procédé pour quantifier la motilité des vésicules dans les neurones. C'est une méthode pratique qui peut être adaptée à la quantification du trafic membranaire dans le système nerveux.

Résumé

Dans le cerveau, les systèmes de trafic membranaire jouent un rôle important dans la régulation des fonctions neuronales, telles que la morphologie neuronale, la plasticité synaptique, la survie et les communications gliaires. À ce jour, de nombreuses études ont rapporté que les défauts dans ces systèmes provoquent diverses maladies neuronales. Ainsi, la compréhension des mécanismes sous-jacents à la dynamique des vésicules peut fournir des indices influents qui pourraient aider au traitement de plusieurs troubles neuronaux. Ici, nous décrivons une méthode pour quantifier les motilités de vésicules, telles que la distance de motilité et le taux de mouvement, en utilisant un plug-in logiciel pour la plate-forme ImageJ. Pour obtenir des images pour la quantification, nous avons identifié des structures d'endosome-lysosome neuronaux avec des protéines marqueurs de vésicules etiquées par EGFP et observé le mouvement des vésicules à l'aide d'un microscopie temporelle. Cette méthode est très utile et simplifie la mesure de la motilité des vésicules dans les neurites, comme les axones et les dendrites, ainsi que dans le soma des neurones et des cellules gliales. FurthermoRe, cette méthode peut être appliquée à d'autres lignées cellulaires, telles que les fibroblastes et les cellules endothéliales. Cette approche pourrait apporter un précieux progrès à notre compréhension du trafic de la membrane.

Introduction

Un contrôle précis du trafic d'endosome-lysosome est indispensable pour réguler la fonction neuronale. Notamment, les mouvements dynamiques de ces vésicules sont un facteur clé qui sous-tend la régulation de la morphologie, du développement et de la survie des neurones. Les défauts dans ce système provoquent des troubles neuronaux sévères ¹ ^, ² . Les mécanismes moléculaires qui relient le trafic de vésicules aux maladies neuronales sont considérés comme compliqués, et plusieurs groupes ont cherché à examiner cette pertinence. Par exemple, il a été signalé que la motilité perturbée de l'endosome tardif....