In Vitro Imaging et la quantification de l&#39;efficacité de ciblage des médicaments d&#39;Analogues GnRH marqué par fluorescence

József Murányi; Attila Varga; Bianka Gurbi; Pál Gyulavári; Gábor Mező; Tibor Vántus

doi:10.3791/55529

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Article de méthode

In Vitro Imaging et la quantification de l'efficacité de ciblage des médicaments d'Analogues GnRH marqué par fluorescence

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DOI :

10.3791/55529

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21 mars 2017

József Murányi¹^,² , Attila Varga¹ , Bianka Gurbi¹ , Pál Gyulavári¹ , Gábor Mező³ , Tibor Vántus²

¹MTA-SE Pathobiochemistry Research Group, Semmelweis University, ²Department of Medical Chemistry, Molecular Biology and Pathobiochemistry, Semmelweis University, ³MTA-ELTE Research Group of Peptide Chemistry, Eötvös Loránd University

Dans cet article

Résumé

Sélectivement marqué fluorescent GnRH-I, -II et -III dérivés sont des outils fiables pour le suivi et la quantification de leur absorption cellulaire. Ce manuscrit présente des expériences pour visualiser, quantifier et comparer l'efficacité d'absorption de ces conjugués de GnRH dans diverses lignées cellulaires.

Résumé

analogues de la GnRH sont des fragments de ciblage efficaces et capables de délivrer des agents anti-cancéreux de manière sélective dans des cellules tumorales malignes qui expriment fortement les récepteurs de la GnRH. Cependant, l'analyse quantitative de l'absorption cellulaire des analogues de la GnRH et les types cellulaires étudiés dans les systèmes de délivrance de médicaments à base de GnRH sont actuellement limitées. Auparavant introduit, marqué par fluorescence sélective GnRH I, -II et -III dérivés fournir une grande détectabilité, et ils ont des propriétés chimiques appropriés pour des expériences reproductibles et robustes. Nous avons également constaté que les méthodes mises à jour appropriées avec ces analogues de la GnRH marqués pourraient offrir des informations inédites sur les systèmes de délivrance de médicaments à base de GnRH. Ce manuscrit présente quelques expériences simples et rapides en ce qui concerne l'absorption cellulaire de [D-Lys ⁶ (FITC)] - GnRH-I, [D-Lys ⁶ (FITC)] - GnRH-II et [Lys ⁸ (FITC)] - GnRH -III sur l'EBC-1 (poumon), le BxPC-3 (pancréas) et sur le Detroit 562- (pharynx) t malignesumor cellules. Parallèlement à ces conjugués au FITC GnRH, le niveau des récepteurs de la GnRH-I de surface cellulaire a également été examinée sur ces lignées cellulaires avant et après le traitement à la GnRH par microscopie confocale à balayage laser. L'absorption cellulaire des conjugués de GnRH-FITC a été quantifié par tri cellulaire activé par fluorescence. Dans ces expériences, des différences mineures entre les analogues de la GnRH et de grandes différences entre les types de cellules a été observée. Les différences significatives entre les lignées cellulaires sont mises en corrélation avec leur niveau distinct de récepteurs de surface cellulaire GnRH-I. Les expériences présentées contiennent des méthodes pratiques pour visualiser, quantifier et comparer l'efficacité de l'absorption de conjugués GnRH-FITC dans un temps et de manière dépendante de la concentration sur les différentes cultures de cellules adhérentes. Ces résultats pourraient prédire l'efficacité des médicaments ciblant des conjugués GnRH sur la culture cellulaire donné, et d'offrir une bonne base pour d'autres expériences dans l'examen des systèmes de délivrance de médicaments à base de GnRH.

Introduction

Systèmes de délivrance de médicaments peptidiques à base ciblées sont devenues un développement rapide et domaine prometteur dans le traitement du cancer au cours des dernières années ^{^1,} ^2. La gonadotrophine humaine de type récepteur d'hormone de libération de I (GnRH-IR) est principalement situé dans la glande pituitaire , mais est aussi présent dans plusieurs autres tissus qui sont responsables de l' autoreproduction ^3. GnRH-IR est également exprimée dans de nombreux tissus cancéreux, liés ou non au système reproducteur ^{^4,}