L&#39;isolement de la population latérale dans la leucémie lymphoblastique aiguë de cellules T induite par Myc dans le poisson zèbre

Margaret M. Pruitt; Wilfredo Marin; Michael R. Waarts; Jill L. O. de Jong

doi:10.3791/55711

Un abonnement JoVE est requis pour visualiser ce contenu. Connectez-vous ou commencez votre période d'essai gratuite.

Article de méthode

L'isolement de la population latérale dans la leucémie lymphoblastique aiguë de cellules T induite par Myc dans le poisson zèbre

6.1K vues

⸱

DOI :

10.3791/55711

⸱

4 mai 2017

Margaret M. Pruitt¹^,² , Wilfredo Marin¹ , Michael R. Waarts¹ , Jill L. O. de Jong¹

¹Department of Pediatrics, Section of Hematology-Oncology, The University of Chicago, ²Department of Biology and Biotechnology, Worcester Polytechnic Institute

Dans cet article

Résumé

Nous décrivons ici une technique pour isoler les cellules de la population de côté d'un modèle de poisson zèbre leucémie aiguë lymphoblastique T myc induite (T-ALL). Ce test de population côté est très sensible et est décrit pour T-ALL zebrafish, mais il peut être applicable à d'autres types de cellules malignes et non zebrafish malignes.

Résumé

Les populations de cellules hétérogènes, à partir de tissus sains ou malins, peuvent contenir une population de cellules caractérisées par une capacité différentielle à effacer le colorant de liaison à l'ADN Hoechst 33342. Cette «population latérale» des cellules peut être identifiée à l'aide de méthodes cytométriques en flux après le Hoechst 33342 Le colorant est excité par un laser ultraviolet (UV). La population secondaire de nombreux types de cellules contient des cellules souches ou de type progéniteur. Cependant, tous les types de cellules n'ont pas une population latérale identifiable. Danio rerio , le poisson zèbre, possèdent un modèle robuste in vivo de leucémie lymphoblastique aiguë des lymphocytes T (T-ALL), mais on ignore si ces T-ALL de poisson zèbre ont une population latérale. La méthode décrite ici décrit comment isoler les cellules latérales de la population dans le T-ALL du poisson zèbre. Pour commencer, le T-ALL dans le poisson zèbre est généré par micro-injection de plasmides tol2 dans des embryons à une seule cellule. Une fois que les tumeurs sont passées à une étape où elles se développent dans plus de la moitié de l'aniMal, les cellules T-ALL peuvent être récoltées. Les cellules sont ensuite colorées avec Hoechst 33342 et examinées par cytométrie en flux pour les cellules de population latérales. Cette méthode a de larges applications dans la recherche T-ALL de poisson zèbre. Bien qu'il n'y ait pas de marqueurs de surface cellulaire connus dans le poisson zèbre qui confirment si ces cellules de population latérale sont des cellules cancéreuses, des tests de transplantation fonctionnelle in vivo sont possibles. De plus, une transcriptomie à une seule cellule pourrait être utilisée pour identifier les caractéristiques génétiques de ces cellules latérales.

Introduction

Le dosage de la population latérale met en majuscule la capacité améliorée de certaines cellules dans un tissu à efflux du colorant de liaison à l'ADN Hoechst 33342 en raison des niveaux élevés de protéines transportrices de la cassette de liaison ATP (ABC) sur la membrane cellulaire. Les cellules qui effluxent le colorant Hoechst 33342 peuvent être identifiées à l'aide d'une analyse cytométrique à double flux de longueur d'onde après que le colorant soit excité par un laser UV. Ce test a d'abord été utilisé pour identifier les cellules souches hématopoïétiques murines (HSC) ¹ , mais il a depuis été utilisé pour identifier ....