Isolement des cellules de ganglion rétiniennes murines primaires (RGC) par cytométrie de flux

Sumana R. Chintalapudi; Need N. Patel; Zachary K. Goldsmith; Levon Djenderedjian; Xiang Di Wang; Tony N. Marion; Monica M. Jablonski; Vanessa M. Morales-Tirado

doi:10.3791/55785

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Article de méthode

Isolement des cellules de ganglion rétiniennes murines primaires (RGC) par cytométrie de flux

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DOI :

10.3791/55785

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5 juillet 2017

Sumana R. Chintalapudi¹ , Need N. Patel¹ , Zachary K. Goldsmith¹ , Levon Djenderedjian¹ , Xiang Di Wang¹ , Tony N. Marion² , Monica M. Jablonski¹^,³^,⁴ , Vanessa M. Morales-Tirado¹^,²

¹Department of Ophthalmology, Hamilton Eye Institute, University of Tennessee Health Science Center, ²Department of Microbiology, Immunology and Biochemistry, University of Tennessee Health Science Center, ³Department of Anatomy and Neurobiology, University of Tennessee Health Science Center, ⁴Department of Pharmaceutical Sciences, University of Tennessee Health Science Center

Dans cet article

Résumé

Des millions de personnes souffrent de maladies dégénératives de la rétine qui entraînent une cécité irréversible. Un élément commun de nombreuses de ces maladies est la perte de cellules ganglionnaires de la rétine (RGC). Ce protocole détaillé décrit l'isolement des RGC murins primaires par sélection positive et négative avec cytométrie de flux.

Résumé

Les maladies neurodégénératives ont souvent un impact dévastateur sur les personnes touchées. La perte de cellules ganglionnaires rétiniennes (RGC) est impliquée dans une série de maladies, y compris la rétinopathie diabétique et le glaucome, en plus du vieillissement normal. Malgré leur importance, les RGC ont été extrêmement difficiles à étudier jusqu'à maintenant en raison en partie du fait qu'ils ne comprennent qu'un faible pourcentage de la grande variété de cellules de la rétine. En outre, les méthodes d'isolement actuelles utilisent des marqueurs intracellulaires pour identifier les RGC, qui produisent des cellules non viables. Ces techniques impliquent également de longs protocoles d'isolement, de sorte qu'il existe un manque de méthodes pratiques, normalisées et fiables pour obtenir et isoler les RGC. Ce travail décrit une méthode efficace, complète et fiable pour isoler les RGC primaires des rétines de souris en utilisant un protocole basé sur des critères de sélection positifs et négatifs. Les méthodes présentées permettent l'étude future des RGC, dans le but de mieux comprendre les grandsDéclin de l'acuité visuelle résultant de la perte de RGC fonctionnels dans les maladies neurodégénératives.

Introduction

Les RGC sont des neurones à différenciation terminale et, par conséquent, les cellules primaires sont nécessaires à l'expérimentation. Le développement d'un protocole pour l'isolement et l'enrichissement des cellules ganglionnaires rétiniennes murines primaires (RGC) est fondamental pour révéler les mécanismes de la santé et de la dégénérescence du RGC in vitro . Ceci est particulièrement important pour les études qui cherchent à générer des thérapies potentielles pour promouvoir la fonction RGC et pour minimiser leur décès. La dégénérescence des RGC est associée à des maladies dégénératives de la rétine, telles que le glaucome, la rétinopath....