Ce manuscrit décrit un protocole pour l’imagerie in vivo de la rétine de souris avec tomographie à cohérence optique haute résolution de domaine spectral (SD-OCT). Il se concentre sur les cellules ganglionnaires rétiniennes (RGC) dans la région péripapillaire, avec plusieurs de numérisation et de quantifier les approches décrites.
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Article de méthode
Tomographie par cohérence optique : Imagerie souris ganglionnaires rétiniennes cellules In Vivo
* These authors contributed equally
Dans cet article
Résumé
Résumé
Des changements structurels dans la rétine sont des manifestations fréquentes de maladies ophtalmiques. Tomographie par cohérence optique (OCT) permet leur identification en vivo— rapidement, répétitive et en haute résolution. Ce protocole décrit l’imagerie OCT dans la rétine de souris comme un outil puissant pour étudier les neuropathies optiques (OPN). Le système OCT est une alternative non invasive, basée sur l’interférométrie à commune analyses histologiques post-mortem . Il fournit une évaluation rapide et précise de l’épaisseur rétinienne, prévoyant la possibilité de suivre les changements, tels que la rétine amincissement ou épaississement. Nous présentons le processus et l’analyse d’imagerie avec l’exemple de la lignée de sourisdelTTAG Opa1. Trois types d’analyses sont proposées, avec deux méthodes de quantification : étriers standards et faits maison. Ce dernier est préférable pour une utilisation sur la rétine péripapillaire lors des balayages radiaux ; être plus précis, est préférable pour l’analyse des structures plus fines. Toutes les approches décrites ici sont conçues pour des cellules ganglionnaires rétiniennes (RGC) mais sont facilement adaptables à d’autres populations cellulaires. En conclusion, l’OCT est efficace pour le phénotypage de modèle de souris et a le potentiel d’être utilisé pour l’évaluation fiable des interventions thérapeutiques.
Introduction
OCT est un outil de diagnostic qui facilite l’examen des structures rétiniennes1, y compris la tête du nerf optique (ONH). Au fil des ans, il est devenu un indicateur fiable de la progression de la maladie chez les humains2,3, ainsi que dans les rongeurs4,5. Il utilise l’interférométrie pour créer des images en coupe transversale des couches de la rétiniens avec une résolution axiale de 2 µm. La couche la plus profonde est la fibres nerveuses rétiniennes de couche (CFNR), contenant des axones de la CJR, qui est suivie par la cou....
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Protocole
le protocole expérimental a été approuvé par l’Institut national de la santé et de la recherche médicale (Inserm ; Montpellier, France), est conforme aux directives européennes et est conforme à la déclaration de l’ARVO pour l’utilisation des animaux dans la recherche ophtalmologique. Elle a été menée en vertu de l’accord du Languedoc Roussillon courtoisie d’éthique en expérimentation animale (CEEALR ; nuCEEA-LR-12123).
1. matériel d’installation et préparation de l’imagerie pré
Remarque : ici, l’OCT a été réalisée sur la rétine de souris à l’aide du système d’imagerie ophtalmique domaine spectral (SD) (
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Résultats
La technologie SD-OCT permet d’imaginer rétinienne et l’analyse d’épaisseur qui est comparable à l’histologie, mais est plus rapide et plus détaillée (Figure 3). Tel que présenté avec les souris C57Bl/6 type sauvage, même si la qualité d’une analyse de SD-OCT (Figure 3 a, droite) n’est pas aussi bonne que celle d’une image d’une coupe de rétine (Figure 3 a, à gauche), il visualise plusieurs calques (.......
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Discussion
Le système de l’OCT, un non invasif en vivo méthode, d’imagerie fournit haute résolution scans rétiniens de cross-transversalement-comme. Ainsi, son principal avantage est la possibilité d’une analyse détaillée, avec l’occasion merveilleuse de transposer les protocoles couramment appliqués aux humains, aux modèles de souris.
Dans l’exemple de Opa1delTTAG souris mutantes, SD-OCT résultats ont montré une augmentation de l’épaisseur de couche complexe CFNR et GC, qui .......
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Déclarations de divulgation
Les auteurs n’ont rien à divulguer.
Remerciements
Ce travail a été soutenu par l’Inserm, Université de Montpellier, Retina France, Union nationale des Aveugles et Déficients Visuels (UNADEV), Association Syndrome de Wolfram, Fondation pour la Recherche Médicale, Fondation de France et le laboratoire d’Excellence EpiGenMed programme.
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Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| Mice | |||
| Opa1delTTAG souris | Institut des Neurosciences de Montpellier, INSERM UMR 1051, | France-Opa1 knock-in mice carrying ; Mutation OPA1 c.2708_2711delTTAG sur fond C57Bl6/J | |
| Name | Company | Numéro de catalogue | Comments |
| Equipment | |||
| EnVisu R2200 SD-OCT Imaging System | Bioptigen, Leica Microsystems, Allemagne | - | Système de tomographie par cohérence optique dans le domaine spectral |
| EnVisu R2200 SD-OCT Logiciel du système d’imagerie | Bioptigen, Leica Microsystems, | Allemagne-Logiciel | pour l’acquisition et l’analyse OCT |
| ImageJ 1.48v | Wayne Rasband, National Institutes of Health, États-Unis-Logiciel pour l’analyse | , nécessite le téléchargement et l’installation de deux macros maison : http://dev.mri.cnrs.fr/projects/imagej-macros/wiki/Retina_Tool | |
| Plaque chauffante autorégulante | Bioseb, France | BIO-062 | Protection contre l’hypothermie |
| Nom | >Entreprise | Numéro de catalogue | Comments |
| SuppliesNosering | |||
| - | -Élastique | ||
| Tampons de gaze 3 » x 3" | Curad, USA | CUR20434ERB | Protection contre l’hypothermie |
| Applicateur à embout en coton à double extrémité | Essence of Beauty, CVS Health Corporation, USA-Application | de gel | |
| Cotton Twists | CentraVet, France | T.7979C.CS | Positionnement de la souris |
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Comments |
| Réactifs et médicaments | |||
| Né ; osyné ; phrine Faure 10 % | Laboratoires Europhtha, | Monaco-Dilatation oculaire | |
| Mydriaticum 0.5 % | Laboratoires Thé ; a, France | 3397908 | Dilatation oculaire |
| Cébésine 0,4 % | Laboratoire Chauvin, Bausch& Lomb, France | 3192342 | Anesthésie locale |
| Imalgene 1000 | Merial, France/CentraVet, France | IMA004 | Anesthésie générale |
| Rompun | Bayer Healthcare, Allemagne/CentraVet, France | ROM001 | Anesthésie générale, analgésie, relaxation musculaire |
| NaCl 0.9 % | Laboratoire Osalia, France ; | 103697114 | Sérum physiologique |
| Systene Ultra | Alcon, Novartis, | USA-Hydratation | des yeux |
| GenTeal’Alcon | , Novartis, USA-Gel | ophtalmique pour minimiser la réfraction de la lumière et les opacités | |
| Aniospray Surf 29 | Laboratoires Anios, France | 59844 | Désinfectant |
Références
- Drexler, W., Fujimoto, J. G. State-of-the-art retinal optical coherence tomography. Prog Retin Eye Res. 27 (1), 45-88 (2008).
- Grenier, J., et al. WFS1 in Optic Neuropathies: Mutation Findings in Nonsyndromic Optic Atrophy and Assessmen....
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Réimpressions et autorisations
