Greffe de la tumeur dans un modèle murin de xénogreffe de lymphome du manteau homme

Résumé

Lymphome du manteau (MCL) est difficile à traiter la maladie de lymphocytes B et il est tout aussi difficile d’établir un modèle de souris de xénogreffe de MCL primaire pour étudier et développer des produits thérapeutiques. Nous décrivons ici la mise en place réussie des xénogreffes MCL chez les souris pour aider à comprendre sa biologie sous-jacente.

Résumé

Les lymphocytes B sont des acteurs essentiels dans la circulation de cellules immunitaires et ils abritent principalement et résident dans les organes lymphoïdes. Tandis que les cellules normales de B se multiplient uniquement quand ils sont stimulés par les lymphocytes T, oncogènes B cellules survivent et développez autonome dans des créneaux orgue indéfini. Lymphome du manteau (MCL) est un tel désordre de lymphocytes B, où le taux de survie médiane des patients est 4-5 ans. Cela nécessite le besoin de mécanismes efficaces par lesquels le homing et la prise de greffe de ces cellules sont bloqués afin d’augmenter la survie et la longévité des patients. Par conséquent, les efforts pour développer un modèle de xénogreffe de souris pour étudier l’efficacité de la thérapeutique de la MCL en bloquant l’autoguidage mécanisme in vivo sont primordial. Développement des bénéficiaires animales pour la xénotransplantation de cellules humaines pour tester des médicaments de stade précoce ont longtemps été poursuivies, comme modèles murins précliniques pertinentes sont cruciales pour nouveaux agents thérapeutiques écran. Ce modèle animal est développé afin d’éviter le rejet du greffon humain et d’établir un modèle pour les maladies humaines, et il peut être un outil extrêmement utile pour étudier la progression de la maladie de types différents de lymphomes et d’effectuer des essais précliniques de médicaments candidats pour malignités hématologiques, comme MCL. Nous avons établi un modèle de xénogreffe de souris qui service une excellente ressource pour étudier et développer de nouvelles approches thérapeutiques pour MCL.

Introduction

Lymphocytes par nature jouent un rôle majeur dans la surveillance du système immunitaire, et traite des lymphocytes est une étape essentielle dans le montage de l’immunité spécifique de l’antigène^1,2. Ce processus comprend la migration des lymphocytes naïfs T du thymus dans le flux de sang et de là vers les organes lymphoïdes secondaires, y compris les ganglions lymphatiques, rate ou plaques de Peyer où ils rencontrent les antigènes apparentés. Les lymphocytes B se différencient dans la moelle osseuse et migrent comme cellules naïves dans les follicules des organes lymphoïdes secondaires³

Protocole

Les échantillons de sang humain ont été utilisés conformément aux procédures approuvées par l’éthique locale et les comités de l’expérimentation humaine de l’hôpital universitaire de Genève.

Procédures d’animaux ont été effectuées conformément à l’institutionnel éthique Comité of Animal Care à Genève (Suisse) et l’Office vétérinaire Cantonal (numéro d’autorisation : GE/26/15).

1. préparation des cellules mononucléaires de sang périphérique primaire (PBMC) par séparation Gradient de densité

Remarque : 3 à 5 mL de sang périphérique provenaient de patients qui présentent des MCL dans une ph....

Résultats

Le manuscrit décrit un protocole optimisé pour la mise au point d’un modèle de souris de xénogreffe pour greffe de cellules MCL. Préparation d’une population de cellules pur (dans ce cas cellules MCL), est très essentiel d’élaborer des xénogreffes MCL réussies. La figure 1 représente les étapes préparatoires pour l’isolement de cellules mononucléées du sang du patient MCL de séparation gradient de densité. Les cellules mononucléaires sont traitées ultérieurem.......

Discussion

Les essais cliniques sont possibles pour les médicaments qui sont à un stade avancé de développement, mais ne peut pas être utilisés pour la découverte de médicaments. Efforts visant à développer les animaux receveurs pour la xénotransplantation de cellules humaines afin de tester des médicaments de stade précoce ont longtemps été poursuivi. Nous présentons ici un modèle animal qui évite le rejet du greffon humain et peut établir un modèle pour les maladies humaines, comme le MCL. À l’heure actuelle, c’est un modèle de x.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Milieu Ficoll-paque	GE Healthcare	17-1440-02	pour la séparation de cellules mononucléées
RPMI Medium 1640	Gibco-Life technologies	61870-010	pour la dilution d’un échantillon de sang
Phosphate Buffered Saline (PBS)	Sigma-Aldrich	D8537	lavage de cellules
Albumine sérique bovine (BSA)	Sigma-Aldrich	A8412	pour la préparation du PBS avec 1 % de BSA utilisé dans le lavage des cellules pendant l’isolement
CD19-APC700	Beckman Coulter	B49212	marqueur de cellules pan-B humaines
CD20-APC	Beckman Coulter	A21693	marqueur de cellules pan-B humaines
CD20-ECD	Beckman Coulter	IM3607	marqueur de cellules pan-B humaines
CD5-PC 5.5	Beckman Coulter	PN A70203	marqueur
CD23-PE	Pharmingen	555711	Protéine de surface cellulaire généralement absente dans MCL
CD45 KO	Beckman Coulter	B36294	Marqueur pan-leucocytaire
CD200-PE	Pharmingen	552475	Protéine de surface cellulaire généralement absente chez les souris MCL
NOD scid gamma (NSG)	Charles River Laboratories	5557	utilisée pour développer des xénogreffes MCL dans cette étude
Kit d’enrichissement de cellules B humaines faciles à utiliser	de cellules souches	19054	utilisées pour enrichir les cellules B afin d’obtenir des cellules pures à injecter dans
des souris FACS Beckman	Coulter	Navios	utilisé pour caractériser l’échantillon de MCL et pour étudier les organes pour la greffe de MCL
1X chlorure d’ammonium tampon			tampon de lyse du sang rouge (NH4Cl 8 024 mg/l ; KHCO3 1 001 mg/l ; EDTA. Na2 et point moyen ; 2H2O 3,722 mg/l )

de cellules T humaines Technologies de potassium