À l’aide de In Vivo et tissulaire et cellulaire Explant approches à l’étude de la morphogénèse et la pathogenèse de l’aorte embryonnaire et périnatale

Ashish Misra; Zhonghui Feng; Jiasheng Zhang; Zhi-Yin Lou; Daniel M. Greif

doi:10.3791/56039

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Article de méthode

À l’aide de In Vivo et tissulaire et cellulaire Explant approches à l’étude de la morphogénèse et la pathogenèse de l’aorte embryonnaire et périnatale

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DOI :

10.3791/56039

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12 septembre 2017

Ashish Misra¹ , Zhonghui Feng¹ , Jiasheng Zhang¹ , Zhi-Yin Lou²^,³ , Daniel M. Greif¹

¹Yale Cardiovascular Research Center, Section of Cardiovascular Medicine, Department of Internal Medicine, Yale University School of Medicine, ²Department of Neurology, Yale University School of Medicine, ³Department of Neurology, Xinhua Hospital, Shanghai Jiaotong University School of Medicine

Dans cet article

Résumé

Protocoles pour l’étude de l’aorte murin embryonnaire et périnatale à l’aide en vivo clonale analyse et cartographie sort, explants aortiques et muscle lisse isolé des cellules sont détaillées ici. Ces diverses approches facilitent l’enquête de la morphogenèse de l’aorte embryonnaire et périnatale dans le développement normal et la pathogenèse de la maladie.

Résumé

L’aorte est la plus grosse artère du corps. La paroi aortique est constituée d’une couche interne de cellules endothéliales, une couche intermédiaire d’une alternance de lamelles élastiques et des cellules musculaires lisses (CML) et une couche externe de fibroblastes et de matrice extracellulaire. Contrairement à l’étude généralisée des modèles pathologiques (par exemple, l’athérosclérose) dans l’aorte adulte, sait beaucoup moins sur l’aorte embryonnaire et périnatale. Ici, nous nous concentrons sur les CGS et fournir des protocoles pour l’analyse de la morphogénèse et la pathogenèse de l’embryonnaires et périnatales SMCs aortiques dans un développement normal et la maladie. Plus précisément, les quatre protocoles inclus sont : J’ai) in vivo la cartographie sort embryonnaires et analyse clonale ; II) la culture embryonnaire aorte explant ; III) isolement de SMC de l’aorte périnatale ; et iv) placement pompe mini osmotiques sous-cutanées chez les souris enceintes (ou des femmes enceintes). Par conséquent, ces approches facilitent les recherches des origines, sort et architecture clonale de CML dans l' aorte in vivo. Ils permettent de modulation aorte embryonnaires morphogenèse dans l’utérus par une exposition continue aux agents pharmacologiques. En outre, le tissu aortique isolé des explants ou SMCs aortiques peuvent être utilisés pour mieux comprendre le rôle des gènes spécifiques cibles au cours de processus fondamentaux tels que muscularization, la prolifération et la migration. Ces expériences génératrices d’hypothèse sur CML isolés et l’aorte explanté peuvent ensuite être évalués dans le contexte de in vivo au moyen d’approches pharmacologiques et génétiques.

Introduction

Les systèmes circulatoires de fonction multicellulaires pour fournir des nutriments et l’oxygène aux cellules qui ne sont pas en contact avec le milieu extérieur et pour enlever des déchets produits et dioxyde de carbone de ces cellules. Chez les vertébrés, le principal système circulatoire est composé du cœur, qui pompe le sang à travers une série de vaisseaux sanguins. Les murs de gros vaisseaux sanguins, comme les artères et les veines, se composent de trois couches : je) l’intima ou la couche interne de cellules endothéliales ; II) le support, ou la couche intermédiaire d’une alternance de circonférence allongés des cellules musculaires lisses CML et lamelles élas....