Imagerie des cellules du Cortex cérébral primaire à l’aide d’un système de Culture 2D en direct

Bruna Soares Landeira; Jéssica Alves de Medeiros Araújo; Timm Schroeder; Ulrich Müller; Marcos R. Costa

doi:10.3791/56063

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Article de méthode

Imagerie des cellules du Cortex cérébral primaire à l’aide d’un système de Culture 2D en direct

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DOI :

10.3791/56063

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9 août 2017

Bruna Soares Landeira¹ , Jéssica Alves de Medeiros Araújo¹ , Timm Schroeder² , Ulrich Müller³ , Marcos R. Costa¹

¹Brain Institute, Federal University of Rio Grande do Norte, ²Department of Biosystems Science and Engineering, ETH Zurich, ³The Solomon H. Snyder Department of Neuroscience, Johns Hopkins University

Dans cet article

Résumé

L’imagerie Live est un outil puissant pour étudier les comportements cellulaires en temps réel. Nous décrivons ici un protocole pour le Time-lapse vidéo-microscopie des cellules du cortex cérébral primaire qui permet un examen détaillé des phases adoptées au cours de la progression de la lignée du primaire des cellules souches neurales au différenciée des neurones et cellules gliales.

Résumé

Au cours du développement du cortex cérébral, cellules progénitrices subissent plusieurs séries de symétriques et asymétriques des divisions cellulaires pour générer de nouveaux géniteurs ou neurones mitotiques. Plus tard, quelques progéniteurs basculer vers un sort gliogenic, ajoutant à la population astrocyte et oligodendrocyte. À l’aide de Time-lapse vidéo-microscopie des cultures de cellules primaires de cortex cérébral, il est possible d’étudier les mécanismes cellulaires et moléculaires qui contrôlent le mode de division cellulaire et les paramètres de cycle cellulaire des cellules progénitrices. De même, le sort des cellules postmitotiques peut être examiné à l’aide de protéines spécifiques des cellules fluorescentes journaliste ou études d’imagerie immunocytochimie. Plus important encore, toutes ces caractéristiques peuvent être analysées au niveau unicellulaire, permettant l’identification de cellules souches s’est engagé à la génération de types spécifiques de cellules. Manipulation de l’expression génique peut également être effectuée utilisant virale véhiculée par transfection, permettant l’étude des phénomènes autonome-cellule et cellule-non-autonomes. Enfin, l’utilisation de protéines fluorescentes fusion permet l’étude de la distribution symétrique et asymétrique des protéines sélectionnées au cours de la division et la corrélation avec le destin des cellules-filles. Nous décrivons ici la méthode vidéo-microscopie Time-lapse pour cellules murines primaire cortex cérébral pour plusieurs jours d’images et d’analyser le mode de division cellulaire, longueur du cycle cellulaire et le destin des cellules nouvellement créées. Nous décrivons également une méthode simple pour transfecter de cellules progénitrices, qui peuvent être appliqués pour manipuler les gènes d’intérêt ou simplement étiqueter des cellules avec des protéines de journaliste.

Introduction

Des cellules souches neurales (NSC) générer des neurones et des cellules de macroglial au cours du développement du cortex cérébral. Au début-exocytosis, CNS subissent plusieurs séries de la division cellulaire symétrique et élargir le bassin de l’ancêtre. Ensuite, les CNS divisent asymétriquement pour générer des neurones directement ou indirectement par le biais d’intermédiaires¹. Seulement à mi - à fin-exocytosis, progéniteurs commutateur pour générer les astrocytes et oligodendrocytes²^,³^,⁴. Cependant, les mécanismes complets qui contrôlent la proli....