Un Multimodal à l’approche d’imagerie basée sur Micro-CT et Fluorescence moléculaire de positons pour une évaluation longitudinale de la fibrose pulmonaire induite par la bléomycine chez la souris

Résumé

Nous décrivons un multimodal non invasive d’imagerie approche basée sur la Micro-CT et fluorescence moléculaire tomographie pour une évaluation longitudinale du modèle souris poumon fibrose induite par instillation intratrachéale double de la bléomycine.

Résumé

La fibrose pulmonaire idiopathique (IPF) est une maladie pulmonaire mortelle caractérisée par la destruction progressive et irréversible de l’architecture pulmonaire, ce qui provoque une détérioration significative de la fonction pulmonaire et la mort d’insuffisance respiratoire.

La pathogenèse de l’IPF dans des modèles animaux expérimentaux a été induite par administration de bléomycine. Dans cette étude, nous étudions un modèle de type gif souris induit par une instillation de bléomycine intratrachéale double. Les évaluations histologiques standards utilisées pour l’étude de la fibrose pulmonaire sont invasives terminales. L’objectif de ce travail consiste à surveiller la fibrose pulmonaire grâce à des techniques d’imagerie non invasives comme tomographie moléculaire fluorescente (FMT) et Micro-CT. Ces deux technologies validées avec les conclusions de l’histologie pourraient représenter une approche révolutionnaire fonctionnelle pour suivi non invasif en temps réel de la progression et la sévérité de la maladie du GIF. La fusion des différentes approches représente un peu plus loin pour comprendre la maladie de l’IPF, où les événements moléculaires qui se produisent dans un état pathologique peuvent être observées avec l’ESF et les modifications anatomiques subséquentes peuvent être surveillées par Micro-CT.

Introduction

La fibrose pulmonaire idiopathique (IPF) est une maladie pulmonaire chronique avec une diminution progressive des fonctions pulmonaires qui est malheureusement souvent fatale dans les quatre ans du diagnostic¹. Les principales caractéristiques du CIP sont les dépôts de la matrice extracellulaire et la prolifération des fibroblastes, mais la pathogenèse n’est pas encore pleinement comprise. L’hypothèse la plus soutenue est que plusieurs cycles de lésions pulmonaires provoquent la destruction des cellules épithéliales alvéolaires qui mène à l’altération de la prolifération de cycle de cellules mésenchymateuses, accumulation exagérée des fibroblas....

Protocole

Toutes les expériences animales décrits ci-après ont été approuvés par le Comité de protection des animaux intra-muros à l’expérimentation animale de Chiesi Farmaceutici et ERASMUS MC sous le numéro de protocole : EMC 3349 (138-14-07) se conformer à l’européen UE Directive 2010/63, Italienne D.Lgs 26/2014 et le révisé de « Guide pour le soin et Use of Laboratory Animals »²³.

NOTE : Avant toute utilisation, femelles souris C57Bl/6 (7-8 semaines) consanguines ont été acclimatées pendant au moins 7 jours aux conditions locales vivarium (température ambiante : 20-24 ° C, hygrométrie : 40 à 70 % ; cycle lumière-obscurité ....

Résultats

Résolution spontanée des lésions de fibrose pulmonaire a observé trois semaines après que administration unique de la bléomycine et changements structurels modérés soulignent les limites de ce modèle. Seul un traitement préventif peut être effectué en raison de l’étroite fenêtre thérapeutique qui ne représente pas de pratique clinique¹⁷.

Ici, nous démontrons que notre protocole d’instillation intratrachéa.......

Discussion

Malgré les nombreux groupes de recherche se concentrant sur le développement de nouveaux médicaments pour traiter l’IPF, à l’heure actuelle, deux seulement sont disponibles pour les patients. Il y a un besoin médical urgent de trouver des thérapies plus efficaces⁷ car seul poumon transplantationis capable de prolonger la survie de 4 à 5 ans,²⁶. La préalable indispensable à la médecine translationnelle et développement de nouveaux médicaments est la disponibilité d’un modèle.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
FMT 2500 Système de tomographie par fluorescence	Perkin Elmer Inc.	Constructeur
MMPsense 680	Perkin Elmer Inc.	NEV10126	Protéger de la lumière, ranger la sonde à 4 ° ; C
Logiciel TrueQuant	Perkin Elmer Inc.
Femelle consanguine C57BL/6	San Pietro NatisoneHorst, Pays-Bas (UD),  ;		Avant l’utilisation, les animaux ont été acclimatés pendant au moins 5 jours aux conditions locales du vivarium
Isoflurane	ESTEVE spa	571329.8	Ne pas inhaler
Compteur de cellules automatisé	Dasit XT 1800J	Experimental Builder
Solution saline, chlorure de sodium à 0,9 % (NaCl)	Eurospital	15A2807
Quantum FX Micro-CT scanner  ;	Perkin Elmer Inc.
Sulfate de bléomycine de Streptomyces Verticillus  ;	Sigma	; B2434  ;
Processeur automatique de tissus  ;	ATP700 Histo-Line Laboratories	ATP700  ;
Système d’encastrement  ;	EG 1160 Leica Biosystems	EG 1160
Microtome rotatif	Slee Cut 6062
Scanner de lames numérique  ;	NanoZoomer S60, logiciel d’analyse d’images NIS-AR de Hamamatsu Photonics
;	Nikon
Masson' s Trichrome	Staining Histo-Line Laboratories
10 % de formol à tampon neutre	Sigma	HT5012-1CS
Penn-century modèle DP-4M Insufflateur à puissance sèche	Penn-century	DPM-EXT
PE190 micro tube médical	2 instruments biologiques snc	BB31695-PE/8
Seringue sans aiguille 5 mL	Terumo	SS*05SE1	Couper les planches du piston à l’aide de ciseaux
Hamilton 0,10 mL (modèle 1710)	Étanche au gaz	81022
Robinet d’arrêt 3 voies Discofix	Seringue	4095111
avec aiguille 1 mL	Solution Pic	3,071,260,300,320	Utilisation sans aiguille
Tubes d’alimentation en plastique 18 ga x 50 mm	2instruments biologiques snc	FTP-18-50	Couper obliquement la pointe  ;

expérimental