Déplacement vers le haut : Un Simple et Flexible In Vitro Invasion en trois dimensions Assay protocole

Tanner J. McArdle; Brenda M. Ogle; Felicite K. Noubissi

doi:10.3791/56568

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Article de méthode

Déplacement vers le haut : Un Simple et Flexible In Vitro Invasion en trois dimensions Assay protocole

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DOI :

10.3791/56568

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12 mars 2018

Tanner J. McArdle¹ , Brenda M. Ogle¹^,²^,³^,⁴^,⁵ , Felicite K. Noubissi⁶

¹Department of Biomedical Engineering, University of Minnesota - Twin Cities, ²Stem Cell Institute, University of Minnesota - Twin Cities, ³Masonic Cancer Center, University of Minnesota - Twin Cities, ⁴Lillehei Heart Institute, University of Minnesota - Twin Cities, ⁵Institute for Engineering in Medicine, University of Minnesota - Twin Cities, ⁶Department of Biology, Jackson State University

Dans cet article

Résumé

Ce protocole décrit une analyse inversée invasion verticale qui pourrait être utilisée pour quantifier les capacités de migration et invasion des cellules dans un décor en trois dimensions tout en préservant le microenvironnement cellulaire. Ce dosage est adapté aux cellules rares et/ou sensibles.

Résumé

Bien que les analyses d’invasion 3D ont été développés, le défi demeure pour étudier les cellules sans affecter l’intégrité de leur microenvironnement. Des analyses de 3D traditionnelles telles que la chambre de Boyden exigent que les cellules sont déplacées de l’emplacement original de la culture et déplacés à un nouvel environnement. Non seulement cela perturbe les processus cellulaires qui sont intrinsèques au microenvironnement, mais il se traduit souvent par une perte de cellules. Ces problèmes sont particulièrement difficiles lorsqu’il s’agit des cellules qui sont soit rares, soit extrêmement sensible de leur microenvironnement. Nous décrivons ici le développement d’un test 3D invasion qui évite les deux préoccupations. Dans ce test, les cellules sont bien plaquées au sein d’un petit et une matrice de ECM contenant un facteur chimiotactique est dressée au sommet des cellules. Cela ne nécessite aucun déplacement de la cellule et permet aux cellules d’envahir le haut dans la matrice. Dans cet essai, invasion des cellules ainsi que la morphologie des cellules peut être évaluée dans le gel de collagène. À l’aide de ce test, nous caractérisons les capacités invasives des cellules rares et sensibles ; les cellules hybrides résultant de la fusion entre les cellules de cancer du sein MCF7 et mésenchymateuses/multipotentes tige/stroma cells (MSCs).

Introduction

Motilité cellulaire est un processus normal de développement et physiologique des cellules. Cependant, des changements dans le modèle et la capacité des cellules de migrer et d’envahir sont associées à certaines pathologies incluant les maladies inflammatoires et métastases de cancer¹^,²^,³. Métastase est sans doute l’aspect le plus mal compris dans le cancer. Pour métastases, les cellules cancéreuses doivent dégrader la matrice extracellulaire (ECM), envahissent le tissu local et intravasate. Une fois en circulation, les cellules cancéreuses diffusera sur le site distant, extr....