Collecte de sperme provenant de l’appareil reproducteur féminin et la mesure de la liquéfaction du sperme chez les souris après l’accouplement

Résumé

Liquéfaction du sperme est nécessaire pour les spermatozoïdes de se libérer du gel séminal. Cette étude fournit les procédures de collecte de sperme du coït postérieure de l’appareil reproducteur féminin et mesurer le temps de liquéfaction de sperme.

Résumé

Chez la souris, le sperme éjaculé est déposé dans l’utérus. Après l’éjaculation, le sperme varie de consistance gélifiée aqueuse, un processus appelé liquéfaction. Dans cette étude, nous montrons comment recueillir le sperme éjaculé après de l’appareil reproducteur féminin dans un modèle murin. Tout d’abord, adultes femelles dans la phase d’oestrus étaient logés dans la cage du mâle pendant la nuit. Le lendemain matin, la copulation a été confirmée par la présence du bouchon copulatoire lors de l’ouverture vaginale. Les souris femelles à des bouchons copulateurs ont été euthanasiés, et chaque appareil reproducteur a été recueilli dans son ensemble (vagin, utérus, ovaires, oviductes), assurant un système fermé pour contenir le sperme. L’appareil génital a été placé dans un tube de microtubes de 1,5 mL, et le vagin a été coupé pour libérer le sperme dans le tube. Pour assurer le volume de sperme maximum pour analyse, pinces édentés servaient à serrer les cornes utérines de fin ovarienne à extrémité vaginale expulser le sperme restant. L’ensemble génital a été défaussée. Le tube contenant du sperme a été brièvement tourné vers le bas. Une pipette capillaire 25 μL a été placée dans le tube à un angle de 180° (parallèle à la paroi du tube). L’intervalle de temps utilisé pour remplir le tube capillaire à la ligne 25 de μL a été enregistré. Sperme d’un éleveur mâle éprouvé prend habituellement environ 60-180 s à remplir un tube capillaire 25 μL. Cette technique de collecte de sperme peut aussi être utilisée dans d’autres applications en aval telles que l’analyse d’imagerie et de la motilité du sperme.

Introduction

L’appareil reproducteur féminin est constitué des voies supérieures et inférieures. Les voies génitales supérieures comprennent des trompes de Fallope, l’utérus et l’endocol. L’appareil génital inférieur comprend l’exocol et le vagin. Chez l’homme, le sperme éjaculé est déposé à la paroi antérieure du vagin, adjacent à l' exocol¹. Chez les souris, cependant, le sperme est balayé dans l’utérus quelques minutes après l’accouplement².

Le sperme contient gel séminal qui est solidifié dans les secondes après l’éjaculation, causant le sperme être pris au piège et immobilisée³....

Protocole

Tous les animaux et les procédures utilisées dans cette étude ont été traitées conformément aux directives animalier Washington State University (WSU) et le Comité d’urbanisme et dans le respect de protocoles animales approuvé par WSU 4702 # et #4735.

1. souris

1. Utilisation standard C57BL/6J souris mâles adultes ou autres souches d’intérêt. Maintenir les animaux dans un environnement de température et humidité contrôlées, avec un accès ad libitum d’eau et de nourriture.
   1. Utiliser des mâles reproducteurs allant de 8 semaines à 10 mois. Utilisez uniquement les éleveurs éprouvés dans les expériences....

Résultats

Sperme a été collecté de CTRL et KO femelles environ 8 h après l’accouplement avec des mâles fertiles de CTRL. Liquéfaction (ou la viscosité du sperme) est quantifiée par le temps nécessaire pour remplir le tube capillaire de 25 μl avec du sperme. Sperme collecté de l’utérus CTRL a 2,06 ±0.12 min (mean±S.E.M, n = 5) pour remplir le tube capillaire (Figure 1). Cependant, le sperme collecté de l’utérus KO a pris plu de 60 min (60,0 ±0, 0, mean±S.E.M, n = 5) du temps expérimen.......

Discussion

Collecte de sperme de l’utérus de souris peut fournir des avantages par rapport aux sperme analyse in vitro que l’ancien peut illustrer les interactions physiologiques entre le sperme et les sécrétions de l’appareil reproducteur féminin. Les techniques présentées dans cette étude permettent aux chercheurs de déterminer la qualité du sperme ainsi que la viabilité de sperme et la motilité dans des conditions physiologiques idéales. En outre, il existe diverses analyses en aval qui peuvent être effectuées .......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Cure-dent	Diamond	750-Flat	Autoclavé stérile, utilisez un cure-dent émoussé. Ne pas utiliser de
ciseaux de dissection	à pointe Fisher	08-940
Ciseaux à ressort	Roboz	RS-5600
Pince fine	Roboz	RS-5045
25-&mu ; Tube capillaire en verre L	VWR	53432-761
Leibovitz' s L-15 media	Life Technologies	11415064	Supplément avec 1 % FBS
Sérum fœtal bovin (FBS)	Gemini Bio-Products	100-106
Tube de microcentrifugation de 1,5 mL	Axygen	MCT-150-C
Tube de microcentrifugation de 2 mL	Axygen	MCT-200-A
Chauffe-bloc sec numérique	VWR	13259-052	Pour réchauffer le tube de microcentrifugation avant le prélèvement de sperme
Minicentrifugeuse	Corning	LSE 6765
Boîte de culture de 35 mm	VWR	10861-656
Tube de centrifugation en polypropylène de 15 mL	VWR	10025-686
Bain d’eau	Précision	TSGP05
Stéréomicroscope à platine chauffée	Leica Microsystems	MZ10F	Pour maintenir les tissus au chaud avant prélèvement de sperme
Microscope à fond clair	Leica Microsystems	DMi8	En option. Pour l’imagerie vidéo de la motilité des spermatozoïdes, la
caméra	Leica Microsystems	DMC2900	en option. Pour l’imagerie vidéo de la motilité des spermatozoïdes
Lames en verre	Fisher	12-552-3	En option. Pour l’imagerie vidéo de la motilité des spermatozoïdes
Coverslip	VWR	48393-059	En option. Pour l’imagerie vidéo de la motilité des spermatozoïdes Eau de
Javel			Diluer en dH2O à une concentration de 10 %

Tube de microcentrifugation