Cet article décrit une méthode d’induction d’état de mal épileptique par injection systémique pilocarpine et du contrôle des convulsions récurrentes spontanées des animaux vivants à l’aide d’un système de l’électroencéphalogramme et de télémétrie sans fil vidéo. Ce protocole peut être utilisé pour étudier les mécanismes physiopathologiques de l’épilepsie chronique, épileptogenèse et les crises aiguës.
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Article de méthode
Le modèle Pilocarpine d’épilepsie du Lobe Temporal et EEG surveillance d’un système de télémétrie chez la souris
Dans cet article
Résumé
Résumé
Épilepsie du lobe temporal (TLE) est un trouble neurologique commun à l’âge adulte. Pour les études translationnelles d’épilepsie chronique, pilocarpine induite par l’état de mal épileptique (SE) est souvent choisi pour récapituler les convulsions récurrentes spontanées (SRS). Nous présentons ici un protocole d’induction SE par injection intrapéritonéale (i.p.) de pilocarpine et le suivi des chroniques convulsions récurrentes des animaux vivants à l’aide d’un électroencéphalogramme (EEG) système et télémétrie sans fil vidéo. Nous avons démontré des changements comportements notables qui ont besoin d’attention après injection de pilocarpine et leur corrélation avec la perte neuronale hippocampique à 7 jours et la pilocarpine après 6 semaines. Nous décrivons également les procédures expérimentales de l’implantation d’électrodes pour la vidéo et l’enregistrement de l’EEG et analyse de la fréquence et la durée des crises récurrentes chroniques. Finalement, nous discutons les raisons pouvant expliquer pourquoi les résultats attendus ne sont pas atteints dans chaque cas. Ceci fournit un aperçu de la modélisation d’une épilepsie chronique chez les souris et les lignes directrices pour le dépannage. Nous croyons que ce protocole peut servir de référence pour des modèles appropriés d’épilepsie chronique et épileptogenèse.
Introduction
TLE est l’un des plus communs acquis les épilepsies1. Personnes souffrant d’épilepsie l’expérience des crises récurrentes à la suite des activités neuronales anormales dans le cerveau2,3. Étant donné que TLE est souvent insoluble, il est crucial de comprendre les mécanismes fondamentaux qui sous-tendent le développement de l’épilepsie.
Des modèles animaux qui peuvent récapituler les caractéristiques clés de TLE humaine peuvent offrir mieux apprécier physiopathologie TLE, ce qui nous permet de facilement contrôler et manipuler les facteurs critiques épileptoge....
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Protocole
Toutes les procédures expérimentales ont été approuvées par le Comité d’éthique de l’Université catholique de Corée et ont été effectuées conformément au instituts nationaux de santé Guide pour le soin et l’utilisation des animaux de laboratoire (NIH Publications n° 80-23).
1. SE Induction
- Acheter souris C57BL/6NHsd mâles de 8 semaines et pèsent chacune des souris. Ensuite, utilisez un stylo marqueur pour marquer les queues des souris pour leur faciliter l’identification durant l’induction SE.
- Calculer la quantité de bromure de méthyle de scopolamine (scopolamine ; 2 mg/kg), hemisulfate de terbutaline (terbutaline ; 2 mg....
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Résultats
SE réussie peut induire la mort des cellules hippocampiques et SRS (Figure 1 et Figure 2). Nous terminé comportementales aiguës saisies par injection de diazépam à 3 h après le début SE et sacrifié les souris 7 jours ou 6 semaines plus tard.
Pour la surveillance de vidéo-EEG, les souris ont reçu l’implant chirurgie à 4 semaines après SE et cas SRS ont été évalués pendan.......
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Discussion
Cet ouvrage décrit les procédures expérimentales pour l’induction SE et l’évaluation des crises chroniques.
Plusieurs facteurs peuvent affecter l’induction SE réussie. La surveillance comportementale précise selon l’échelle de la Racine est critique pour le développement du SRS. Tête en hochant la tête, clonus du membre antérieur, élevage et en baisse sont les caractéristiques comportementales des crises aiguës se développant en phase SE4,16.......
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Déclarations de divulgation
Les auteurs n’ont rien à divulguer.
Remerciements
Ce travail a été soutenu par la subvention de la Fondation de recherche National de Corée (NRF) financé par le gouvernement coréen (FRO-2014R1A1A3049456) et une subvention de la Corée Health Technology R & D Project à travers la Corée santé Industrie développement Institut (KHIDI), financé par le ministère de la santé et du bien-être social, République de Corée (HI15C2854).
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Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| C57BL/6 | Envigo | C57BL/6NHsd | |
| Scopolamine | nitrate Sigma | S2250 | Make 10X stock |
| Terbutaline hemisulfate salt | Sigma | T2528 | Make 10X stock |
| Chlorhydrate de pilocarpine | Sigma | P6503 | |
| Chlorhydrate de kétamine | Yuhan corporation | ||
| Xylazine chlorhydrate | Bayer Korea | ||
| Diazepam | SAMJIN | ||
| Huile de ricin (Kolliphor EL) | Sigma | C5135 | Polyoxyl 35 huile de ricin hydrogénée |
| Saline | Daihan pharm. Co. | ||
| 5 % | Dextrose Daihan pharm. Co. | ||
| Solution iodée (Povidin) | Pommade vétérinaire Firson | ||
| (Terramycin) | Pfizer | ||
| Blue Nylon | AILEE | NB617 | |
| Mupirocin (Bearoban) | Daewoong Pharmaceutical Co., Ltd | ||
| Ketoprofen | Samchundang Pharm. Co., Ltd | 5 mg/kg | |
| Gentamicin | Huons, Ltd. | Seringue de 5 mg/kg | |
| 1 mL | Sung shim medial Co., Ltd. | ||
| Aiguille de calibre 26 | Sung shim medial Co., Ltd. | 26 G * 13 mm (1/2") | |
| 30 | Cale Sung shim medial Co., Ltd. | 30 G * 13 mm (1/2") | |
| Lame de rasoir | Dorco | ||
| Drill | Saeshin precision Co., Ltd. | 207A, 35K (vitesse) | |
| Système vidéo/EEG de télémétrie | Data sciences International. Inc. | Version 5.20-SP6 | |
| Transmetteur implantable | Data sciences International. Inc. | ETA-F10 | |
| Vis | Sungho Acier | M1.4, 2 mm de longueur acier inoxydable | |
| Matériau dentaire Vertex ; | Dentimex | ||
| Acétone | Duksan pure chemicals Co., Ltd. | CAS 67-64-1 | |
| Paraformaldéhyde (PFA) | millipore | 1.04005.1000 | 4 % ; |
| Saccharose | Sigma | S9378 | Solution à 30 % dans 0,01 M PBS |
| Acétate de violet de crésyle | Sigma | C5042 | |
| Éthanol | EMD Millipore Co. | UN1170 | |
| xylène | Duksan pure chemicals Co., Ltd. | UN1307 | |
| Acide acétique glacial | Junsei chemical | 31010-0350 | |
| FSC33 Clear ; | Leica biosystems | Composé OCT pour la congélation des tissus | |
| DPX Montage pour histologie | Sigma | 6522 | |
| Pinces | Outils scientifiques fins | 11002-12 | |
| Ciseaux | Solco biomedical | 02-2445 | |
| Cadre stéréotaxique | David Kopf Instruments | E51070012 |
Références
- Chang, B. S., Lowenstein, D. H. Epilepsy. N Engl J Med. 349 (13), 1257-1266 (2003).
- Scharfman, H. E. The neurobiology of epilepsy. Curr Neurol Neurosci Rep. 7 (4), 348-354 (2007).
- Rakhade, S. N., Jensen, F. E.
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Réimpressions et autorisations
