Identification des OTX1 et OTX2 comme deux marqueurs moléculaires possibles pour les carcinomes Sinonasal et neuroblastomes olfactifs

Résumé

Homeobox gènes sont des gènes régulateurs, souvent associés à des tumeurs chez les organismes adultes. Nous avons étudié leur expression comparative par immunohistochimie et analyse PCR en temps réel, dans la muqueuse nasale normale et inflammatoires et sinonasal néoplasmes afin de les utiliser comme cibles possibles de diagnostiques et thérapeutiques.

Résumé

OTX boîte homéotique (HB) gènes sont exprimés au cours de la morphogenèse embryonnaire et au cours du développement de l’épithélium olfactif chez les organismes adultes. Les mutations qui se produisent dans ces gènes sont souvent associées à tumorigenèse chez l’homme. Aucune donnée n’est actuellement disponible au sujet de la corrélation possible entre gènes OTX et tumeurs des fosses nasales. Le but de ce travail est de comprendre si les OTX1 et OTX2 peuvent être considérés comme des marqueurs moléculaires dans le développement de tumeurs nasales. Nous avons sélectionné des adénocarcinomes voies nasales et des sinus pour étudier l’expression des gènes OTX1 et OTX2 immunohistochimiques et analyses PCR en temps réel. Les deux OTX1 et OTX2 étaient absents dans tous les échantillons de sinonasal Intestinal Type adénocarcinomes (ITACs). OTX1 mRNA fut identifié seulement en Non-Intestinal Type adénocarcinomes (NITACs), alors que OTX2 ARNm a été exprimé que dans les neuroblastomes olfactif (ONs). Nous avons démontré que l’expression différentielle des gènes pour les OTX1 OTX2 gènes et pourrait être un marqueur moléculaire utile pour distinguer les différents types de tumeurs du sinus.

Introduction

OTX Les gènes de HB sont le vertébrés homologue des gènes orthodenticle Drosophila (otd) et qu’ils codent pour des facteurs de transcription qui sont normalement exprimées au cours de la morphogenèse embryonnaire, mais elles peuvent également être exprimées dans l’organisme adulte avec différentes fonctions . Au cours du développement embryonnaire, ils contrôlent la spécification de l’identité cellulaire, différenciation cellulaire et le positionnement de l’axis¹ du corps. La famille OTX comporte des gènes OTX1 et OTX2 , qui affichent les différentes fonctions. OTX1 est impliqué dans le cerveau et le développement des organ....

Protocole

Toutes les études ont été effectués conformément à la déclaration d’Helsinki (1975) avec consentement éclairé écrit et approuvé par le Comité d’éthique de l’Université de Insubria à Varèse.

1. collecte des échantillons

1. Collecter et répartir tous les échantillons humains Formalin-Fixed Paraffin-Embedded (FFIP) en différents sous-groupes selon la classification de l’OMS de tête et cou tumeurs¹⁴.
   Remarque : Ici, nous avons utilisé les exemples suivants : muqueuse normale sinonasal comme contrôle (10 échantillons) ; Papillome inversé (IP, code ICD-O 8121/1) ; Sinonasal ITAC (CIM-O code 8144/....

Résultats

Dans la muqueuse normale, nous avons observé une réactivité nucléaire forte et homogène des gènes OTX dans l’épithélium de type respiratoire cilié pseudostratifié et dans les cellules glandulaires sous-muqueux (Figure 1 a). Nous avons trouvé expression nucléaire pour OTX1 dans tous les échantillons de NITACs (Figure 1 b), alors que peu ou absence d’immunoréactivité a été soulignée dans ITACs (Figure 1

Discussion

Cette étude montre pour la première fois que, selon les niveaux d’ARNm, les gènes de HB OTX1 et OTX2 sont exprimés dans la muqueuse normale sinonasal et glandes sous-muqueuses, polypes inflammatoires, papillomes sinusienne sinonasal et dans les différents épithéliales et neuroectodermique tumeurs, y compris des carcinomes squameux, type non-intestinal sinonasal adénocarcinomes, tumeurs des glandes salivaires-type, tumeurs neuro-endocrines et ONs.

Modifications et dépannage :

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
RecoverAll Total Nucleic Acid Isolation	Applied Biosystem	AM1975
Kit de transcription inverse d’ADNc haute capacité	Applied Biosystem	4368814
TaqMan Universal PCR Master Mix, no AmpErase UNG	Applied Biosystem	4326614
ABI Prism 7000  ;	Applied Biosystem	270001857
Sonde ACTB	Applied Biosystem		Hors production. Séquence protégée par le droit d’auteur
Sonde OTX1	Applied Biosystem		Hors production. Séquence protégée par le droit d’auteur
Sonde OTX2	Applied Biosystem		Hors production. Séquence protégée par le droit d’auteur
Peroxyde d’hydrogène aqueux	Merk	1072090250
Tampon de citrate	Sigma-Aldrich	20276292
Triton	Sigma-Aldrich	101473728
Tris	Merk	108382
NaCl	Merk	106404
Chèvre Anti-OTX2	Laboratoire de vecteurs d’anticorps		Hors production. Numéro de catalogue non disponible
Rabbit Anti-Goat Antibody	Vector Laboratories	BA5000
ABC-Peroxidase Complex	Vector Laboratories	PK6100
3,3'-diaminobenzidine tetrahydrocloride (DAB)	Sigma-Aldrich	D5905
Harris Hematoxylin	Bioptica	0506004/L
Pertek	Kaltek SRL	1560
BioClear	Bioptica	W01030799