Analyse quantitative de la complexité d’arborisation dendritique neuronale chez la drosophile

Summary

Ce protocole met l’accent sur l’analyse quantitative de la complexité de l’arborisation dendritique neuronale (NDAC) chez la drosophile, qui peut être utilisé pour l’étude de la morphogenèse dendritique.

Abstract

Dendrites sont les projections ramifiées d’un neurone et morphologie dendritique reflète une organisation synaptique au cours du développement du système nerveux. Drosophila larvaire arborisation dendritique neuronale (da) est un modèle idéal pour l’étude de la morphogénèse des dendrites neurales et la fonction des gènes dans le développement du système nerveux. Il existe quatre classes de neurones dopaminergiques. Classe IV est la plus complexe avec une ramification qui couvre presque toute la surface de la paroi corporelle larvaire. Précédemment, nous avons caractérisé l’effet de faire taire les orthologues de drosophile de SOX5 sur la classe de complexité d’arborisation dendritique neuronale IV (NDAC) à l’aide de quatre paramètres : la longueur des dendrites, la superficie de la couverture de la dendrite, le nombre total de branches et la structure de ramification. Ce protocole présente le flux de travail de l’analyse quantitative NDAC, composée de larve dissection, microscopie confocale et procédures d’analyse image à l’aide de logiciels ImageJ. Autre aperçu da développement neuronal et ses mécanismes sous-jacents améliorera la compréhension de la fonction neuronale et fournir des indices sur les causes fondamentales de neurologiques et de troubles du développement neurologique.

Introduction

Les dendrites, qui sont les projections ramifiées d’un neurone, couvrent le champ qui englobe sensoriel et synaptique apports le neurone des autres neurones^1,2. Dendrites sont une composante importante de la formation des synapses et jouent un rôle essentiel dans l’intégration des entrées synaptiques, ainsi que la stimulation électrochimique dans un neurone de multiplication. Arborisation dendritique (da) est un processus par lequel les neurones forment de nouveaux arbres dendritiques et des branches pour créer de nouvelles synapses. Le développement et la morphologie des da, comme la densité de la branche et ....

Protocol

1. préparation expérimentale

1. Préparer des réactifs suivants : phosphate de Dulbecco solution saline tamponnée (PBS) ; Triton X-100 ; 0,2 % PBST (PBS + 0,2 % Triton X-100) ; 32 % de paraformaldéhyde (PFA), dilué dans 4 % avant utilisation ; base d’élastomère de silicone et de salaison ; milieu de montage antifade (p. ex., prolonger or) ; et le vernis à ongle.
2. Préparer le matériel suivant : microscope de dissection, deux tranchants forceps et une paire de ciseaux pour microdissection, un certain nombre de broches pour microdissection, une boîte de pétri pour faire le plat de dissection, les lames de microscope et les lamelles, un microscope ....

Results

Les dendrites des neurones dopaminergiques ont été marquées par la co-surexprimant GFP (SAMU-GFP ; ppk-GAL4) dans le da soma neuronaux et les arbres dendritiques pour l’analyse d’imagerie de fluorescence GFP. La morphologie des dendrites des neurones da a été photographiée par un microscope confocal inversé (Figure 2).

Les dendrites des neurones dopaminergiques ont été tracés à l’aide de logiciels d.......

Discussion

Les dendrites qui innervent l’épiderme sont les régions d’entrée des neurones et leurs morphologies déterminent comment est reçue et traitée par des neurones individuels. Morphologie dendritique développement reflète la modulation de gène d’organisation de dendrite. La drosophile da larvaire neurone du système nerveux périphérique est un modèle important pour étudier le développement de la dendrite en raison de : 1) la similitude fonctionnelle avec mammifères^11,

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Saline tamponnée au phosphate (PBS)	Gibco Life Sciences	10010-023
TritonX-100	Fisher Scientific	9002-93-1
Paraformaldéhyde (PFA)	Microscopie électronique Sciences	15714-S
Sylgard 184 Base en élastomère de silicone et agent de durcissement	Dow Corning Corportation	3097366-0516 ; 3097358-1004
ProLong Gold Antifade Mountant	Thermo Fisher Scientific	P36931
Vernis à ongles  ;	CVS	72180
Stéréomicroscope	Nikon	SMZ800
Microscope confocal	Nikon	Eclipse Ti-E
Boîte de Pétri	Falcon	353001
Pince	Dumont	11255-20
Ciseaux  ;	Roboz Surgical Instrument Co	RS-5611
Épingles à insectes  ;	Roboz Surgical Instrument Co	RS-6082-25
Lames de microscope Fisher	Scientific	15-188-52