Amputation chimique et la régénération du Pharynx dans le planaire Schmidtea mediterranea

Résumé

La planaire Schmidtea mediterranea est un excellent modèle pour l’étude des cellules souches et la régénération des tissus. Cette publication décrit une méthode pour éliminer sélectivement un organe, le pharynx, en exposant les animaux à l’azoture de sodium chimique. Ce protocole décrit également les méthodes de suivi de la régénération du pharynx.

Résumé

Platyhelminthes sont vers plats qui sont extrêmement efficaces à la régénération. Ils doivent cette capacité à un grand nombre de cellules souches qui peuvent répondre rapidement à tout type de blessure. Modèles de lésion commune chez ces animaux retirer de grandes quantités de tissus, qui endommage plusieurs organes. Pour surmonter ces dommages de tissu large, nous décrivons ici une méthode pour supprimer sélectivement un organe unique, le pharynx, dans le planaire Schmidtea mediterranea. Nous y parviendrons par des animaux trempage dans une solution contenant de l’azide de sodium inhibiteur du cytochrome oxydase. Une exposition brève à l’azoture de sodium provoque extrusion du pharynx de l’animal, que nous appelons « amputation chimique. » Amputation chimique supprime le pharynx entier et génère une petite plaie où le pharynx s’attache à l’intestin. Après le rinçage approfondie, amputé de tous les animaux régénèrent un pharynx entièrement fonctionnel dans environ une semaine. Régénération du pharynx nouvelle en voiture des cellules souches dans le reste du corps. Ici, nous fournissons un détaillé protocole d’amputation chimique et décrire les méthodes histologiques et comportementales pour évaluer l’amputation réussie et la régénération.

Introduction

La régénération est un phénomène qui se produit dans tout le règne animal, avec une capacité régénératrice de régénération du corps entier à certains invertébrés aux capacités plus restreintes dans les vertébrés¹. Remplacement des tissus fonctionnels est un processus complexe et implique souvent la restauration simultanée de plusieurs types de cellules. Par exemple, pour régénérer la branche salamandre, ostéoblastes, chondrocytes, neurones, muscles et les cellules épithéliales doivent être remplacé². Ces types de cellules nouvellement généré doivent également s’organiser correctement pour faciliter la nouvelle fonction m....

Protocole

1. préparation

1. Préparation de l’eau planaria ¹⁷
   1. Maintenir les Platyhelminthes dans une solution de sel de X Montjuïc 1. Pour préparer planaire eau, faire des solutions mères de 1 M CaCl₂, 1 M MgSO₄, 1 M MgCl₂, KCl 1 M et 5 M de NaCl dans l’eau ultrapure. Filtre-stériliser avec un stockage à long terme de filterfor flacon de 0,2 µm.
      Remarque : Utiliser uniquement l’eau déionisée ultrapure (avec une résistivité de 18,2 MΩ à 25 ° C) pour préparer les sels de Montjuïc.
   2. Pour préparer un stock de 1 L de solution de sel de 5 X, mélanger 5 mL de 1 M CaCl....

Résultats

Exposition à l’azoture de sodium perturbe la motilité normale des Platyhelminthes, causant des animaux à s’étirer et se tordent. Ces mouvements forcer le pharynx à émerger de la face ventrale de l’animal, et après environ 6 min dans une solution d’azoture de sodium, on peut considérer la pointe blanche du pharynx (Figure 1 b-panneau gauche). Quelques minutes plus tard, les animaux activement sur les contrats et déployez le pharynx en l’enfonç.......

Discussion

Ce protocole décrit une méthode d’ablation sélective du pharynx à l’aide de l’azide de sodium. Autres études ciblées ablation en Australie ont utilisé mis à jour le chirurgie pour enlever les photorécepteurs²¹ ou traitement pharmacologique pour l’ablation de neurones dopaminergiques²². Un avantage significatif de l’amputation chimique par rapport aux méthodes existantes, c’est qu’il ne nécessite pas de chirurgie. La structure rigide du pharynx par rapport au reste du corps .......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Chlorure de calcium dihydraté (CaCl2)	Fisher Chemical	C79-3	Montjuï ; c solution saline
Sulfate de magnésium anhydre (MgSO4)	Fisher Chemical	M65-3	Montjuï ; c solution saline
Chlorure de magnésium hexahydraté (MgCl2)	Acros/VWR	41341-5000	Montjuï ; c solution saline
Chlorure de potassium (KCl)	Acros Organics/VWR	196770010	Montjuï ; c solution saline
Chlorure de sodium (NaCl)	Acros Organics/VWR	207790050	Montjuï ; c solution saline
Bicarbonate de sodium (NaHCO3)	Acros Organics/VWR	123360010	Montjuï ; c solution saline
Copolymère de polypropylène autoclavable Nalgene lowboy avec embout	ThermoFisher Scientific/VWR	2324-0015	Stockage de l’eau
Instant Ocean Sea	Salt Spectrum Marques	Amazon	Planaria Eau
de gentamicine Gemini	Bio-products	400-100P	Eau de Planaria
Lames de rasoir	Microscopie électronique Sciences	71970	Hacher le foie  ;
Poches à douille jetables-16", paquet de 12	aliquotes de foie	Wilton	Amazon
Seringues de 5 mL	BD/VWR	309647	Boîtes
de Pétri-35mm/60mm	Greiner Bio-One/VWR	82050-536/82050-544
Contenants en plastique (différentes tailles)	Ziploc	Amazon	Logement planaires en culture statique
Azoture de sodium	Sigma	S2002
Pipette de transfert	Globe Scientific	138030
Pince - Pince Dumont, Style 5	Microscopie Electronique Sciences  ;	72700-D (0203-5-PO)
Triton X-100	Sigma	T8787
DAPI  ;	ThermoFisher	62247
Streptavidine, Alexa Fluor 488 conjugué	ThermoFisher	S11223
Glycérol	Fisher BioReagents	BP229-1

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