Fabrication de langue matrice extracellulaire et Reconstitution de langue Squamous Cell Carcinoma In Vitro

Résumé

Une méthode est indiquée ici, pour la préparation de la matrice extracellulaire de langue (TEM) avec DÉCELLULARISATION efficace. Le TEM peut servir d’échafaudages fonctionnelles pour la reconstruction d’un modèle de carcinome épidermoïde (TSCC) langue maternelle dans des conditions de culture statique ou agité.

Résumé

Afin de construire un modèle efficace et réaliste pour langue épidermoïde carcinome (TSCC) in vitro, les méthodes ont été créés pour produire DECELLULARISE langue matrice extracellulaire (TEM) qui prévoit les échafaudages fonctionnelles TSCC construction. TEM prévoit une niche in vitro la croissance cellulaire, la différenciation et la migration cellulaire. Les microstructures de native matrice extracellulaire (ECM) et des compositions biochimiques conservées dans la matrice DECELLULARISE fournissent des créneaux spécifiques des tissus pour l’ancrage des cellules. La fabrication du TEM peut être réalisée par digestion désoxyribonucléase (DNase) accompagnée d’un graves de prétraitement organique ou inorganique. Ce protocole est facile à utiliser et assure un rendement élevé pour la DÉCELLULARISATION. Le TEM a montré favorable cytocompatibility pour cellules TSCC dans des conditions de culture statique ou agité, qui permet la construction du modèle TSCC. Un self-made bioréacteur a également été utilisé pour la condition remuée persistante pour la culture cellulaire. TSCC reconstituée à l’aide de TEM a montré les caractéristiques et les propriétés ressemblant à l’histopathologie TSCC clinique, ce qui suggère le potentiel en recherche TSCC.

Introduction

La langue a diverses fonctions importantes, comme la déglutition, articulation et dégustation. Ainsi, l’altération de la fonction de la langue a grand impact sur la qualité de vie de patients'¹. La malignité plus courante dans la cavité buccale est langue carcinome spinocellulaire (TSCC), qui survient généralement chez les personnes qui boivent de l’alcool ou fument du tabac².

Ces dernières années, petits progrès ont été accomplis dans la recherche fondamentale sur le TSCC. Le manque de recherche efficace in vitro des modèles reste un des plus grands problèmes. Ainsi, la matrice extra....

Protocole

Tous les travaux d’animaux a été effectuée conformément à la Loi sur le bien-être animal, lignes directrices et approuvé par animalier institutionnel et le Comité de l’urbanisme, de l’Université Sun Yat-sen.

1. préparation du TEM

1. Exécuter des souris par dislocation cervicale et retirer les languettes à l’aide de la pince à épiler et des ciseaux chirurgicaux stériles.
2. Plonger les languettes dans l’éthanol à 75 % pendant 3 min, puis mettre chaque langue dans un 1,5 mL tube Eppendorf (EP) avec 1 mL de phosphate stérile 10 mM mis en mémoire tampon solution (PBS).
   Remarque : La concentration de PBS dans toutes les étapes s....

Résultats

Ce protocole pour la préparation du TEM s’avère pour être efficace et approprié. Le TEM a montré parfaite DÉCELLULARISATION comparée aux tissus de la langue maternelle. L’efficacité de DÉCELLULARISATION a été confirmée par l’hématoxyline-éosine (HE) coloration (Figure 1A-B). Coloration des résultats qu’il a révélé une disparition complète de la coloration des noyaux en TEM (Figure 1B). En outre, .......

Discussion

Un protocole bien établi pour la fabrication de ECM DECELLULARISE devrait conserver la composition ECM native tout en supprimant les composants cellulaires dans les tissus presque complètement²¹. Malgré les protocoles actuellement déclarés DÉCELLULARISATION nécessitant une perfusion par le système vasculaire pour enlever les matériaux alvéolaires par transport convectif, agitation mécanique a été adoptée ici, connu comme une méthode simple et bon marché traditionnelle²²

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
souris C57-BL/6J	Laboratoire de l’Université Sun Yat-sen Centre
Éthanol	Usine de réactifs chimiques de Guangzhou	HB15-GR-2.5L
Chlorure de sodium	Sangon Biotech	A501218
Chlorure de potassium	Sangon Biotech	A100395
Phosphate de sodium dibasique	Usine	de réactifs chimiques de GuangzhouBE14-GR-500G
Phosphate de Potassium Monobasique  ;	Sangon Biotech	A501211
Tube EP de 1,5 mL	Axygen	MCT-150-A
Congélateur ultra-basse température  ;	Thermo Fisher Scientific
Boîte de culture cellulaire 3,5 cm	Thermo Fisher Scientific	153066
6 cm Boîte de culture cellulaire	Greiner	628160
Triton X-100	Sigma-Aldrich	V900502
Chlorure de calcium	Sigma-Aldrich	746495
Chlorure	de magnésium Sigma-Aldrich	449164
DNase	Sigma-Aldrich	D5025
Sulfate de magnésium	Sangon Biotech	A601988
Glucose	Sigma-Aldrich	158968
Bicarbonate	de sodium Sigma-Aldrich S5761
Ampicilline	Sigma-Aldrich	A9393
Kanamycine	Sigma-Aldrich	PHR1487
Suture chirurgicale	Shanghai Jinhuan
250 mL flacon à large ouverture	SHUNIU	1407
Agitateur magnétique	AS ONE	1-4602-32
CO2 incubateur	SHEL LAB	SCO5A
10 mL seringue	Hunan Pingan
50 mL tube à centrifuger	Greiner	227270
Cellule Cal27	Académie chinoise des sciences, Banque de cellules de Shanghai, Langue,	carcinome épidermoïde, lignée cellulaire
FBS	Hyclone	SH30084.03
4 ° ; C frigo	Haier
Purificateur d’eau	ELGA
Hémocytomètre	BLAU 717805

animalierU2OS, Académie chinoise des sciences, Banque de cellules de Shanghai, lignée cellulaire d’ostéosarcome humain, DMEM/F12, Sigma-Aldrich, D0547, Pyruvate de sodium, Sigma-Aldrich, P5280, Hepes free acide, BBI A600264