Un modèle de souris syngénique Cancer du pancréas pour étudier les effets de l’électroporation irréversible

Résumé

Électroporation irréversible (IRE) est une technique d’ablation non thermique utilisée pour le traitement du cancer du pancréas localement avancé. Etant une technique relativement nouvelle, les effets de l’IRE sur la croissance de tumeur sont mal compris. Nous avons développé un modèle de souris syngénique qui facilite l’étude des effets des IRE sur le cancer du pancréas.

Résumé

Cancer du pancréas (PC), une maladie qui tue environ 40 000 patients chaque année aux Etats-Unis, a échappé avec succès plusieurs approches thérapeutiques, y compris les stratégies immunothérapeutiques prometteurs. Électroporation irréversible (IRE) est une technique d’ablation non thermique qui induit la mort des cellules tumorales sans destruction des structures adjacentes de collagènes, permettant ainsi la procédure à effectuer dans les tumeurs très proche des vaisseaux sanguins. Contrairement aux techniques d’ablation thermique, IRE se traduit par la mort cellulaire par apoptose progressive, ainsi que l’ablation immédiate induite par nécrose et est actuellement dans l’utilisation clinique des patients sélectionnés avec PC localement avancé. Un ablatif, procédure spécifique non ciblés comme IRE peut induire une myriade de réponses dans le microenvironnement tumoral. Quelques études ont abordé les effets de l’IRE sur la croissance tumorale dans d’autres types de tumeur, mais aucun n’ont porté sur PC. Nous avons développé un modèle de souris syngénique de PC dans lequel sous-cutanée (SQ) et l’orthotopic tumeurs peuvent être traités avec succès avec IRE dans un milieu hautement contrôlé, facilitant les diverses études longitudinales post procédure. Ce modèle animal constitue un système robuste pour étudier les effets de l’IRE et les moyens d’améliorer l’efficacité clinique de l’IRE.

Introduction

Adénocarcinome canalaire pancréatique (PC) devrait pour devenir la deuxième cause de décès par cancer aux Etats-Unis autour de 2020,¹. La grande majorité des patients diagnostiqués avec PC finira par mourir de maladie métastatique lointain². Le microenvironnement de la PC est notoirement immunosuppresseur et CHIMIOMORESISTANT. Son stroma desmoplastique contient une rareté des lymphocytes T effecteurs (anti-tumor) et une proéminence des leucocytes immunosuppresseurs, y compris les macrophages associées à la tumeur (EAPV), (MDSCs) des cellules myéloïde suppresseur dérivée et regulatory T cells (Tregs)³

Protocole

Toutes les expériences animales effectuées suivant que ce protocole doit être approuvé par le Comité de l’emploi (IACUC) et un institutionnel animalier respectifs. Toutes les procédures décrites ici ont été approuvés par IACUC UCSD.

1. se procurer les animaux receveurs

Remarque : La lignée de 4580 KPC-Luc a été établie d’une tumeur provenant d’un LSL-Kras^{G12D / +}; LSL-Trp53^{R172H / +}; PDX1^{Cre / +}; LSL-ROSA26 ^{Luc / +} souris (KPC), qui est un modèle issu du génie génétique du PC sur un fond de C57BL/6. L’avantage de cette lignée cellulaire, c’est qu’il exprime constitutiveme....

Résultats

Nous avons suivi la procédure décrite ci-dessus et September 5-6 semaine vieilles souris C57BL/6 de type sauvage inoculés avec 1 x 10⁶ cellules avec 50 % de tumeurs SQ BMM. Lorsque la taille de la tumeur a atteint 5-6 mm de diamètre, quelques-uns des souris ont été euthanasiés, leurs tumeurs ont été excisées et implantés orthotopically chez les souris C57BL/6 un destinataire. IRE a effectué 10 jours après la nidation, comme le montre la chronologie sur la F.......

Discussion

Dans cette étude, nous avons démontré un modèle de souris immunocompétentes pour PC qui peut être utilisé pour étudier les effets de l’IRE sur la croissance de la tumeur. Actuellement, IRE est utilisé comme une technique d’ablation non-thermique uniquement chez les patients de PC localement avancés hautement sélectionnés qui n’ont pas de progression de la maladie lointain après des mois de thérapie préopératoire. Son utilisation a donc été limitée car la plupart des patients avec PC localement avancés développent lointai.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
ECM 830 électroporateur à ondes carrées	Harvard Apparatus	BTX # 45-0002 ( 58018-004 )
2 aiguille réseau d’électrodes	Harvard Apparatus	45-0167
Pédale de sécurité	Harvard Apparatus	45-0211
Platinum Tweezer-trode	Harvard Apparatus	; 45-0486
DMEM-F12 média	ThermoFisher Scientific	11320-033
Sérum de veau fœtal	ThermoFisher Scientific	10437028
Trypsine	ThermoFisher Scientific	25200056
Matrigel	Corning  ;	354230
Isoflurane	Sigma-Aldrich, Inc.
Lacrilube	Fisher Scientific  ;
Buprénorphine	Fisher Scientific  ;
D-luciferrine	Perkin Elmer	122799
IVIS. Système d’imagerie in vivo Perkin	Elmer	124262
souche de souris C57BL/6J	The Jackson Laboratory  ;	000664/Black 6
Cell line (KPC-Luc 4580)	J.J. Yeh Lab à l’Université de Caroline
Aiguilles de seringue BD Precisionglide	Sigma-Aldrich, Inc.
Écouvillon d’alcool Z192406 (alcool isopropylique à 70 %)	BD	326895
Pieds à coulisse numériques	ThermoFisher Scientific	14-648-17
Scalpels jetables, stériles	VWR	21909
Applicateurs à pointe de coton	VWR	89198
Aiguille de suture, 45 cm, taille 6-0	Appareil de Harvard	72-3308
Aiguille de suture, 45 cm, taille 4-0	Harvard Apparatus	72-3314
Povidone-iode 10 %	BD	29900-404
Coussin chauffant jetable  ;	KENT SCIENTIFIC CORP.	TP-3E
Tondeuse à cheveux de souris	KENT SCIENTIFIC CORP.	CL8787
Champ chirurgical	Harvard Apparatus	59-7421
Saline tamponnée au phosphate	ThermoFisher Scientific	10010023

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