Nous présentons ici un système fiable et simple à deux dimensions co-culture (2D) pour étudier l’interaction entre les cellules tumorales et les adipocytes de la moelle osseuse, qui révèle un double effet de facteurs dérivés des cellules de mélanome sur les adipocytes de la moelle osseuse différenciation et constitue également une méthode classique pour l’étude mécanistique de métastase osseuse.
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Article de méthode
Double effet de facteurs dérivés de cellules de mélanome sur la différenciation des Adipocytes médullaires
Dans cet article
Résumé
Résumé
La diaphonie entre les adipocytes de la moelle osseuse et les cellules tumorales peut-être jouer un rôle crucial dans le processus de métastase osseuse. Diverses méthodes sont disponibles pour l’étude de la diaphonie significative ; Toutefois, un système bidimensionnel transwell coculture reste un classique, fiable et un moyen facile pour cette étude de diaphonie. Nous présentons ici un protocole détaillé qui montre la coculture des adipocytes de la moelle osseuse et de cellules de mélanome. Néanmoins, un tel système de co-culture pourrait non seulement contribuer à l’étude de transductions signal cellulaire des cellules cancéreuses induites par les adipocytes de la moelle osseuse, mais aussi à l’avenir mécaniste étude de métastase osseuse qui peut révéler de nouvelles cibles thérapeutiques pour OS métastase.
Introduction
Les métastases osseuses sont très répandus chez les patients atteints de cancer avancé, mais un traitement curatif n’est pas encore disponible. Au-delà se spécialisant dans le stockage de l’énergie sous forme de graisse, les adipocytes peuvent prendre en charge la croissance tumorale et les métastases dans la moelle osseuse et les autres organes1,2,3,4,5,6. En outre, les adipocytes jouent un rôle essentiel dans la régulation du cancer cell biology7<....
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Protocole
Remarque : Toutes les cellules utilisées dans le présent protocole devraient être cultivés depuis au moins trois générations après décongélation de cellules congelées de stock.
1. récolter les facteurs dérivés de cellules de mélanome
-
Préparations
- Obtenir les cellules B16F10 et une lignée de cellules de mélanome de souris.
Remarque : Pour ce protocole, une lignée de cellules de mélanome de souris a été obtenue auprès de la Banque de cellules souches de l’Académie chinoise des Sciences. - Faire un support complet pour la culture de cellules de B16F10 (100 mL). Utilisez le support de l’aigle de....
- Obtenir les cellules B16F10 et une lignée de cellules de mélanome de souris.
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Résultats
Dans la moelle osseuse, les adipocytes peuvent apparaître dans la tumeur microenvironnement1,13,33,34,35 à un stade précoce pour soutenir la progression de la tumeur par l’intermédiaire de facteurs solubles ou activation de12,6,osteoclastogenesis
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Discussion
Cocultures avec inserts ont été largement utilisés pour étudier les interactions cellule-cellule. Le système de co-culture 2D est un moyen efficace d’observer comment les deux pièces de diaphonie in vitro, par lequel nous avons montré ici deux différente axée sur la cellule les effets cancérogènes sur les adipocytes de la moelle osseuse. Plusieurs laboratoires ont utilisé cette méthode pour étudier la diaphonie entre les adipocytes et les cellules de cancer6,1.......
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Déclarations de divulgation
Les auteurs n’ont rien à déclarer.
Remerciements
Nous remercions Dov Zipori (The Weizmann Institute of Science, Rehovot, Israël) gentiment pour nous donner la cellule stromales de moelle épinière murin ligne 14F1.1. Cette étude a été financée par des subventions de la Fondation nationale des sciences naturelles chinoises (nos 81771729) et l’Université Yongchuan hôpital de Chongqing Medical (Nos. YJQN201330 ; YJZQN201527).
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Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| DMEM | Invitrogen Inc. | ||
| Sérum fœtal bovin | Invitrogen Inc. | 16000&ndash ; 044 | |
| Saline tamponnée au phosphate | Invitrogen Inc. | 14190-144 | |
| Insuline | Sigma-Aldrich | 91077C | |
| 3-isobutyl-1-méthyl-xanthine | Sigma-Aldrich | I5879 | |
| Dexaméthasone | Sigma-Aldrich | D4902 | |
| Oil Red o | Sigma-Aldrich | O0625 | |
| Plaque à 24 puits | Corning | CLS3527 | |
| Transwell insert | Millipore | MCHT24H48 | |
| Pénicilline/Streptomycine | Invitrogen | 15140-122 | |
| isopropanol | Sigma-Aldrich | I9516 | |
| 0,25 % trypsine | Thermo Scientific | 25200056 | |
| hémocytomètre | Bio-Rad | 1450016 | |
| Incubateur de culture | Thermo Scientific | ||
| 50 mL falcon | Corning | CLS430828 | |
| Banc Propre | Thermo Scientifique-Microscopie | ||
| Olympus-200 | |||
| &mu ; Pointes de pipette en L | BeyoGold | FTIP620 | |
| 1 000 mL Pointes de pipette | BeyoGold | FTIP628 |
Références
- Wang, J., et al. Adipogenic niches for melanoma cell colonization and growth in bone marrow. Laboratory Investigation. 97 (6), 737-745 (2017).
- Trotter, T. N., et al. Adipocyte-Lineage Cells Support Growth and....
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Réimpressions et autorisations
