Le protocole décrit dans cet article utilise le muscle levator auris longus (LAL) souris pour enregistrer spontanée et évoquée par le nerf des potentiels post-synaptiques (courant-clamp) et des courants (voltage clamp) à la jonction neuromusculaire. Utilisation de cette technique peut éclairer les clés dans les mécanismes de la transmission synaptique dans des conditions normales et la maladie.
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Article de méthode
Levator Auris Longus Préparation pour l’examen de la Transmission neuromusculaire mammifères dans des Conditions de tension de serrage
Dans cet article
Résumé
Résumé
Ce protocole décrit une technique d’enregistrement transmission synaptique de la jonction neuromusculaire dans des conditions de courant-clamp et voltage clamp. Une préparation ex vivo de la levator auris longus (LAL) est utilisée parce que c’est un muscle mince permettant de faciliter la visualisation de la jonction neuromusculaire impalement microélectrode à la plaque de serrage moteur. Cette méthode permet l’enregistrement des potentiels de plaque d’extrémité de miniatures spontanée et courants (mEPPs et avaient), évoquée par le nerf endplate potentiels et courants (EPPs et EPCs), ainsi que les propriétés de la membrane de la plaque de serrage moteur. Résultats obtenus par cette méthode incluent le contenu quantique (QC), nombre de sites de libération vésiculaire (n), les probabilités de la libération des vésicules (prel), facilitation synaptique et la dépression, ainsi que la constante de temps de membrane musculaire (τ m) et la résistance d’entrée. L’application de cette technique de modèles murins de la maladie humaine peut mettre en évidence les principales pathologies dans les états pathologiques et aider à identifier des stratégies de traitement novateur. Par tension-serrage entièrement une seule synapse, cette méthode fournit une des analyses plus détaillées de la transmission synaptique actuellement disponible.
Introduction
Étude de la transmission synaptique à la jonction neuromusculaire permet de mieux comprendre la relation dynamique entre les systèmes musculaires, nerveux et squelettiques et est un excellent modèle pour étudier la physiologie synaptique. Le releveur auris longus (LAL) est un muscle mince, permettant au niveau des jonctions neuromusculaires à visualiser facilement. Les rapports précédents ont décrit la commodité d’utiliser la LAL pour examiner les toxines et les médicaments synaptiques et ont caractérisé les caractéristiques de type de fibre musculaire squelettique de la LAL1,2. De nombreuses études o....
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Protocole
Toutes les procédures d’animaux ont été effectuées conformément à l’usage Comité de Wright State University et animalier.
1. souris euthanasie
- Sous une hotte, placez votre souris dans un verre hermétique anesthésier la chambre.
- Exposer la souris par inhalation d’une dose létale d’isoflurane (saturation, soit ~ 25 %). Laissez la souris dans la chambre jusqu'à ce qu’aucune respiration ne peut être observée.
- Retirer la souris de la chambre et effectuer une dislocation cervicale comme méthode secondaire de l’euthanasie.
2. enlever les poils de la Surface dorsale de la tête, cou et do....
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Résultats
Figure 8 montre un exemple de l’impulsions de courant (Figure 8 a) et les réponses de la tension (Figure 8 b) d’une fibre LAL sous courant-clamp d’un type sauvage de 12 semaines R6/2 souris. La présence de mEPPs indique que ces documents proviennent de la plaque de serrage moteur. Les enregistrements ont été obtenus dans une solution physiologique normale. Ces enregistrements de courant-clamp peuvent.......
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Discussion
Décrite ici est la préparation et l’utilisation de la souris muscle Lacroix pour la mesure de la transmission neuromusculaire dans des conditions de courant ou de tension-clamp. Il y a plusieurs points importants à considérer pour la dissection de la LAL. Nettoyage des excès du tissu conjonctif du sida de muscle en impalement électrode, comme les électrodes peut accrocher le tissu conjonctif quand leur positionnement pour empalement. Cependant, seulement enlever du tissu conjonctif qui peut être enlevé facilement pour li.......
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Déclarations de divulgation
Les auteurs n’ont rien à divulguer.
Remerciements
Nous remercions le Dr Mark M. Rich et Daniel Miranda commentaires éditoriaux, Ahmad Khedraki pour aider à mettre en place cette technique et Wright State University de soutien financier (fonds de démarrage de A.A.V.).
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Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| Microscope composé Olympus | Olympus BX51WI | ||
| Objectif 10x | Objectif Olympus | UMPLFLN10XW | |
| 40x Olympus | LUMPLFLN40XW | ||
| Verre borosilicaté | Sutter Instruments | BF150-86-7.5 | |
| Caméra CCD | Santa Barbara Instruments Group | ST-7XMEI | |
| Mater-9 Pulse Générateur | Isolateur | ||
| Iso-flex | |||
| d’acquisition et d’analyse de données | 1-2500-0180 | ||
| Électrode bipolaire concentrique | FHC | CBDSH75 | |
| Manipulateur à rotule | Narishige ; | ||
| Seringues non métalliques Calibre 34 | World Precision Instruments | MF34G-5 | |
| Stéréomicroscope Nikon | SMZ800N | ||
| n° 5 Pinces | Outils | ||
| Ciseaux à ressort | de science fine 15006-09 | ||
| N° 2 Pince | Roboz | RS-5Q41 | |
| Microdissection Ciseaux | Roboz | RS-5912SC | |
| Sylgard 184 Kit d’élastomère de silicone | Dow Corning | 2404019862 | |
| Crème dépilatoire | Nair | ||
| Grass SD9 Stimulator | Grass Medical | ||
| Model P-1000 Extracteur de micropipettes | Sutter Instruments | P-1000 | |
| Axon Digidata 1550 Système d’acuisition de données à faible bruit | Dispositifs moléculaires Filtre | ||
| passe-bas Bessell Warner | Instrument Corp. | LPF-8 | |
| Micromanipulateur gaucher | Siskiyou Corp. | MX1641/45DL | |
| Micromanipulateur droitier | Siskiyou Corp. | MX1641/45DR | |
| Manette de mouvement unique | Siskiyou Corp. | MC100e | |
| Siskiyou Corp. | MX1641R | Il a été ajouté à l’axe Z des micromanipulateurs gauchers et droitiers pour permettre à l’axe Z d’être motorisé. Cette configuration personnalisée est moins chère et moins encombrante que l’achat d’un micromanipulateur motorisé à 4 axes. Il nous permet également de contrôler les deux micromanipulateurs avec un seul contrôleur | |
| Tous les produits chimiques ont été commandés par Fisher, à l’exception | |||
| BTS | Toronto Research Chemicals | B315190 | |
| CTX | Alomone Labs | C-270 | |
| 4-Di-2-Asp | Molecular Probes | Les sondes moléculaires ne sont plus une entreprise. Maintenant commandé par Fisher |
Références
- Angaut-Petit, D., Molgo, J., Connold, A. L., Faille, L. The levator auris longus muscle of the mouse: a convenient preparation for studies of short- and long-term presynaptic effects of drugs or toxins. Neurosci Lett. 82 (1), 83-88 (1987).
- Erzen, I., Cvetko, E., Obreza, S., Angaut-Petit, D.
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Réimpressions et autorisations
