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Article de méthode

Intracrânienne subarachnoïdien voie d’Infection pour enquêter sur les rôles des Biofilms de Streptococcus suis en méningite dans un modèle d’Infection de souris

6.6K vues

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DOI :

10.3791/57658

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1 juillet 2018

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Dans cet article

Résumé

Nous décrivons ici la voie intracrânienne subarachnoïdien d’infection chez les souris pour étudier les rôles des biofilms dans Streptococcus suis méningite. Ce modèle d’infection est également adapté pour l’étude de la pathogenèse de l’autre une méningite bactérienne et l’efficacité des nouveaux médicaments contre la méningite bactérienne.

Résumé

Streptococcus suis est non seulement un bactérie pathogène majeur de porcs dans le monde entier, mais aussi un agent zoonotique émergent. Chez les humains et les porcs, la méningite est une manifestation importante des infections à S. suis . Un modèle adapté de l’infection est un outil essentiel pour comprendre les mécanismes des maladies causées par des pathogènes. Plusieurs voies d’infection chez les souris ont été développés pour étudier la pathogenèse de l’infection à S. suis . Cependant, les voies intrapéritonéales, par voie nasale et par voie intraveineuse d’infection ne conviennent pas pour étudier les rôles des composantes de la surface S. suis méningite directement dans le cerveau, comme la matrice extracellulaire de biofilms. Bien que l’inoculation intracisternale a été utilisée pour infection à S. suis , le site d’injection précise n’a pas été décrit. Ici, la voie intracrânienne subarachnoïdien d’infection a été décrite dans un modèle murin d’enquêter sur le rôle des biofilms dans S. suis méningite. S. suis cellules planctoniques ou biofilm État cellules ont été injectées directement dans l’espace sous-arachnoïdien de souris par le biais du site d’injection situé rostrale de la bregma 3,5 mm. Analyse histopathologique et une expression de l’ARNm de TLR2 et cytokines des tissus cérébraux de souris injectées avec des cellules d’État biofilm a clairement indiquent que S. suis biofilm joue un rôle définitif dans S. suis méningite. Cette voie d’infection présente des avantages évidents sur les autres voies d’infection, ce qui permet l’étude de l’interaction hôte-bactérie. En outre, il permet l’effet des composantes bactériennes sur les réponses immunitaires hôte directement dans le cerveau pour être évalués et imite l’entrée bactérienne dans le système nerveux central. Cette voie d’infection peut être étendue pour étudier les mécanismes de la méningite causée par d’autres bactéries. En outre, il peut également être utilisé pour tester l’efficacité des médicaments contre la méningite bactérienne.

Introduction

Streptococcus suis (S. suis) est un bactérie pathogène majeur de porcs dans le monde, provoquant des maladies graves, y compris la méningite, pneumonie, septicémie, endocardite et arthrite1. C’est aussi un agent zoonotique émergent. Jusqu’ici, on a signalé que les neuf sérotypes peuvent provoquer une infection chez l’homme, y compris les sérotypes 2, 4, 5, 9, 14, 16, 21, 24 et 312,3,4. Chez les humains et les porcs, la méningite est l’un des principaux signes cliniques des infections à S. suis . Au Vietnam et en Thaïlande,

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Protocole

Les expériences d’infection de souris ont été approuvés par le laboratoire Animal surveillance Comité de Province de Jiangsu, Chine et effectuées dans le laboratoire Animal Center of Nanjing Agricultural University (numéro de permis : SYXK (Su) 2017-0007).

1. préparation de bactéries

Remarque : S. suis souche virulente de sérotype 2 P1/7 a été isolée provenant d’un porc malade avec méningite19. Souche P1/7 a été cultivé dans le bouillon de Todd-Hewitt (THB, formule par litre de THB : Infusion de cœur, 3,1 g néopeptone, 20,0 g dextrose, 2,0 g ; Chlorure de sodium, 2,0 g ; phosphate d....

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Résultats

SEM analyse a été réalisée afin d’examiner la formation du biofilm dans les conditions expérimentales. Comme illustré à la Figure 1, il y a une différence significative dans la formation de biofilm entre cellules planctoniques (Figure 1A) et biofilm État (Figure 1B). SEM analyse a montré que les biofilms bactéries étaient en touffes et plusieurs couches et ils ont en.......

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Discussion

La voie intracrânienne subarachnoïdien d’infection décrite ici a des avantages évidents sur les autres voies d’infection. Il permet aux chercheurs d’étudier l’interaction hôte-bactérie et l’effet des composantes bactériennes sur les réponses immunitaires hôte directement dans le cerveau, qui miment l’entrée bactérienne dans le système nerveux central. Ainsi, cette voie d’infection peut être étendue pour étudier les mécanismes de la méningite causée par d’autres bactéries. En outre, il peut également être utilisé pour tes.......

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Déclarations de divulgation

Les auteurs n’ont rien à divulguer.

Remerciements

Ce travail a été soutenu par des subventions du National Key Research and Development Programme of China [2017YFD0500102] ; la Fondation nationale des sciences naturelles de Chine [31572544] ; le laboratoire clé Etat des vétérinaire biologie étiologique [SKLVEB2016KFKT005] ; l’Agriculture de Shanghai Applied Technology Development Programme, Chine [G2016060201].

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Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article
NomEntrepriseNuméro de catalogueCommentaires
Bouillon Todd Hewitt(THB)Becton, Dickinson and CompanyDF0492078Dissoudre 30 g de poudre dans 1 L d’eau purifiée. Autoclave à 121° ; pendant 15 min.
AgarDSBIO16C0050Dissoudre 15 g de poudre dans 1 L de THB. Autoclave à 121° ; pendant 15 min.
Système de purification d’eau de référence Milli-QMerck KGaAZ00QSVCUSsans Dnase/ Rnase
NaClTianjin Kemiou Chemical Reagent Co., Ltd10019318Dissoudre 8 g de NaCl, 0,2 g de KCl, 1,42 g de Na2HPO3, 0,27 g de KH2PO4 dans 1 L d’eau purifiée. Autoclave à 121° ; pendant 15 min. Utilisez le KOH pour ajuster le pH à 7,4.
Na2HPO3Xilong Scientific Co., Ltd9009012-01-09Dissoudre 8 g de NaCl, 0,2 g de KCl, 1,42 g de Na2HPO3, 0,27 g de KH2PO4 dans 1 L d’eau purifiée. Autoclave à 121° ; pendant 15 min. Utilisez le KOH pour ajuster le pH à 7,4.
KClXilong Scientific Co., Ltd9009017-01-09Dissoudre 8 g de NaCl, 0,2 g de KCl, 1,42 g de Na2HPO3, 0,27 g de KH2PO4 dans 1 L d’eau purifiée. Autoclave à 121° ; pendant 15 min. Utilisez le KOH pour ajuster le pH à 7,4.
KH2PO4Xilong Scientific Co., Ltd9009019-01-09Dissoudre 8 g de NaCl, 0,2 g de KCl, 1,42 g de Na2HPO3, 0,27 g de KH2PO4 dans 1 L d’eau purifiée. Autoclave à 121° ; pendant 15 min. Utilisez le KOH pour ajuster le pH à 7,4.
KOHXilong Scientific Co., Ltd9009014-01-09Dissoudre 8 g de NaCl, 0,2 g de KCl, 1,42 g de Na2HPO3, 0,27 g de KH2PO4 dans 1 L d’eau purifiée. Autoclave à 121° ; pendant 15 min. Utilisez le KOH pour ajuster le pH à 7,4.
GlycérolSionpharm Chemical Reagent Co., Ltd10010618Dilué avec un volume égal d’eau purifiée, autoclave à 121° ; pendant 15 min
4 % de paraformaldéhydeSionpharm Chemical Reagent Co., Ltd80096675
25 % de glutaraldéhydeSionpharm Chemical Reagent Co., Ltd3009243610 fois dilué avec de l’eau purifiée pour la fixation.
EthanolSionpharm Chemical Reagent Co., Ltd10009218
ChloroformSionpharm Chemical Reagent Co., Ltd10006818
SpctrophotometreDeNovix Inc.DS-11+
Broyeur de cellules à ultrasonsNingBo Scientz Biotechnology Co., LtdJY96-IIN
CentrifugeuseHitachi Koki Co., LtdCT15RE
RéfrigérateurAucma Co., LtdDW-86L500
Microscope électronique à balayageZeissEVO-LS10
FastRNA Pro Green KitMP Biomedicals#6045-050
FastPrep-24 InstrumentMP Biomedicals116005500
Instrument pour PCRSensoQuest GmbH1124310110
QuantStudio 6 FlexThermo Fisher Scientific4485689
SYBR Premix Ex Taq IITakara Biomedical Technology (Beijing) Co., LtdRR820A
Kit de réactifs PrimeScript RT avec effaceurd’ADNgTakara Biomedical Technology (Beijing) Co., LtdRR047A
Processeur de tissus entièrement ferméLeica Biosystems Nussloch GmbHASP200S
Module d’enrobage de paraffine chaufféeLeica Biosystems Nussloch GmbHEG1150H
Microtome rotatif semi-automatiséLeica Biosystems Nussloch GmbHRM2245
Bain-marie pour sections de paraffineLeica Biosystems Nussloch GmbHHI1210
Autostainer XLLeica Biosystems Nussloch GmbHST5010
Agilent 2100Agilent TechnologiesG2939A
Microscope optiqueOlympusBX51

Références

  1. Gottschalk, M., Xu, J., Calzas, C., Segura, M. Streptococcus suis: a new emerging or an old neglected zoonotic pathogen? Future Microbiology. 5, 371-391 (2010).
  2. Goyette-Desjardins, G., Auger, J. P., Xu, J., Segura, M., Gottschalk, M.

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Réimpressions et autorisations

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