Un dosage de Gradient de température pour déterminer les préférences thermiques de larves de drosophile

Résumé

Nous présentons ici un protocole pour déterminer la température environnementale préférée des larves de drosophile à l’aide d’un gradient thermique continu.

Résumé

Beaucoup d’animaux, y compris la drosophile, Drosophila melanogaster, est capables de discriminant les plus infimes différences dans la température ambiante, ce qui leur permet de tenter de découvrir leur paysage thermique préféré. Pour définir les préférences de température des larves sur une plage linéaire définie, nous avons développé une méthode utilisant un gradient de température. Pour établir un gradient directionnel unique, deux blocs d’aluminium sont connectés à des bains d’eau indépendants, dont chacun contrôle la température des blocs individuels. Les deux blocs défini les limites inférieures et supérieures du dégradé. Le gradient de température est établi en plaçant une plaque en aluminium enduit de gel d’agarose sur les deux blocs d’eau contrôlé afin que la plaque couvre la distance entre eux. Les extrémités de la plaque d’aluminium qui est définie sur le dessus des blocs d’eau définit les températures minimales et maximales, et les régions entre les deux blocs forment un dégradé linéaire de la température. Le test de gradient peut être appliqué à des larves de différents âges et peut être utilisé pour identifier des mutants qui présentent des phénotypes, comme ceux présentant des mutations affectant les gènes codant pour des canaux TRP et opsines, qui sont nécessaires pour la discrimination de température.

Introduction

Thermotactisme est employé par des animaux mobiles pour sélectionner un environnement le plus favorable des conditions^1,2,3. Si le climat est trop chaud ou froid, ce comportement est vital pour la survie. En outre, beaucoup d’animaux est sensibles aux très petites différences de température dans la gamme confortable et cherche un cadre avec une température idéale. Ceci est particulièrement important pour les organismes poïkilothermes tels que les mouches des fruits, qui équilibrer la température de leur corps avec l’environnement. Dosages pour surveiller les larve thermotacti....

Protocole

1. le matériel Fabrication et assemblage appareils pour essais de Gradient

1. Fabriquer les plaques aluminium de dosage pour le dosage de gradient directionnel unique.
   1. Couper et broyer chaque plaque de dosage de l’aluminium (Figure 1 a) sur une seule pièce d’aluminium à l’aide d’une scie à ruban et sharp moulin vertical avec les dimensions suivantes : la taille extérieure est 140 x 100 x 9 mm et la taille intérieure est 130 x 90 x 8 mm (Figure 1 b). Anodisé à l’intérieur de chaque plaque de test avec une peinture noire pour le rendre plus facile à visualiser les larves et prévenir la rouille.

Résultats

Afin d’établir une unique bidirectionnel de 18 ° C à 28 ° C dégradé, nous avons mis les températures des deux bains d’eau de 16,8 ° C et 31 ° C. On obtient les températures à 13 points en mesurant la température à 26 postes dans les parties supérieures et inférieures de 6 toutes les zones, les lignes de frontière entre les zones et les extrémités de la surface du gel d’agarose (Figure 2, 2E). La distribution de la température le long du gradi.......

Discussion

Pour assurer le succès de ce protocole, il est important de prendre des mesures pour obtenir un nombre suffisant de larves à réaliser les expériences. Il s’agit d’alimentation avant les mouches en flacons pâte contenant de la levure pendant 2-3 jours afin d’améliorer la ponte. Les flacons doivent être placés dans un bac contenant des flacons d’eau et enfermé dans un sac en plastique transparent, qui maintient l’humidité de l’aliment et favorise les efficaces les larves tout en permettant une exposition à des cycles norma.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Appareil de dosage à gradient
PolyScience 9106, Bain de circulation réfrigéré/chauffé 6L	Thomas Scientific	9106	Ce modèle n’est plus fabriqué. Les modèles de remplacement mis à jour incluent : 1186R00 et 1197U04 pour 120 V, 60 Hz, ou 1184L08 et 1197U04 pour 240 V, 50 Hz.
Plaque de dosage en aluminium (pour gradient unidirectionnel)			Taille extérieure : 14 x 10,1 x 0,9 cm, taille intérieure : 12,9 x 8,7 x 0,8 cm, anodisée noire.
Plaque en aluminium (pour gradient bidirectionnel)			25 x 22 x 0,2 cm, anodisée noire.
		d’aluminium Dimensions extérieures : 25,5 x 5 x 1,4 cm, les paramètres des canaux intérieurs sont illustrés à la figure 1D.
Connecteur pour blocs et tubes en aluminium	McMaster-Carr	91355K82
Tubes sanitaires en silicone Tygon	Tygon	57296	1/4 » ID x 3/8 » OD x 1/16 » mur
Nom	>Entreprise<	>Numéro de catalogue	Comments
Items et réactifs pour
Pestle	USA Scientific	17361	Pilon pour tubes de microcentrifugation de 1,5 mL
Thermomètre	Fluke	51II
Thermocouple	Fluke	K type
Couvercle universel pour microplaques	Corning	6980A77
Plat de 35 mm	Corning	9380D40
Ruban d’étiquetage (pour gradient bidirectionnel)	Fisher Scientific	15-951	Ruban d’étiquetage Fisherbrand 2 po x 14 yds
Agarose	Invitrogen	16500500	Préparer une solution à 1 %
Saccharose	Sigma	S0389-5KG	Préparer une solution à 18 % juste avant de commencer le test
Pinceau Fisher	Scientific	11860
Tubes	à centrifuger de 50 mLDenville	C1062-P
Scoopula	Fisher Scientific	14-357Q
500 mL Flacon rond à col large	Pyrex	1395-500
Passoire à cellules (pore de 300 mm)	PluriSelect	43-50300	Optionnel pour le lavage des larves
Boîte en carton (plateau de flacons)	Genesee Scientific	FS32-124
Nom	Company	Numéro de catalogue	Comments
Drosophila food
Eau			22 400 mL
Semoule de maïs, jaune (à mailles extra fines, floquée) 20 kg	LabScientific Inc.	NC0535320	1 609 g
de levure de bière 100 lb	MP Biomedicals	ICN90331280	379 g
NutriSoy® ; Farine de soja (10 kg/unité)	Genesee Scientific	62-115	221 g
Drosophila Agar, type II (5 kg)	Genesee Scientific	66-103	190 g
Karo sirop de maïs léger	Karo		1 700 mL
4-hydroxybenzoate de méthyle (en suspension dans de l’éthanol à 200 degrés)	Sigma Aldrich	H5501-5KG	72 g/240 mL
Purée d’acide propionique. p.a.,>99,5 % (GC)	Sigma Aldrich	81910-1 L	108 mL
Acide phosphorique  ; réactif ACS, &ge ; 85 % en poids dans H2O	Sigma Aldrich	438081-500 mL	8,5 mL

Bloc distillée