In Vitro Différenciation des souris Granulocyte-macrophage-colony-stimulating Factor (GM-CSF)-production de cellules T auxiliaires (THGM)

Yi Lu; Xin-Yuan Fu; Yongliang Zhang

doi:10.3791/58087

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Article de méthode

In Vitro Différenciation des souris Granulocyte-macrophage-colony-stimulating Factor (GM-CSF)-production de cellules T auxiliaires (T_HGM)

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DOI :

10.3791/58087

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10 septembre 2018

Yi Lu¹^,²^,³ , Xin-Yuan Fu³ , Yongliang Zhang¹^,²

¹Department of Microbiology and Immunology, Yong Loo Lin School of Medicine, National University of Singapore, ²Immunology Programme, Life Sciences Institute, National University of Singapore, ³Cancer Science Institute of Singapore, Yong Loo Lin School of Medicine, National University of Singapore

Dans cet article

Résumé

Nous présentons ici un protocole pour différencier murin granulocyte-macrophage-colony-stimulating-factor-producing cellules T auxiliaires (T_HGM) de cellules CD4 + T naïves, notamment l’isolement des cellules CD4 + T naïves, différenciation des T_HGM, et analyse des cellules T_HGM différenciées. Cette méthode peut être appliquée aux études de la régulation et fonction des cellules T_HGM.

Résumé

Le granulocyte-macrophage-colony-stimulating factor (GM-CSF)-produisant des lymphocytes T helper (T_HGM) est un sous-ensemble de cellules d’assistance T nouvellement identifié qui principalement sécrète GM-CSF sans produire l’interféron (IFN) γ ou interleukine (IL) -17 et se trouve à jouent un rôle essentiel dans la neuro-inflammation auto-immune. Une méthode d’isolement de cellules T CD4 + naïf d’une suspension de cellules individuelles des splenocytes et génération de cellules T_HGM de cellules T CD4 + naïve serait une technique utile dans l’étude de l’immunité à médiation cellulaire T et maladies auto-immunes. Nous décrivons ici une méthode qui le différencie des cellules T CD4 + naïf de souris en cellules T_HGM promues par l’IL-7. Le résultat de la différenciation a été évalué par l’analyse de l’expression de cytokines à l’aide de différentes techniques, notamment des cytokines intracellulaires coloration combinée avec la cytométrie en flux, une quantitative PCR en temps réel (PCR), et dosages immuno-enzymatiques (ELISA). Utilisant le protocole de différenciation T_HGM comme décrit ici, environ 55 % des cellules exprimé GM-CSF avec une expression minimale d’IFNα ou IL-17. L’expression prédominante de GM-CSF par les cellules T_HGM a été confirmée par l’analyse de l’expression du GM-CSF, IL-17 niveaux d’ARNm et protéines et IFNα. Ainsi, cette méthode peut être utilisée pour différencier les cellules T CD4 + naïf à T_HGM cellules in vitro, qui sera utile dans l’étude de la biologie cellulaire T_HGM.

Introduction

Cellules CD4 + T auxiliaires (T_H) sont des éléments essentiels du système immunitaire, ayant un rôle crucial dans la défense de l’hôte contre les agents pathogènes microbiens, dans la surveillance du cancer et l’auto-immunité¹^,²^,³. Lors de l’activation de récepteur (TCR) de lymphocytes T, cellules T CD4 naïves peuvent être différenciés en T_H1, T_H2, T_H 17, ou réglementaires T (Treg) cellules sous l’influence de cytokines différents milieux²^,⁴^, ⁵