Utilisation de la greffe de cellules souches hématopoïétiques pour évaluer l’origine du Syndrome myélodysplasique

Résumé

Les auteurs décrivent l’utilisation de greffe de cellules souches hématopoïétiques (CSH) pour évaluer le potentiel maligne de cellules hématopoïétiques génétiquement. TCSH est utile pour évaluer les diverses cellules hématopoïétiques malignes in vivo comme générant une grande cohorte de souris atteintes de leucémie ou de syndromes myélodysplasiques (SMD) afin d’évaluer de nouveaux traitements.

Résumé

Syndromes myélodysplasiques (SMD) forment un groupe diversifié de troubles de cellules souches hématopoïétiques qui sont définies par l’hématopoïèse inefficace, sang périphérique cytopénies, dysplasie et une propension à la transformation en leucémie aiguë. NUP98-HOXD13 (NHD13) de souris transgéniques récapitulent MDS humaine en termes de sang périphérique cytopénies, dysplasie et transformation en leucémie aiguë. Nous avons démontré précédemment que MDS pouvaient être transférés d’une souris génétiquement modifiée avec MDS aux destinataires sauvage par la transplantation de cellules de la moelle osseuse nucléée MDS (BMNC). Pour mieux comprendre la cellule MDS d’origine, nous avons développé des approches spécifiques de transplantation, immunophenotypically défini sous-ensembles hématopoïétiques. Dans cet article, nous décrivons le processus d’isolement et le repiquage des populations spécifiques de souches hématopoïétiques et des cellules progénitrices. Après transplantation, nous décrivons les approches pour évaluer l’efficacité de la transplantation et la persistance des cellules donneur MDS.

Introduction

Syndromes myélodysplasiques (SMD) représentent un ensemble diversifié de clonale hémopathie caractérisée par l’hématopoïèse inefficace, les preuves morphologiques de la dysplasie et une propension à la transformation de la leucémie myéloïde aiguë (AML)^{1,2 ,3,4}. Hématopoïèse inefficace est reconnu comme un arrêt de la maturation dans la moelle osseuse et les résultats dans le sang périphérique des cytopénies malgré une hypercellulaire moelle^1,3. L’incidence du MDS a été diversement e....

Protocole

Les procédures animaux décrits dans cet article ont été approuvés par le National Cancer Institute à Bethesda animalier et le Comité de l’emploi et sont conformes aux politiques contenues dans la politique de Service de santé publique sur la santé humaine et de Use of Laboratory Animals, le Loi sur le bien-être des animaux et le Guide for the Care and Use of Laboratory Animals.

1. préparation de la cellule

1. Récolte cellules nucléées de moelle osseuse (BMNC)
   1. Utilisez uniquement des matériaux stériles. Stérilisation des instruments réutilisables à l’aide d’un autoclave à vapeur. Acheter des aiguilles, des seringues et vaissel....

Résultats

Nous montrons des chiffres représentatifs des résultats de plusieurs expériences. La figure 1 montre une cytométrie de flux représentant tri experiment. Au cours de la différenciation hématopoïétique normale, comme cellules de sont engager à une lignée hématopoïétique spécifique, ils acquièrent des marqueurs définissant le lignage de surface cellulaire et perdent le potentiel de l’auto-renouvellement. Par conséquent, chez les souris de type sauvage, autorenou.......

Discussion

Bien que MDS sont une maladie clonale de cellules souches hématopoïétiques, le MDS « stem », ou initiatrice des cellules, n’ont pas encore été caractérisées. Nous avons démontré précédemment que SDM peut être transplantables à souris WT à l’aide de la moelle osseuse de souris NHD13 par tcsh, caractérisée par une anémie macrocytaire, leucopénie, neutropénie et des preuves morphologiques de dysplasie¹⁵. En outre, des essais de repeuplement concurrentiel identifié un avantage de croissance des cellul.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Tube à fond rond de 14 mL	Falcon	352057
Hank’s solution saline équilibrée	Lonza	10-527F
Anticorps anti-CD45.2	Southern Biotech	1800-15	LOT# A077-T044O
Seringue de 3 mL	Monoject	8881513934
aiguille de 27 G	BD	305109
aiguille de 20 G	BD
Lineage Cocktail	Miltenyi	130-090-858	LOT# 5170418221
Anticorps anti-biotine	Miltenyi	130-113-288	LOT# 5171109046
1 mL Seringue	Excelint	26027	Seringue à insuline
Lampe chauffante	Thermo Fisher Scientific	E70001901
CAFS machine	Cytec	FACScan	2 lasers, 5 détecteurs de couleur
Instrument de tri FACS	Beckman Coulter	MOFLO ASTRIOS	5 lasers, 23 paramètres, 6 tri simultané de la population Iodure
de propidium	Thermo Fisher Scientific	P3566
Irradiateur gamma	Best Theratronics	Gammacell 40
Tube de prélèvement sanguin	RAM scientific	76011
Destinataire souris	Charles River	B6-LY5.1/Cr, CD45.1
NUP98-HOXD13 souris	n/a	C57Bl/6, CD45.2	Colonie maintenue au NIH
5 mL tube à fond rond	Falcon	352058

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