Évaluation de l’Interface synaptique des cellules primaires humaines T du sang périphérique et le tissu lymphoïde

Maria Steblyanko; Nadia Anikeeva; Marcus Buggert; Michael R. Betts; Yuri Sykulev

doi:10.3791/58143

Un abonnement JoVE est requis pour visualiser ce contenu. Connectez-vous ou commencez votre période d'essai gratuite.

Article de méthode

Évaluation de l’Interface synaptique des cellules primaires humaines T du sang périphérique et le tissu lymphoïde

6.3K vues

⸱

DOI :

10.3791/58143

⸱

30 juillet 2018

Maria Steblyanko¹ , Nadia Anikeeva¹ , Marcus Buggert²^,³ , Michael R. Betts² , Yuri Sykulev⁴

¹Department of Microbiology and Immunology, Thomas Jefferson University, ²Department of Microbiology and Institute for Immunology, Perelman School of Medicine, University of Pennsylvania, ³Department of Medicine Huddinge, Karolinska Institutet, Karolinska University Hospital Huddinge, ⁴Departments of Microbiology and Immunology and Medical Oncology, Sidney Kimmel Cancer Center, Thomas Jefferson University

Dans cet article

Résumé

Le protocole décrit une technique pour étudier la capacité des cellules T humaines primaires polyclonaux pour former des interfaces synaptiques utilisant des bicouches lipidiques planes. Nous utilisons cette technique pour montrer la capacité de formation de synapse différentielle des cellules T primaires humaines dérivées de ganglions lymphatiques et le sang périphérique.

Résumé

La compréhension actuelle de la dynamique et les caractéristiques structurales des interfaces synaptiques de lymphocytes a été en grande partie déterminés par l’utilisation de verre-prise en charge des bicouches planaires et in vitro-T-cellule dérivée des clones ou lignes¹^,² ^,³^,⁴. Comment ces conclusions s’appliquent aux primaire les cellules T humaines isolées du sang ou lymphoïdes tissus ne connaît pas, en partie en raison d’importantes difficultés à obtenir un nombre suffisant de cellules pour analyse⁵. Ici nous abordons cela grâce à l’élaboration d’une technique exploitant les diapositives des flux multicanaux pour construire des bicouches lipidiques planes contenant des molécules d’adhésion et d’activation. La faible hauteur des lames débit favorise la sédimentation cellulaire rapide afin de synchroniser l’attachement cellulaire : bicouche, permettant ainsi aux chercheurs d’étudier la dynamique de la formation de l’interface synaptique et la cinétique de la libération de granules. Nous appliquons cette approche pour analyser l’interface synaptique d’aussi peu que 10⁴ 10⁵ primaire cryoconservés T cellules isolées de ganglions lymphatiques (LN) et du sang périphérique (PB). Les résultats révèlent que la technique de bicouches lipidiques planes roman permet l’étude des propriétés biophysiques des cellules T humaines primaires dérivés de sang et les tissus dans le contexte de la santé et la maladie.

Introduction

Connaissances scientifiques sur les caractéristiques structurales des synapses immunitaires lymphocytes et leur lien avec l’activité fonctionnelle des cellules T ont été recueillies principalement de l’étude des lignées cellulaires et clones provenant de PB. À quel degré ces constatations se rapportent à des cellules primaires de T a obtenu de sang ou des tissus lymphoïdes humains ne sait pas, comme les interfaces synaptiques des cellules T qui résident dans les tissus lymphoïdes et autres n’ont pas été analysés jusqu'à présent. Ce qui est important, nouvelles données suggèrent que les tissus-résident et organes lymphoïdes-dérivés des cellules T peuvent avoir des diff....