Dérivation et différenciation des canines ovarienne des cellules souches mésenchymateuses

Résumé

Ici, on décrit une méthode pour l’isolation, l’expansion et la différenciation des cellules souches mésenchymateuses du tissu ovarien canin.

Résumé

Intérêt pour les cellules souches mésenchymateuses (CSM) a augmenté ces dix dernières années en raison de leur facilité d’isolement, l’expansion et la culture. Récemment, des études ont démontré la capacité de différenciation large que ces cellules possèdent. L’ovaire représente un candidat prometteur pour les thérapies à base de cellules due au fait que c’est riche en MSCs et qu’elle est fréquemment ignorée après chirurgies ovariectomie comme un déchet biologique. Cet article décrit les procédures pour l’isolement, l’expansion, et différenciation des MSCs dérivée de l’ovaire canine, sans la nécessité du tri des cellules techniques. Ce protocole représente un outil important pour la médecine régénérative en raison de la large applicabilité de ces cellules fortement différentiables dans les essais cliniques et applications thérapeutiques.

Introduction

Le nombre d’études publiées qui mettant l’accent sur les cellules souches a considérablement augmenté ces dix dernières années, un effort de recherche qui a été alimenté par l’objectif commun de découverte des thérapies de médecine régénérative puissant. Les cellules souches ont deux marqueurs définissant primaires : auto - rénovation et la différenciation. Cellules souches mésenchymateuses sont responsables de chiffre d’affaires de tissu ordinaire et ont une capacité plus restreinte de la différenciation par rapport aux cellules souches embryonnaires¹. Récemment, plusieurs études ont montré une large gamme de différenciation de MSCs, et un suj....

Protocole

Cette expérience a été réalisée avec les ovaires de quatre chiennes bâtards donnés après interventions chirurgicales non urgentes à un programme de stérilisation canine. Cette expérience a été approuvée par le Comité d’éthique sur l’utilisation des animaux de UNESP-FCAV (protocole n° 026991/13).

1. préparation expérimentale

1. Préparer ou acheter 500 mL tampon phosphate salin de stérile Dulbecco (SPD) sans calcium ou de magnésium.
2. Préparer une collagénase j’ai solution mère en mélangeant 40 µg de l’enzyme dans 1 mL de SPD. Filtrer à l’aide d’un filtre de seringue 0,2 µm et stocker des parties aliquotes de 2 mL à-20 ° C.

Résultats

Isolement de cellules souches mésenchymateuses par ovaire Canine :

La technique d’isolation MSC ovarienne est résumée dans la Figure 1. Après chirurgie, tissu hacher, digestion de collagénase et un changement de support 3 h après le début de la culture, une population de MSC putative avec propriétés de plastique adhésif rapides a été avec succès isolée de tissu ovar.......

Discussion

Ci-après nous fournir la preuve que MSCs peuvent être isolés du tissu ovarien canin, qui est considéré comme un déchet biologique après une ovariectomie. Dû au fait que plusieurs types de cellules se trouvent dans l’ovaire, nous avons proposé un protocole pour sélectionner MSCs basés sur leur adhésion rapide au plastique, qui a sélectionné les cellules qui s’est développée en une monocouche avec une morphologie des fibroblastes.

Le premier rapport de la dérivation de MSCs de moelle osseuse éta.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
DPBS  ;	Thermo Fisher	14190144
Collagenase I	Thermo Fisher	17100017
Gourde à tissu	Corning	CLS3056
DMEM à faible teneur en glucose	Thermo Fisher	11054020
FBS	Thermo Fisher	12484-010
TrypLE express	Thermo Fisher	12604021
StemPro Kit de différenciation de l’adipogenèse	Thermo Fisher	A1007001
StemPro Kit de différenciation de la chondrogenèse	Thermo Fisher	A1007101
StemPro Kit de différenciation de l’ostéogenèse	Thermo Fisher	A1007201
STEMdiff Kit endoderme définitif	StemCell	5110
Pénicilline-Streptomycine	Thermo Fisher	15070063
CD45	AbD Serotec	MCA 2035S
CD34	AbD Serotec	MCA 2411GA
CD90	AbD Serotec	MCA 1036G
CD44	AbD Serotec	MCA 1041
Nestin	Milipore	MAB353
&beta ;-Tubuline  ;	Milipore	MAB1637
DDX4	Invitrogen	PA5 -23378
IgG- FITC	AbD Serotec	STAR80F
IgG- FITC	AbD Serotec	STAR120F