Détection de l’activité de la Phospholipase C dans l’homogénat de cerveau de l’abeille

Résumé

Pour tester les effets inhibiteurs des agents pharmacologiques sur la phospholipase C (PLC) dans différentes régions du cerveau de l’abeille, nous présentons une analyse biochimique pour mesurer l’activité du PLC dans ces régions. Cet essai pourrait être utile pour comparer l’activité PLC entre les tissus, ainsi que chez les abeilles présentant des comportements différents.

Résumé

L’abeille est un organisme modèle pour l’évaluation des comportements complexes et des fonctions cérébrales supérieures, telles que l’apprentissage, la mémoire et la division du travail. Le corps du champignon (MB) est un centre de cerveau supérieur a proposé d’être le substrat neuronal de comportements complexes abeille. Bien que les études antérieures identifié des gènes et protéines différentiellement exprimés dans la ROM et des autres régions du cerveau, l’activité des protéines dans chaque région n’est pas encore pleinement comprise. Pour révéler les fonctions de ces protéines dans le cerveau, analyse pharmacologique est une approche possible, mais il faut d’abord confirmer que des manipulations pharmacologiques modifient en effet l’activité de la protéine dans ces régions du cerveau.

Nous identifié précédemment une expression plus élevée des gènes codant la phospholipase C (PLC) en les MBs que dans d’autres régions du cerveau et évalués sur le plan pharmacologique l’implication du PLC dans le comportement des abeilles. Dans cette étude, nous avons biochimiquement testé deux agents pharmacologiques et confirmé qu’elles ont baissé d’activité PLC dans la ROM et des autres régions du cerveau. Nous présentons ici une description détaillée de la façon de détecter l’activité PLC dans l’homogénat de cerveau des abeilles. Dans ce système de dosage, homogénats provenant de différentes régions du cerveau sont réagit avec un substrat fluorogène synthétique, et fluorescence provenant des activités PLC est quantifiée et une comparaison entre les régions du cerveau. Nous décrivons également notre évaluation des effets de certains médicaments inhibiteurs sur l’activité PLC en utilisant le même système. Bien que ce système est probablement affectée par les autres composés endogènes fluorescence et/ou l’absorption des éléments d’analyse et des tissus, la mesure de l’activité PLC à l’aide de ce système est plus sûr et plus facile que celui utilisant l’analyse traditionnelle, qui nécessite des substrats. La procédure simple et manipulations permettent d’examiner l’activité PLC dans le cerveau et d’autres tissus des abeilles en participant à différentes tâches sociales.

Introduction

L’abeille européenne (Apis mellifera L.) est un insecte eusocial, et les abeilles femelles Voir la reproduction de caste-dépendante et fonction de l’âge de division du travail. Par exemple, dans la caste stérile des abeilles dénommé « travailleurs », des individus plus jeunes nourrissent les couvées tandis que les plus âgés fourrage de nectar et pollen à l’extérieur de la ruche¹. Apprentissage et la mémoire capacité est extrêmement importante dans la vie de l’abeille, parce que les butineuses doivent à plusieurs reprises, aller et venir entre les sources de nourriture et de leur nid et puis communiquer les emplacements des bonnes sourc....

Protocole

1. prise d’alimentation des abeilles

1. Acheter des colonies d’abeilles chez un distributeur local.
2. À l’aide d’un filet à insectes, attraper les abeilles ensileuses qui retournent à la ruche avec des sacs de pollen sur leurs pattes. Transférer les abeilles dans un tube conique en plastique standard de 50 mL et le capuchon du tube (Figure 1). Mettre le tuyau sur la glace pour anesthésier les abeilles.
   NOTE : Porter les vestes désignés pour l’apiculture éviter les piqûres d’abeilles. Soins infirmiers abeilles peuvent également être collectées selon l’expérience. Attraper les abeilles de l’infirmière, observer le comporte....

Résultats

Concentrations de protéine dans des homogénats de cerveau :
Nous avons préparé des homogénats utilisant des abeilles de l’ensileuse. Les concentrations de protéine calculé dans des homogénats de l’originales sont indiquées à la Figure 3. Les concentrations de protéine approximative dans l’homogénat original étaient comme suit : 1,5 mg/mL dans les MBs et 2,3 mg/mL, dans d’autres régions du cerveau. Nous avons utilisé deux abeilles par lot e.......

Discussion

L’examen biochimique de l’activité de la protéine est profondément important pour comprendre la signalisation moléculaire dans le cerveau, parce que l’activité d’une enzyme est affectée par diverses molécules, comme substrats et inhibiteurs et peut, ainsi, passer le long d’avec comportement animal (p. ex., apprentissage et mémoire)⁵. Dans les études de l’abeille, enzymes comme dépendante de l’AMP cyclique protéine kinase A, protéine kinase dépendante du GMP cyclique, PKC, CaMKII phosphory.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Pierce BCA Protein Assay Kit	ThermoFisher Scientific	23227	Le kit de réactifs pour la mesure de la concentration en protéines
Pierce Bovine Serum Albumin Standard Ampoules 2mg/mL	ThermoFisher Scientific	23209	Les échantillons standard utilisés dans le dosage BCA Cire
de paraffine	GC	13B1X00155000141	Cire dentaire utilisée comme étape de dissection
Épingle à insectes	Shiga	N° 0	Acier inoxydable, tête solide
PLCglow	KXT Bio	KCH-0001	Un substrat fluorogénique de
PLC microplaque à 384 puits	Corning	4511	Plaque à faible volume, à fond rond de couleur noire
Lecteur de microplaques Gemini EM	Dispositifs
Edelfosine	Santa Cruz Biotechnology	sc-201021	inhibiteur
pan-PLCSulfate de néomycine	Santa Cruz Biotechnology	sc-3573	inhibiteur pan-PLC