Article de méthode

Utilisation de Autometallography pour localiser et semi-quantifier argent dans les tissus de cétacés

DOI :

10.3791/58232

⸱

4 octobre 2018

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Graduate Institute of Molecular and Comparative Pathobiology, National Taiwan University, 2School of Veterinary Medicine, National Taiwan University, 3Department of Oceanography and Asia-Pacific Ocean Research Center, National Sun Yat-sen University, 4Graduate Institute of Veterinary Pathobiology, National Chung Hsing University

Dans cet article

Résumé

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Un protocole est présenté afin de localiser des Ag dans les tissus hépatiques et rénaux cétacés par autometallography. En outre, une nouvelle méthode de dosage, appelé le test de Ag histologique cétacé (CHAA) est élaboré pour estimer les concentrations Ag dans ces tissus.

Résumé

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Nanoparticules d’argent (AgNPs) ont été largement utilisés dans les produits commerciaux, y compris les textiles, cosmétiques et Articles de santé, en raison de ses forts effets antimicrobiens. Ils peuvent être libérés dans l’environnement et s’accumulent dans l’océan. Par conséquent, AgNPs constituent la principale source de contamination de l’Ag, et la sensibilisation du public de la toxicité environnementale de Ag augmente. Des études antérieures ont démontré la bioaccumulation (chez les producteurs) et le grossissement (chez les consommateurs/prédateurs) AG. Cétacés, comme les prédateurs de l’océan, peuvent ont été négativement touchés par les composés Ag/Ag. Bien que les concentrations de composés Ag/Ag dans les tissus cétacés peuvent être mesurées par spectrométrie de masse à plasma inductif (ICP-MS), l’utilisation de l’ICP-MS est limitée par son coût élevé du capital et de la nécessité de stockage/préparation du tissu. Par conséquent, une méthode d’autometallography (AMG) avec une analyse quantitative d’images en utilisant fixés au formol, paraffine de tissu (FFPE) peut-être constituer une méthode de traitement adjuvant peut localiser distribution Ag au niveau suborgan et estimation de la concentration d’Ag en cétacés tissus. Les signaux positifs de l’AMG sont principalement bruns à noirs granules de différentes tailles dans le cytoplasme de l’épithélium tubulaire rénale proximale, les hépatocytes et les cellules de Kupffer. Parfois, certains amorphe jaune doré à bruns signaux positifs de l’AMG sont notées dans le lumen et les membranes basales des tubules rénaux proximaux. Le dosage pour estimer la concentration de l’Ag est nommé le cétacé histologique Ag Assay (CHAA), qui est un modèle de régression établi par les données de l’analyse quantitative d’images de la méthode de l’AMG et ICP-MS. L’utilisation de AMG avec CHAA pour localiser et quantifier semi métauxlourds fournit une méthodologie pratique pour études spatio-temporelle et interspécifique.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Nanoparticules d’argent (AgNPs) ont été largement utilisés dans les produits commerciaux, y compris les textiles, cosmétiques et Articles de soins de santé, en raison de leur grand effets antimicrobiens1,2. Par conséquent, la production de AgNPs et le nombre de produits contenant de l’AGP sont augmentés au fil du temps3,4. Cependant, AgNPs peut être rejetée dans l’environnement et s’accumulent dans l’océan5,6. Ils sont devenus la principale source de contamination de l’Ag, et la sensibilisation....

Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.

Protocole

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

L’étude a été réalisée conformément aux lignes directrices internationales, et l’utilisation d’échantillons de tissus de cétacés a été autorisée par le Conseil de l’Agriculture de Taïwan (recherche permis 104-07.1-SB-62).

1. tissu préparation des échantillons pour analyse par ICP-SM

Remarque : Les tissus du foie et des reins ont été prélevés de fraîchement morts et modérément autolysée échoués cétacés24, y compris 6 cétacés échoués de 4 espèces différentes, 1 Grampus griseus (Gg), 2 Kogia spp (Ko), 2 Lagenodelphis hosei (Lh), 1 Stenella attenuata (Sa). Ch....

Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.

Résultats

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Des images représentatives des signaux positifs dans les tissus hépatiques et rénaux cétacés AMG sont indiquées à la Figure 5. Les signaux positifs AMG incluent variablement taille brun à noirs granules de différentes tailles dans le cytoplasme de l’épithélium tubulaire rénale proximale, les hépatocytes et les cellules de Kupffer. Occasionnellement, amorphe jaune doré à bruns signaux positifs de l’AMG sont notées dans le lumen et les membranes basales des tub.......

Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Le but de l’étude de l’article est d’établir une méthode de traitement adjuvant pour évaluer la distribution Ag aux niveaux suborgan et pour estimer les concentrations d’Ag dans les tissus de cétacés. Les protocoles actuels comprennent 1) Détermination des concentrations de l’Ag dans les tissus cétacés par ICP-MS, analyse 2) AMG paire assortie d’échantillons de tissus avec des concentrations connues de Ag, 3) mise en place du modèle de régression (CHAA) pour estimer les concentrations d’Ag par des valeurs positives AMG, .......

Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.

Déclarations de divulgation

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Les auteurs n’ont rien à divulguer.

Remerciements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Nous remercions le Taiwan Cetacean Stranding Network pour le prélèvement d’échantillons et de stockage, y compris le Taiwan Cetacean Society, Taipei ; le laboratoire de recherche cétacés (Prof. privilège-Siang Chou), l’Institut d’écologie et de biologie évolutive, Université nationale de Taïwan, Taipei ; le Musée National des sciences naturelles (Dr Chiou-Ju Yao), Taichung ; et la biologie Marine & Cetacean Research Center, National Cheng-Kung University. Nous remercions également le Forestry Bureau, le Conseil de l’Agriculture, le Yuan exécutif pour leur permis.

....

Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article
NomEntrepriseNuméro de catalogueCommentaires
HQ Silver enhancement kitNanosondes#2012
Surgipath ParaplastLeica Biosystems39601006Paraffine
100 % EthanolMuto Pure Chemical Co., Ltd4026
Non-XyleneMuto Pure Chemical Co., Ltd4328
Lame revêtue de silaneMuto Pure Chemical Co., Ltd511614
Verre de couverture (25 x 50 mm)Muto Pure Chemical Co., Ltd24501
MalinolMuto Pure Chemical Co., Ltd20092
GM Coloration à l’hématoxylineMuto Pure Chemical Co., Ltd3008-1
Solution de formol tamponnée neutre à 10 %Chin I Pao Co., Ltd---
Tip (1000 &mu ; L)MDBio, Inc.1000
PIPETMAN Classique P1000Gilson, Inc.
Tube à centrifuger de 15 mlGeneDireX, Inc.PC115-0500
Foie d’aiguillatConseil national de recherches du CanadaDOLT-2
Muscle de l’aiguillatcommun Conseil national de recherches du CanadaDORM-2
Spectrométrie de masse à plasma à couplage inductif (ICP-MS)PerkinElmer Inc.PE-SCIEX ELAN 6100 DRC
FreeZone 6 litres système de lyophilisationLabconco7752030Pour la lyophilisation
BRAND® ; Fiole jaugée SILBERBRANDMerckZ326283
Flacon standard de 30 mL, intérieur plat avec fermeture de 33 mmSavillex Corporation200-030-12Pour la diagestion
Acide nitrique, superpur® ;, 65.0 %Merck1.00441Pour la diagestion
Plaque chauffante/AgitateursCorning® ;PC-220Pour diagestion
Mélangeur de laboratoire à haut cisaillementSilversonSL2TPour l’homogénéisation
Pot d’échantillon stérile en polypropylène (250mL)Thermo Scientific&trade ;6186L05Pour l’homogénéisation
Appareil photo numériqueNikon CorporationDS-Fi2
Microscope optiqueNikon CorporationECLIPSE Ni-U
Shandon&trade ; Finesse&commerce ; 325 microtome manuelThermo Scientific&trade ;
Accu-Cut® ; SRM et commerce ; 200 microtome rotatifSakura1429
Lame de microtome S35FEATHER® ;207500000
Plat et couvercle de coloration de lamesBrain Research Laboratories#3215
Support de coloration en acierBrain Research Laboratories#3003
Centre d’intégration ShandonThermo Scientific&trade ;S-EC
Shandon Citadel® ; transformateur de tissusThermo Scientific&commerce ;
Chauffe-lamesLab-Line Instruments26005
Bain-marieShandon Capshaw3964
Papier filtreMerck1541-070
Prism 6.01 pour windowsLogicielLogiciel de statistiques
ImageJNational Institutes of Health
Acier inoxydable moule d’enrobage de tissusShenyang Roundfin Trade Co., LtdRD-TBM003Pour l’emedding de la paraffine
F123602 commun A78100001H69800003 GraphPad

Références

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. McGillicuddy, E., et al. Silver nanoparticles in the environment: Sources, detection and ecotoxicology. Science Total Environment. 575, 231-246 (2017).
  2. Yu, S. J., Yin, Y. G., Liu, J. F. Silver nanoparticles in the environment. Enviro....

Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.

Réimpressions et autorisations

Demander l’autorisation de réutiliser le texte ou les figures de cet article JoVE

Demander une autorisation

Mots-clés

Nanoparticules d argentlocalisation des m taux lourdsanalyse quantitative d imagesinclusion en paraffine apr s fixation au formolspectrom trie de masse plasma couplage inductifdosage histologique de l argenttraitement des tissusmicroscopie photonique

Articles connexes