Article de méthode

Évaluant l’effet d’anti-dépression de Xiaoyaosan sur des souris de stress chronique

8.8K vues

⸱

DOI :

10.3791/58276

⸱

7 janvier 2019

 ,  ,  ,  , 
1School of Traditional Chinese Medicine, Beijing University of Chinese Medicine, 2Formula-pattern Research Center, School of Traditional Chinese Medicine, Jinan University

* These authors contributed equally

Dans cet article

Résumé

Nous présentons ici un protocole pour établir le modèle de souris dépressif, observer les changements de comportement liés à l’effort doux chronique imprévisible (SMUC) et évaluer l’effet anti dépression de Xiaoyaosan.

Résumé

Outre l’utilisation normalisée des antidépresseurs et psychothérapie, l’utilisation de la médecine traditionnelle chinoise a conduit à une amélioration globale des patients atteints de trouble dépressif majeur (TDM). Par conséquent, le but de cette étude était d’établir le modèle de souris de dépressifs, observer les changements de comportement liés à l’effort doux chronique imprévisible (SMUC) et puis d’évaluer l’effet anti dépression de Xiaoyaosan. Souris ont été divisés au hasard en quatre groupes : un groupe témoin, un groupe de modèles, un groupe de traitement avec Xiaoyaosan et un groupe de traitement par la fluoxétine. Toutes les souris étaient individuellement gardés dans des cages, et la dépression a été induite chez les souris en les exposant aux plusieurs manipulations conçues des CUMS pendant 21 jours, tel que décrit dans le protocole. Souris dans le groupe témoin et le groupe de modèles ont reçu 0,5 mL d’eau distillée, tandis que les souris dans les groupes traités ont reçu soit Xiaoyaosan (0,25 g/kg/jour) ou la fluoxetine (2,6 mg/kg/jour). Les médicaments utilisés dans l’étude ont reçu par voie intragastrique quotidiennement pendant les trois semaines entières. Pour estimer les comportements de type dépressif, une série de paramètres dont l’état de la couche, du poids corporel, ouvrir le résultat de test de terrain, et résultat de test de préférence saccharose ont été enregistrées. Analyse des données a montré que les comportements de modèle de souris ont été sensiblement modifiées par rapport à des comportements de souris du groupe témoin, ont été améliorées par le traitement de la Xiaoyaosan et la fluoxétine. Les résultats récents a démontré les effets anti-dépression de Xiaoyaosan sur les comportements de souris induite par le SMUC et a révélé que les composés de la prescription de Xiaoyaosan pourraient être utiles pour traiter la dépression, compte tenu de leurs effets bénéfiques sur comportements de type dépressif.

Introduction

DDM est une maladie mentale chronique très récurrente que présente avec persistants sautes d’humeur, dépression, faible estime de soi, retard mental, perte d’intérêt, troubles du sommeil, des tendances suicidaires ou profondément pessimistes ; Il a causé beaucoup de tort à la santé humaine et de la stabilisation sociale1. Il est devenu une des principale cause dans le monde du handicap, et c’est peut-être une des principales causes principales de morbidité en 2030, selon l’organisation mondiale de la santé2,3. Actuellement, la psychothérapie et les antidépresseurs sont réputées être le premier choix pour traiter la MDD. Néanmoins, un nombre considérable de patients diagnostiqués avec MDD ne répondre pas aux médicaments continue ou thérapie, et ils sont répertoriés comme ayant4de la dépression résistante aux traitements.

Xiaoyaosan est un classique chinois composé5 qui a été largement utilisée pour traiter les maladies psychologiques pendant des milliers d’années écoulées depuis la dynastie Song en Chine6. Il est composé de 8 herbes chinoises : Radix Paeoniae Alba, Radix Angelicae Sinensis, Poria, Rhizoma Atractylodis Macrocephalae, Radix Bupleuri, Radix Glycyrrhizae, Rhizoma Zingiberis Recens et Herba Menthae. Xiaoyaosan contient plusieurs composants, possède plusieurs cibles et utilise plusieurs voies7. Xiaoyaosan a démontré couramment pour être une formule sûre et efficace pour le traitement de divers troubles liés au mental de maladies, et les études modernes ont aussi porté sur le mécanisme anti-dépression de ce composé8,9, 10. La pathogenèse de la MDD est encore incertaine, bien qu’il existe de multiples hypothèses, y compris l’hypothèse de monoamine, l’hypothèse de récepteurs de neurotransmetteur, l’hypothèse de changement de fonction neuroendocrine, l’hypothèse anomalie du système immunitaire, etc. Plusieurs études ont montré que l’effet antidépresseur de la Xiaoyaosan a un lien avec les bases matérielles les hypothèses ci-dessus11,12, et son action thérapeutique manifestes comme une amélioration de type dépressif 13de comportements.

En outre, la prévalence de la dépression, la société moderne a souffert de réductions dans le marché du travail, retraites anticipées et traitements onéreux14. Le traitement coûteux a besoin d’attention médicale stricte, c'est-à-dire une série de hausse des coûts médicaux et anticipation précise des résultats indésirables précis ainsi que des effets secondaires,15. L’herbe chinoise Xiaoyaosan a composants accessibles, effets uniques et des effets secondaires légers. Son application peut jouer un rôle dans la réduction de la charge de traitement médical moderne. Donc, pour fournir une base plus théorique pour l’application de Xiaoyaosan, une thérapie alternative clinique devrait être disponibles pour le traitement de la dépression, l’incidence des qui augmente d’année en année et devrait améliorer la santé humaine en même temps. Cet article décrit un protocole impliquant l’utilisation de Xiaoyaosan pour prévenir les comportements de type dépressifs en créant le modèle dépressif de la souris. Le test de terrain dégagé et l’épreuve de préférence saccharose ont servi à vérifier les effets de l’antidépresseur de Xiaoyaosan.

Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.

Protocole

Ce protocole a été approuvé par le Comité d’éthique animale de l’Université de Pékin de médecine chinoise et est conforme à toutes les directives pour le soin et l’utilisation des animaux de laboratoire de Chine. Il n’y avait aucune situation de mort accidentelle au cours de la procédure expérimentale, et aucuns animaux ne devaient être euthanasiés dans cette étude.

1. préparer les médicaments pour l’expérience

Remarque : Les herbes chinoises ont été achetés et authentifiées par le Dr B. Liu de l’Université de Pékin de médecine chinoise. Xiaoyaosan contient les médicaments chinois traditionnels huit suivants dans un rapport de 6:6:6:6:3:6:2:2 : Radix Angelicae Sinensis, Radix Paeoniae Alba, Poria, Radix Bupleuri, Radix Glycyrrhizae, Rhizoma Atractylodis Macrocephalae, Herba Menthae et Rhizoma Zingiberis Recens.

  1. Préparer Xiaoyaosan comme décrit précédemment16.
    Remarque : Nous avons extrait ces composés dans la salle de préparation de la médecine chinoise de l’hôpital d’amitié Japon-Chine, et le rendement d’extraction était de 18,8 %.
  2. Vérifier la qualité des Xiaoyaosan par spectrométrie de masse par chromatographie liquide haute performance analysis (LC-MS/MS)17.

2. préparation des souris de la procédure expérimentale

Remarque : À la pour la procédure expérimentale, 60 souris C57BL/6J mâles sains âgés de 12 semaines ont été choisis, avec chaque souris pesant entre 18 et 22 g.

  1. Garder la souris individuellement dans des cages dans une animalerie de laboratoire de spécifiques pathogène gratuit (SPF) typique (22 ± 1 ° C, cycle de 12 h/12 h sombre/clair, humidité relative : 30 – 40 %) pendant une semaine avant l’intervention de la SMUC.
  2. Au hasard de diviser toutes les souris dans un groupe témoin, un groupe de modèles, un groupe de traitement Xiaoyaosan ou un groupe de traitement fluoxetine selon leur poids. Chaque groupe possède 15 souris.
  3. Avant le démarrage de l’expérimentation, numéroter les souris de chaque groupe sur leur queue à l’aide d’un marqueur.
  4. Toutes les souris à l’aide d’un test de préférence de saccharose de cinq jours d’essai (voir étape 5) et un test de terrain dégagé (voir étape 6).

3. induction de la dépression chez les souris

Remarque : Pour provoquer la dépression, les souris dans le groupe de modèles et de deux groupes de traitement a subi CUMS pendant 21 jours,18. Le plan peut être modifié selon la situation concrète, mais le principe que le même facteur de stress ne peut être utilisé en continu doit être suivi.

  1. Exposer les souris par jour à deux des sept stresseurs suivantes pour 21 jours consécutifs,19. Notre plan de modélisation est conçu comme suit :
    1. Lundi, exposer la souris à la privation de nourriture (vide le flux de chaque cage pendant 24 h, 08:00 à 08:00) et la privation d’eau (enlever la bouteille potable de chaque cage pendant 24 h, 08:00 à 08:00).
    2. Mardi, exposer les souris au stress (restrain souris dans une petite baignoire en plastique pendant 3 h, 08:00 à 11:00) de la retenue et cages vides (enlever le rembourrage dans chaque cage pour 11 h, 08:00 à 19:00 h).
    3. Mercredi, exposer des souris dans des cages sales et humides (verser l’eau dans chaque cage et garder humide pendant 24 h, 08:00 à 08:00) et bondé de cages (mettre cinq souris dans une cage pendant 24 h, 08:00 à 08:00 h).
    4. Jeudi, exposer les souris au stress de contrainte et nage glacée20,21 (force chacun de souris de nager dans un aquarium en verre transparent avec l’eau glacée pendant 5 min).
    5. Vendredi, exposer les souris à cages sales et humides et de la privation de nourriture.
    6. Samedi, exposer les souris au stress de contrainte et cages surpeuplées.
    7. Dimanche, exposer des souris à des cages vides et nage glacée.
  2. Enregistrer le manteau état et le poids corporel par semaine jusqu'à la fin de modélisation (21 jours). Calculer le score total de l’état de la couche comme la somme des scores de sept différentes parties du corps : tête, cou, manteau dorsal, pelage ventral, pattes, queue et pattes postérieures. Un score d’un indique une couche bien entretenue, et un score de zéro indique un pelage hirsute22.
  3. Effectuer un test de préférence cinq jours saccharose (voir étape 5) et un test de terrain dégagé (voir étape 6) à la fin de l’expérience.

4. administration de la Xiaoyaosan

Remarque : La dose de Xiaoyaosan (0,25 g/kg/jour) a été sélectionné sur la base de son efficacité satisfaisante comme décrit précédemment9.

  1. Pendant l’expérience, utiliser l’eau distillée pour préparer les suspensions Xiaoyaosan et la fluoxétine et assurez-vous d’utiliser immédiatement.
  2. Donner 0,5 mL d’eau distillée aux souris dans le groupe témoin et le groupe de modèles en administration intragastrique chaque jour avant de modélisation. Pendant ce temps, donner Xiaoyaosan (0,25 g/kg/jour) ou la fluoxetine (2,6 mg/kg/jour) pour les souris dans les deux groupes traités.

5. saccharose préférence Test

Remarque : Aucune privation d’eau ou la nourriture a été appliquée avant l’essai. Le protocole a été réalisé comme indiqué précédemment23.

  1. Sur les deux premiers jours, la maison individuellement les souris avec deux bouteilles remplies d’eau du robinet.
  2. Sur les deux prochains jours, donner les souris deux bouteilles remplies avec 1 % solution sucrée.
  3. Le dernier jour, donner des souris deux bouteilles pour 24h, un avec l’eau du robinet et l’autre avec 1 % solution sucrée. Pour éliminer une préférence de côté des souris dans l’eau potable de comportement, changer la position des deux bouteilles après 12 h.
  4. Noter le volume (mL) de solution sucrée consommée tant l’eau du robinet. Faites le calcul suivant la préférence de saccharose : préférence de saccharose (%) = consommation de saccharose/total consommation de liquide × 100 %.

6. plein champ Test

  1. Effectuez le test de terrain dégagé dans une pièce faiblement éclairée et calme avec une boîte tachée noire en bois à quatre faces. Diviser le plancher en 25 cases égales en lignes bleues.
  2. Nettoyer la zone de plein champ avec 5 % d’alcool avant l’accès de chaque souris. Ensuite, placez votre souris au centre du champ ouvert doucement.
  3. Suspendre une haute définition caméra numérique environ 200 cm juste au-dessus du champ et d’enregistrer le comportement de chaque souris pendant 5 min.
  4. Évaluer la vidéo comportementales de souris par le logiciel de système de vidéo-suivi et enregistrement des données du total exécutant la distance et le nombre d’entrées dans la zone centre.
  5. Analyser les données de la distance totale parcourue et le nombre d’entrées dans la zone centre de logiciel statistique.

Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.

Résultats

Notez que les résultats ont été publiés précédemment par m. Xiu-Fang Ding, et al. 18

Les données ont été exprimées comme la moyenne ± erreur-type de la moyenne (SEM). ANOVA à une ou un test non paramétrique a été utilisé pour les données générales basées sur le test de normalité et le test d’homogénéité de variance. Le test de LSD a été utilisé pour les comparaisons entre les groupes. En outre, l...

Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.

Discussion

Le modèle CUMS utilisé dans cette étude est une méthode courante pour établir le modèle de stress diathèse de dépression24. La plupart des manifestations des CUMS peuvent être reconstituées par les antidépresseurs, qui indiquait que cette méthode de modèle a une forte validité prédictive25. Par cette méthode, les animaux reçoivent des stimuli stressants chroniques imprévisibles et développent des symptômes principaux de la dépression majeure, y compris place une diminution ...

Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.

Déclarations de divulgation

Les auteurs n’ont rien à divulguer.

Remerciements

Cette recherche a été financée par des subventions de la fondation de sciences naturelles nationales de la Chine (no 81630104, no 81473597) et les fonds de recherche fondamentale pour les universités de centrale (no 2018-JYBZZ-XS005). Le protocole et les résultats ont démontré dans cet article provient de l’article de Participation de normalisé gliale fibrillaire acide Expression protéique dans l’hippocampe en Antidepressant-Like les effets de Xiaoyaosan sur la chronique des souris a souligné par le Dr. Xiu-Fang Ding, et al.

Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article
NomEntrepriseNuméro de catalogueCommentaires
Chinese HerbsTongrentang (Bozhou, AnHui) Decoction Pieces LimitedCompany-Lesmédicaments ont été extraits par la salle de préparation de la médecine chinoise de l’hôpital de l’amitié Chine-Japon, de l’eau distillée a été utilisée pour préparer la suspension de Xiaoyaosan, et la dose était de 0,25 g / kg / j.
FluoxétinePATHEON FRANCE5545AL’eau distillée a été utilisée pour préparer la suspension de fluoxétine, et la dose de 2,6 mg/kg/j.
Souris C57BL/6jBeijing Vital River de la Charles River CompanySCXK 2011-000460 souris mâles C57BL/6J en bonne santé âgées de 12 semaines ont été achetées de Beijing Vital River de la Charles River Company.
Cagede souris Styling Biotechnologie34853016318& fois ; 202&fois ; 135 mm
d’eau distillée-L’eau a été utilisée tout au long de l’expérience.
SaccharoseSigma-Le saccharose a été utilisé dans l’essai de préférence du saccharose pour préparer une solution de saccharose à 1 %.
Balance électronique ACS-2EASPékin Hengzhongheng Electronic Technology Co., Ltd.-Il a été utilisé pour peser les avoirdupois de souris à différents stades.
Boîte en bois noir sans lustre--(40 cm x 40 cm x 15 cm), divisée en 25 carrés égaux par des lignes bleues.
WV-CP470 CaméraPanasonic,Japon-Unecaméra numérique HD qui a été utilisée pour enregistrer l’ensemble du processus du test en champ ouvert.
Etho Vision 3.0 SoftwareNoldus, Wageningen, Pays-Bas-Un système de suivi vidéo qui a été utilisé pour évaluer la fonction locomotrice et l’émotivité des souris.
Le logicielIBM-SPSS21.0 a été utilisé pour analyser les données, l’ANOVA à un facteur ou le test non paramétrique a été utilisé pour les données générales basées sur le test de normalité et le test d’homogénéité pour la variance, et la méthode LSD a été adoptée pour les comparaisons entre les groupes.
Logiciel Graphpad Prism 6.0 GraphpadSoftware,Inc.USA-Lelogiciel Graphpad Prism 6.0 a été utilisé pour dessiner des graphiques statistiques.

Références

  1. Chrousos, G. P., Gold, P. W. The concepts of stress and stress system disorders. Overview of physical and behavioral homeostasis. JAMA. 267 (9), 1244-1252 (1992).
  2. Yao, Y., Huang, H. Y., Yang, Y. X., Guo, J. Y. Cinnamic aldehyde treatment alleviates chronic unexpected stress-induced depressive-like behaviors via targeting cyclooxygenase-2 in mid-aged rats. Journal of Ethnopharmacology. 162, 97-103 (2015).
  3. Murray, C. J., Lopez, A. D. Global health statistics: a compendium of incidence prevalence and mortality estimates for over 200 conditions. World Health Organization Harvard School of Public Health World Bank. , ii(1996).
  4. Sackeim, H. A. The definition and meaning of treatment-resistant depression. Journal of Clinical Psychiatry. 62 (16), 10-17 (2001).
  5. Li, W., et al. The effect of compounds of soothing liver, invigorating spleen, tonifying kidney on the praxiology and immunological function of chronic immobilization stressed rats. Acta Laboratorium Animalis Scientia Sinica. 11, 33-37 (2003).
  6. Meng, Z. Z., Chen, J. X., Jiang, Y. M., Zhang, H. T. Effect of Xiaoyaosan Decoction on Learning and Memory Deficit in Rats Induced by Chronic Immobilization Stress. Evidence-Based Complementary and Alternative. 2013 (17), 297154(2013).
  7. Zhao, H., Wan, X., Chen, J. X. A mini review of traditional Chinese medicine for the treatment of depression in China. American Journal of Chinese Medicine. 37 (02), 207-213 (2009).
  8. Gao, X., et al. Metabonomic study on chronic unpredictable mild stress and intervention effects of Xiaoyaosan in rats using gas chromatography coupled with mass spectrometry. Journal of Ethnopharmacology. 137 (1), 690-699 (2011).
  9. Li, P., et al. CNP signal pathway up-regulated in rectum of depressed rats and the interventional effect of Xiaoyaosan. World Journal of Gastroenterology. 21 (5), 1518(2015).
  10. Li, X. J., et al. Xiaoyaosan exerts anxiolytic-like effects by down-regulating the TNF-α/JAK2-STAT3 pathway in the rat hippocampus. Scientific Reports. 7 (1), 353(2017).
  11. Jun-Sheng, T., et al. Dynamic analysis of the endogenous metabolites in depressed patients treated with TCM formula Xiaoyaosan using urinary (1)H NMR-based metabolomics. Journal of Ethnopharmacology. 158, 1-10 (2014).
  12. Dai, Y., et al. Metabolomics study on the anti-depression effect of xiaoyaosan on rat model of chronic unpredictable mild stress. Journal of Ethnopharmacology. 128 (2), 482-489 (2010).
  13. Zhou, Y., et al. Antidepressant-like effects of the fractions of Xiaoyaosan on rat model of chronic unpredictable mild stress. Journal of Ethnopharmacology. 137 (1), 236-244 (2011).
  14. Wang, P. S., et al. The Costs and Benefits of Enhanced Depression Care to Employers. Archives of General Psychiatry. 63 (12), 1345-1353 (2006).
  15. Pirraglia, P. A., Rosen, A. B., Hermann, R. C., Olchanski, N. V., Neumann, P. Cost-utility analysis studies of depression management: a systematic review. American Journal of Psychiatry. 161 (12), 2155-2162 (2004).
  16. Wang, S. X., et al. Xiaoyaosan Decoction Regulates Changes in Neuropeptide Y and Leptin Receptor in the Rat Arcuate Nucleus after Chronic Immobilization Stress. Evidence-based Complementary and Alternative Medicine. 2012 (4), 381278(2012).
  17. Zhu, X., et al. Xiao Yao San Improves Depressive-Like Behavior in Rats through Modulation of β-Arrestin 2-Mediated Pathways in Hippocampus. Evidence-based Complementary and Alternative. 2014, (2014).
  18. Ding, X. F., et al. Involvement of Normalized Glial Fibrillary Acidic Protein Expression in the Hippocampi in Antidepressant-Like Effects of Xiaoyaosan on Chronically Stressed Mice. Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine. 2017, 1960584(2017).
  19. Ding, X. F., et al. Involvement of the glutamate/glutamine cycle and glutamate transporter GLT-1 in antidepressant-like effects of Xiao Yao san on chronically stressed mice. BMC Complementary & Alternative Medicine. 17 (1), 326(2017).
  20. Murua, V. S., Gomez, R. A., Andrea, M. E., Molina, V. A. Shuttle-box deficits induced by chronic variable stress: reversal by imipramine administration. Pharmacol Biochem Behav. 38 (1), 125(1991).
  21. Duan, J. J., et al. Pharmacokinetics of 5-fluorouracil and cyclophosphamide in depression rats. European Review for Medical & Pharmacological Sciences. 16 (4), 427-436 (2012).
  22. Cao, X., et al. Astrocyte-derived ATP modulates depressive-like behaviors. Science Foundation in China. 19 (1), 56(2013).
  23. Kirshenbaum, G. S., et al. Decreased neuronal Na+, K+ -ATPase activity in Atp1a3 heterozygous mice increases susceptibility to depression-like endophenotypes by chronic variable stress. Genes Brain & Behavior. 10 (5), 542-550 (2011).
  24. Liu, X. J., et al. Urinary metabonomic study using a CUMS rat model of depression. Magnetic Resonance in Chemistry. 50 (3), 187-192 (2012).
  25. Zhu, S., et al. Unpredictable chronic mild stress induces anxiety and depression-like behaviors and inactivates AMP-activated protein kinase in mice. Brain Research. 1576, (2014).
  26. Yang, C., Wang, G., Wang, H., Liu, Z., Wang, X. Cytoskeletal alterations in rat hippocampus following chronic unpredictable mild stress and re-exposure to acute and chronic unpredictable mild stress. Behavioural Brain Research. 205 (2), 518-524 (2009).
  27. Ding, X. F., et al. Xiao Yao San Improves Depressive-Like Behaviors in Rats with Chronic Immobilization Stress through Modulation of Locus Coeruleus-Norepinephrine System. Evidence-Based Complementary and Alternative. , 605914(2014).
  28. Wu, L. L., et al. Antidepressant-Like Effects of Fractions Prepared from Danzhi-Xiaoyao-San Decoction in Rats with Chronic Unpredictable Mild Stress: Effects on Hypothalamic-Pituitary-Adrenal Axis, Arginine Vasopressin, and Neurotransmitters. Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine. 2016 (3), 1-11 (2016).
  29. Stanford, S. C. The Open Field Test: reinventing the wheel. Journal of Psychopharmacology. 21 (2), 134(2007).
  30. Zeldetz, V., et al. A New Method for Inducing a Depression-Like Behavior in Rats. Journal of Visualized Experiments. (132), e57137(2018).
  31. Willner, P. Chronic mild stress (CMS) revisited: consistency and behavioural-neurobiological concordance in the effects of CMS. Neuropsychobiology. 52 (2), 90-110 (2005).
  32. Wood, G. E., Norris, E. H., Waters, E., Stoldt, J. T., Mcewen, B. S. Chronic immobilization stress alters aspects of emotionality and associative learning in the rat. Behavioral Neuroscience. 122 (2), 282-292 (2008).

Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.

Réimpressions et autorisations

Demander l’autorisation de réutiliser le texte ou les figures de cet article JoVE

Demander une autorisation

Mots-clés

Stress chronique impr visible l gertraitement au Xiaoyaosantraitement la fluox tinetest de pr f rence pour le saccharosetest du champ librevaluation de l tat du pelagemesure du poids corporelcomportements de type d pressifmod le de d pression chez la sourism decine traditionnelle chinoise

Articles connexes