Démêlé les acteurs clés de l’immunité humorale : avancé et optimisé protocole d’isolement de Lymphocyte de patchs murin de Peyer

Yavuz F. Yazicioglu; Halil I. Aksoylar; Rinku Pal; Nikolaos Patsoukis; Vassiliki A. Boussiotis

doi:10.3791/58490

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Article de méthode

Démêlé les acteurs clés de l’immunité humorale : avancé et optimisé protocole d’isolement de Lymphocyte de patchs murin de Peyer

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DOI :

10.3791/58490

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21 novembre 2018

Yavuz F. Yazicioglu¹^,² , Halil I. Aksoylar¹^,² , Rinku Pal¹^,² , Nikolaos Patsoukis¹^,² , Vassiliki A. Boussiotis¹^,²

¹Division of Hematology-Oncology, Beth Israel Deaconess Medical Center, Harvard Medical School, ²Department of Medicine, Beth Israel Deaconess Medical Center, Harvard Medical School

Dans cet article

Résumé

Dans cette étude, nous présentons un roman et un protocole efficace pour isoler des lymphocytes de plaques de Peyer (PPs), qui peuvent être utilisés ultérieurement pour des essais fonctionnels in vivo et in vitro , mais aussi des études cytométrie en flux de T folliculaire d’assistance et des cellules germinales Centre B.

Résumé

Dans la muqueuse de l’intestin, cellules immunitaires constituent une entité unique immunologique, ce qui favorise la tolérance immunitaire tout en conférant simultanément des défenses immunitaires contre les agents pathogènes. Il est bien établi que de Peyer (PPs) ont un rôle essentiel dans le réseau de système immunitaire muqueux en accueillant plusieurs effecteur T et cellules B sous-ensembles. Une certaine fraction de ces cellules effectrices, les folliculaire T helper (TFH) et les cellules de B de centre germinatif (GC) sont professionnalisé dans la régulation de l’immunité humorale. Par conséquent, la caractérisation de ces sous-ensembles de cellules au sein du PPs quant à leur programme de différenciation et les propriétés fonctionnelles peut fournir des informations importantes concernant l’immunité des muqueuses. À cette fin, une méthode facilement applicable, efficace et reproductible d’isolement de lymphocyte de PPs serait utile aux chercheurs. Dans cette étude, nous avons cherché pour générer une méthode efficace pour isoler des lymphocytes de souris PPs avec rendement élevé cellulaire. Notre approche a révélé qu’évoluées telles que l’utilisation de réactifs digestifs et agitation de tissu, le tissu initial ainsi que cell coloration de conditions et de sélection des panneaux d’anticorps, ont une grande influence sur la qualité et l’identité des lymphocytes isolés et sur résultats expérimentaux.

Nous décrivons ici un protocole permettant aux chercheurs d’isoler efficacement les populations de lymphocytes de PPs permettant l’évaluation reproductible écoulement cytometry des sous-ensembles de T et les lymphocytes B se concentrant principalement sur des sous-ensembles de cellules TFH et GC B.

Introduction

Le tube digestif entier dès le début à la fin est paré avec un vaste réseau lymphoïde qui contient des cellules immunitaires plus que tout autre organe chez l’homme et la souris¹. Peyer de patchs (PPs) constituent une composante majeure de la branche intestinale de cet organisme immunitaire cellulaire, ce qu’on appelle tissu lymphoïde associé au tube digestif (GALT)²^,³. Au sein de PPs, des milliers de millions d’antigènes provenant des matières alimentaires, agents pathogènes et le microbiote commensal sont échantillonnés en permanence et quand nécessaire les réponses immunitaires appro....