In Vitro Méthode de contrôle des Concentrations de gaz halogénés en cellules épithéliales alvéolaires

Résumé

Les auteurs décrivent un protocole facile, spécialement conçu pour atteindre des concentrations précises et contrôlées du sévoflurane ou isoflurane le in vitro afin d’améliorer notre compréhension des mécanismes impliqués dans les lésions épithéliales pulmonaires et de tester les roman traitements pour le syndrome de détresse respiratoire aiguë.

Résumé

Syndrome de détresse respiratoire aiguë (SDRA) est un syndrome d’une blessure alvéolaire diffuse avec dégagement de fluide alvéolaire avec facultés affaiblies et une inflammation sévère. L’utilisation d’agents halogénés, comme sévoflurane ou isoflurane, pour la sédation des patients de l’unité de soins intensifs (USI) peut améliorer les échanges gazeux, réduire l’oedème alvéolaire et atténuer l’inflammation au cours du SDRA. Cependant, manque des données sur l’utilisation des agents inhalés pour la sédation continue en réanimation pour traiter ou prévenir les dommages aux poumons. Afin d’étudier les effets des agents halogénés sur les cellules épithéliales alvéolaires dans des conditions « physiologiques », nous décrire un système facile à des cellules de culture à l’interface air-liquide et de les exposer à des agents halogénés pour fournir des fractions précis contrôlé « air » et concentrations de « moyen » pour ces agents. Nous avons développé une chambre hermétique scellée dans laquelle plaques avec des cellules immortalisées épithéliales alvéolaires humaines pourraient être exposés à une fraction précise et contrôlée du sévoflurane ou isoflurane en utilisant un flux de gaz en continu fourni par un circuit de la machine anesthésique. Les cellules ont été exposés à 4 % de sévoflurane et 1 % d’isoflurane pendant 24 heures. Spectrométrie de masse de gaz a été réalisée afin de déterminer la concentration des agents halogénés dissous dans le milieu. Après la première heure, la concentration de sévoflurane et isoflurane dans le milieu ont été 251 mg/L et 25 mg/L, respectivement. Les courbes représentant la concentration de sévoflurane et isoflurane dissolvent dans le milieu ont montré des cours similaires au fil du temps, avec un plateau à une heure après l’exposition.

Ce protocole a été spécialement conçu pour atteindre des concentrations précises et contrôlées de sévoflurane ou isoflurane in vitro afin d’améliorer notre compréhension des mécanismes impliqués dans les lésions épithéliales pulmonaires au cours du SDRA et de tester de nouveaux traitements pour les syndrome.

Introduction

Syndrome de détresse respiratoire aiguë (SDRA) est un syndrome clinique caractérisé par des lésions alvéolaires diffuses, œdème pulmonaire et une insuffisance respiratoire hypoxémie. Bien que SDRA représente plus de 10 % des admissions de l’unité de soins intensifs (USI) et près de 25 % des patients ICU nécessitant une ventilation mécanique, c’est toujours un défi sous-diagnostiquée pour les cliniciens, avec un taux de mortalité de l’hôpital de 35 à 45 %¹. Malgré d’intenses recherches, l’identification d’un traitement pharmacologique efficace SDRA ou la prévention a échoué jusqu'à présent. Deux principales caractéristiques contribuent à la mort....

Protocole

1. culture des cellules épithéliales alvéolaires (hAELVi)

1. Dégel
   1. Pipetter 4 mL de milieu de culture prêt à l’emploi humain alvéolaire épithéliales (huAEC) dans un tube en plastique de 15 mL et décongeler rapidement le flacon au bain-marie préchauffé (37 ° C).
   2. Transférer la suspension cellulaire décongelés dans un tube de 15 mL en plastique contenant 4 mL du milieu avant la centrifugation du tube à 200 x g pendant 5 min.
   3. Aspirer le surnageant et remettre en suspension le culot cellulaire avec 5 mL de la milieu de culture. Ensuite, transférer les cellules dans une fiole de T25.
   4. Cultiver les cellules dans des conditions n....

Résultats

Les concentrations du sévoflurane et isoflurane, qui dissous dans le milieu au fil du temps, sont signalées dans le tableau 1 et tableau 2, respectivement.

Les méandres de la concentration de sévoflurane et isoflurane dans le milieu étaient semblables au fil du temps. Immédiatement après que la concentration requise d’agent halogéné a été définie, les concentrations ont augmenté au cours de la p.......

Discussion

Notre protocole décrit une méthode simple pour exposer les cellules à une fraction précise d’un agent anesthésique halogéné, comme sévoflurane ou l’isoflurane. En outre, nous rapportons ici — pour la première fois — une corrélation rigoureuse entre la fraction de gaz et la concentration de sévoflurane et isoflurane à l’intérieur du milieu de culture lui-même. Cette étape fondamentale permet maintenant d’utiliser en toute sécurité notre chambre étanche à l’air pour étudier les effets de ces agents halogénés dans une cultu.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Sévoflurane	Baxter		La réalisation d’expériences utilisant le sévoflurane ou l’isoflurane pendant la grossesse doit être fortement déconseillée
Isoflurane	Virbac		La réalisation d’expériences utilisant le sévoflurane ou l’isoflurane pendant la grossesse doit être fortement déconseillée
Cellules épithéliales alvéolaires humaines	InScreenex	INS-CI-1015
huAEC Medium ( prêt à l’emploi)	InScreenex	INS-ME-1013-500ml
Circuit de la machine d’anesthésie	Dräger	Fabius
Analyseur de gaz	Drageer	Vamos Plus
Filtre à gaz anesthésique	SedanaMedical	FlurAbsord
Humificateur chauffé	Fisher& Paykel	MR850
Chamber	Curver	00012-416-00
Chromatographie en phase gazeuse couplée à la détection de masse	Thermo Fisher Scientific, San Jose, CA, USA	Trace 1310 avec TSQ 8000evo
Colonne de silice fondue (30 m x 1,4 μ ; m, 0,25 mm ID)	Restek, Lisses, France	Rxi-624Sil MS