Débit par cytométrie en flux détection de cellules de cellules souches-comme pour le Cancer du sein nouvellement formé après le renversement de l’apoptose

Yiyue Xu; Chun So; Hon-Ming Lam; Ming-Chiu Fung; Suk-Ying Tsang

doi:10.3791/58642

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Article de méthode

Débit par cytométrie en flux détection de cellules de cellules souches-comme pour le Cancer du sein nouvellement formé après le renversement de l’apoptose

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DOI :

10.3791/58642

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26 janvier 2019

Yiyue Xu¹^,² , Chun So¹ , Hon-Ming Lam¹^,² , Ming-Chiu Fung¹^,² , Suk-Ying Tsang¹^,²^,³^,⁴

¹School of Life Sciences, The Chinese University of Hong Kong, ²State Key Laboratory of Agrobiotechnology, The Chinese University of Hong Kong, ³Key Laboratory for Regenerative Medicine, Ministry of Education, The Chinese University of Hong Kong, ⁴Centre for Novel Biomaterials, The Chinese University of Hong Kong

Dans cet article

Résumé

Nous présentons ici un protocole visant à isoler les cellules apoptotiques de cancer du sein par un tri de fluorescence-lancée de cellules et plus détecter le passage de cellules non souches du cancer du sein de cellules de cellules souches-comme pour le cancer du sein après le renversement de l’apoptose par cytométrie en flux.

Résumé

Récidive du cancer a longtemps étudié par les oncologues tandis que les mécanismes sous-jacents demeurent obscures. Récemment, nous et autres découvrirent qu’un phénomène appelé apoptose inversion entraîne tumorigénicité accrue dans différents modèles de cellule sous différents stimuli. Des études antérieures ont surtout portés sur le suivi de ce processus in vitro et in vivo ; Toutefois, l’isolement de cellules réelle inversées doit encore à atteindre, qui limite notre compréhension sur les conséquences de l’inversion de l’apoptose. Ici, nous profitons d’un colorant de la Caspase-3/7 vert détection pour marquer les cellules avec des caspases activés après l’induction de l’apoptose. Cellules avec des signaux positifs sont plus triés par cellule activée par fluorescence triant (FACS) pour la récupération. L’examen morphologique en microscopie confocale permet de confirmer le statut d’apoptotic avant FACS. Une augmentation de la tumorigénicité peut souvent être attribuée à l’élévation du pourcentage de cellules de souches du cancer (SCC)-comme des cellules. Aussi, compte tenu de l’hétérogénéité du cancer du sein, identifier l’origine de ces cellules CSC serait essentiel pour le traitement du cancer. Ainsi, nous préparons des cellules-souches non cancéreuses du sein avant le déclenchement de l’apoptose, isoler les cellules activées caspase et effectuez la procédure d’inversion de l’apoptose. Analyse en cytométrie en flux révèle que cellules mammaires CSC ré-apparaissent dans le groupe inversé, indiquant les cellules mammaires CSC sont transités de cellules-souches non cancéreuses du sein au cours de l’inversion de l’apoptose. En résumé, ce protocole inclut l’isolement des cellules de cancer du sein apoptotic et détection des variations en pourcentage de la CSC dans les cellules inversées par cytométrie en flux.

Introduction

Le cancer a été des principales causes de la mort, provoquant le lourd fardeau aux pays dans le monde¹. Le cancer occupe un rang élevé, tant en termes d’incidence et de mortalité chez les femmes entre tous les types de cancer¹. En raison de l’hétérogénéité du cancer, une combinaison de médicaments est habituellement utilisée en chimiothérapie pour atteindre cancer cell death²^,³^,⁴. Cependant, puisque la communes médicaments chimiothérapeutiques ciblent souvent ADN⁵^,⁶, syn....