Listeria monocytogenes Infection du cerveau

Résumé

Au cours de l’infection, Listeria monocytogenes est capable de traverser la barrière hémato - encéphalique pour coloniser le cerveau. Dans ce protocole, nous démontrons comment évaluer la colonisation bactérienne des organes suite à une infection de la souris. Une procédure pour effectuer la perfusion des organes entiers pour la détermination précise du nombre de bactéries dans le parenchyme du cerveau est prévue.

Résumé

Listeria monocytogenes est un bactérie pathogène intracellulaire qui est fréquemment associé à une infection d’origine alimentaire. La capacité de L. monocytogenes de franchir la barrière sang - encéphalique (BHE) est relative car elle peut conduire à la méningite et l’encéphalite mortelle. Le BBB protège le microenvironnement de cerveau de divers métabolites toxiques et agents pathogènes microbiens dans le sang suite à une infection et souscrit donc l’homéostasie du cerveau. Les mécanismes par lesquels L. monocytogenes présents dans le sang traverser la BHE provoque le cerveau les infections ne sont pas totalement comprises, et il y a aussi un manque d’un système robuste de modèle pour étudier les infections cérébrales par L. monocytogenes. Nous présentons ici un modèle d’infection de souris simple pour déterminer si les bactéries ont traversé la BHE et quantifier le fardeau des bactéries qui ont colonisé le cerveau in vivo. Dans cette méthode, les animaux étaient infectés par voie intraveineuse par L. monocytogenes et ont été euthanasiés humainement par l’exposition au CO₂ suivi par dislocation cervicale. La perfusion cardiaque des animaux a été réalisée avant la récolte d’organes infectés. Sang a été prélevé avant la perfusion et le nombre de bactéries par organe ou mL de sang a été déterminée par l’ensemencement de dilutions des homogénats sur plaques de gélose sang ou d’organe et compter le nombre de colonies formées. Cette méthode peut être utilisée pour étudier les interactions ligand-récepteur roman qui améliorent une infection du cerveau par L. monocytogenes et peuvent être facilement adapté pour l’étude de plusieurs bactéries pathogènes.

Introduction

La bactérie Gram-positive de Listeria monocytogenes est un pathogène intracellulaire facultatif et l’un des plupart pathogènes d’origine alimentaire mortelle dans le monde entier. Ingestion d’aliments de L. monocytogenes contaminés peut conduire à la listériose chez l’homme, une grave maladie invasive ciblant les femmes enceintes pour la plupart, les nouveau-nés, les personnes âgées et immunodéprimées¹. L. monocytogenes est parmi les principales causes de décès par un pathogène d’origine alimentaire aux États-Unis et les taux de létalité de listériose sont aussi hautes que 20 à 30 %, le plus élevé de tous les pathogèn....

Protocole

Tous les animaux doivent être entretenus et manipulés avec grand soin afin de minimiser l’inconfort au cours de la procédure. La procédure doit être effectuée dans le respect de toutes les lois fédérales, provinciales et municipales et Comité de l’emploi et l’institutionnel animalier. Notez également que les expériences de laboratoire doivent être effectués conformément aux lignes directrices sur la biosécurité de niveau 2.

1. la croissance de L. monocytogenes pour les études d’Infection de souris

1. Autoclave 500 mL de milieu gélosé perfusion cérébrale du coeur (BHI) dans une fiole d’Erlenmeyer de 1 L pour préparer....

Résultats

Le cerveau est fortement vascularisé et L. monocytogenes est connu pour infecter les types de cellules présents dans le sang^3,13. Le protocole décrit est utilisé pour démontrer la capacité de L. monocytogenes de franchir la barrière sang - encéphalique (BHE) conduisant à l’infection du cerveau chez la souris. Pour déterminer si les bactéries ont traversé le BBB en vivo, perfusion de sang chez la souris e.......

Discussion

L. monocytogenes est capable de provoquer une méningo-encéphalite mortelle chez les humains. Des études antérieures ont démontré la capacité des bactéries à traverser la barrière hémato-encéphalique (BHE) et de coloniser le cerveau. Trois voies d’invasion du cerveau ont été proposées au cours de l’infection : direct pénétration du BBB par des bactéries, stealth transport de bactéries contenues à l’intérieur des cellules mononucléaires³et migration axonale par les souches de L. monocyt.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Cerveau Cœur Milieu de perfusion	Becton Dickinson	237200
Sulfate de streptomycine  ;	Amresco	0382-50G
Boîtes de Pétri	VWR	25384-342
Glycérol	VWR	97062-832
IKA T18 ULTRA-TURRAX Homogénéisateur de base	IKA	3352109	Modèle : Spectrophotomètre T18BS1
Beckman	Coulter	DU 800 série
BALB/c souris Jackson	Laboratory	Modèle #000651
Seringues de 1 mL	Becton Dickinson	309659
aiguilles de 26 g	Becton Dickinson	305115
aiguilles papillon de 21 g	Becton Dickinson	367281
Acide éthylènediaminetétraacétique.	Sigma-Aldrich	60004
15 mL Tubes coniques	VWR	21008-918
Tubes à essai à fond rond	VWR	60819-546
Solution saline tamponnée au phosphate  ;	Corning	46-013-CM
Spatule en acier inoxydable	VWR	82027-520
Ciseaux en acier inoxydable (6.5 in)	VWR	82027-592
Ciseaux en acier inoxydable (4.5 in)	VWR	82027-578
Pince émoussée en acier inoxydable  ; (4,5 pouces)	VWR	82027-440
Pince à pointe fine en acier inoxydable  ; (6 po)	VWR	82027-406