Ce manuscrit décrit une méthode simple pour mesurer le stress comportemental chez le zébrafish adulte. L’approche profite de la tendance innée que le zébrafish préfèrent la moitié inférieure d’un réservoir quand dans un État stressant. Nous décrivons également les méthodes de couplage du dosage avec la pharmacologie.
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Article de méthode
Approches comportementales pour étudier le stress inné dans le Zébrafish
Dans cet article
Résumé
Résumé
La réponse appropriée aux stimuli stressants est essentielle pour la survie d’un organisme. Des recherches approfondies ont été menées sur un large éventail de maladies liées au stress et de troubles psychiatriques, mais d’autres études sur la régulation génétique et neuronale du stress sont encore nécessaires pour développer de meilleurs traitements thérapeutiques. Le zébrafish fournit un modèle génétique puissant pour enquêter sur les fondements neuronaux du stress, car il existe une grande collection de lignées mutantes et transgéniques. En outre, la pharmacologie peut facilement être appliquée à la zébrafish, car la plupart des médicaments peuvent être ajoutés directement à l’eau. Nous décrivons ici l’utilisation du «test du nouveau réservoir» comme une méthode pour étudier les réponses innées du stress chez le zébrafish, et démontrer comment les médicaments anxiolytiques potentiels peuvent être validés en utilisant le dosage. La méthode peut facilement être couplée avec des lignées de zébrafish qui constituent des mutations génétiques, ou celles dans lesquelles des approches transgéniques pour manipuler des circuits neuronaux précis sont utilisées. Le dosage peut également être utilisé dans d’autres modèles de poissons. Ensemble, le protocole décrit devrait faciliter l’adoption de ce dosage simple à d’autres laboratoires.
Introduction
Les réactions de stress sont altérées des États comportementaux et physiologiques résultant de stimuli potentiellement nocifs ou aversifs. Les réponses au stress sont conservées dans tout le règne animal et sont essentielles pour la survie d’un organisme1. Des décennies de recherche ont grandement élargi notre connaissance de certains des mécanismes génétiques et neuronaux sous-jacents aux États de stress. Aujourd’hui, les zones du cerveau telles que l’amygdale et le striatum2, et les facteurs génétiques tels que l’hormone de libération de la corticotropine (CRH), et les récepteurs glucocorticoïdes<....
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Protocole
Le protocole a été approuvé par le Comité institutionnel de soins et d’utilisation des animaux Florida Atlantic University.
1. la préparation
- Désigner une pièce isolée pour effectuer des études comportementales, ou fermer une section d’une pièce afin qu’elle soit isolée.
Remarque: la pièce doit être non perturbée et avoir un faible trafic pour éviter de perturber le comportement normal du poisson. - Déplacez les matériaux et l’équipement suivants dans la salle comportementale: (i) un appareil photo et un objectif, (II) un filtre infrarouge qui peut être attaché à la lentille, (III) un support de caméra, (IV) un ordinate....
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Résultats
Examen du stress dans le zébrafish
Pour examiner le comportement du stress au fil du temps dans le zébrafish de type sauvage, nous avons testé des poissons adultes de la souche AB24 dans le test du nouveau réservoir. Les adultes AB ont été soumis au protocole tel que décrit ci-dessus. Brièvement, les poissons ont reçu une période d’acclimatation de 1 h dans un réservoir dans la salle de comportement. Une personne a été placée dans un bécher pendant 10 m.......
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Discussion
Le zebrafish présente une réaction de stress solide dans un nouveau char
Ici, nous décrivons une approche comportementale simple pour examiner les réponses au stress chez les adultes zebrafish, et valider l’approche comme une simple mesure du stress en utilisant la pharmacologie.
Le test du nouveau réservoir est un test largement utilisé pour examiner le stress inné chez le zébrafish et d’autres espèces de poissons12,14
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Déclarations de divulgation
Les auteurs déclarent qu’ils n’ont pas d’intérêts concurrentiels ou financiers.
Remerciements
Ce travail a été appuyé par le financement de la Jupiter Life Science Initiative à la Florida Atlantic University à ERD et ACK. Ces travaux ont également été soutenus par des subventions R21NS105071 (attribuées à l’ACK et à la ERD) et R15MH118625 (attribuées à la Dre) par les instituts nationaux de la santé.
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Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| Appareil photo | Nous utilisons une caméra USB Point Grey Grasshopper3 avec objectif d’Edmund Optics. | ||
| Utilisez | |||
| des programmes tels que Virtualdub ou FlyCapture car la fréquence d’images d’acquisition peut être définie. | |||
| LED infrarouges | |||
| Réservoir d’essai | Aquaneering | Référence ZT180 | Taille : M3 1,8 litre |
| Support et pince, ou trépied standard pour caméra | |||
| Bécher | |||
| Logiciel | Nous utilisons Ethovision XT 13 de Noldus Information Technology | ||
| Chlorure | de buspironeSigma-Aldrich | B7148 | |
| d’essais randomisés | Nous utilisons la fonction RANDBETWEEN dans Microsoft Excel |
Références
- McEwen, B. S. Stress, adaptation, and disease. Allostasis and allostatic load. Annals of the New York Academy of Sciences. 840, 33-44 (1998).
- Tovote, P., Fadok, J. P., Lüthi, A. Neuronal circuits for fear and anxiety. Nature Reviews Neuroscience.
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Réimpressions et autorisations
