Microfocus X-ray CT (microCT) Imagerie d'Actinia equina (Cnidaria), Harmothoe sp. (Annelida), et Xenoturbella japonica (Xenacoelomorpha)

Akiteru Maeno; Hisanori Kohtsuka; Kensuke Takatani; Hiroaki Nakano

doi:10.3791/59161

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Article de méthode

Microfocus X-ray CT (microCT) Imagerie d'Actinia equina (Cnidaria), Harmothoe sp. (Annelida), et Xenoturbella japonica (Xenacoelomorpha)

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DOI :

10.3791/59161

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6 août 2019

Akiteru Maeno¹ , Hisanori Kohtsuka² , Kensuke Takatani³ , Hiroaki Nakano³

¹Mammalian Genetics Laboratory, National Institute of Genetics, ²Misaki Marine Biological Station, The University of Tokyo, ³Shimoda Marine Research Center, University of Tsukuba

Dans cet article

Résumé

Ici, les protocoles pour effectuer l'imagerie par tomodensitométrie par rayons X (microCT) de trois animaux invertébrés marins sont expliqués en détail. Cette étude décrit des étapes telles que la fixation de l'échantillon, la coloration, le montage, la numérisation, la reconstruction d'images et l'analyse des données. Des suggestions sur la façon dont le protocole peut être ajusté pour différents échantillons sont également fournies.

Résumé

Traditionnellement, les biologistes ont dû s'appuyer sur des méthodes destructrices telles que la section pour étudier les structures internes des organismes opaques. L'imagerie par tomodensitométrie par rayons X (microCT) microfocus non destructive est devenue un protocole puissant et émergent en biologie, en raison des progrès technologiques dans les méthodes de coloration des échantillons et les innovations dans le matériel microCT, les ordinateurs de traitement et les données logiciel d'analyse. Cependant, ce protocole n'est pas couramment utilisé, comme c'est le cas dans les domaines médical et industriel. L'une des raisons de cette utilisation limitée est l'absence d'un manuel simple et compréhensible qui couvre toutes les étapes nécessaires : prélèvement d'échantillons, fixation, coloration, montage, numérisation et analyse des données. Une autre raison est la grande diversité des métazoaires, en particulier les invertébrés marins. En raison de la diversité des tailles, des morphologies et des physiologies des invertébrés marins, il est crucial d'ajuster les conditions expérimentales et les configurations matérielles à chaque étape, selon l'échantillon. Ici, les méthodes d'imagerie microCT sont expliquées en détail à l'aide de trois invertébrés marins phylogénétiquement divers : Actinia equina (Anthozoa, Cnidaria), Harmothoe sp. (Polychaeta, Annelida) et Xenoturbella japonica ( Xenoturbellida, Xenacoelomorpha). Des suggestions sur l'exécution de l'imagerie microCT sur divers animaux sont également fournies.

Introduction

Les chercheurs en biologie ont généralement dû faire des sections minces et effectuer des observations par microscopie légère ou électronique afin d'étudier les structures internes des organismes opaques. Cependant, ces méthodes sont destructrices et problématiques lorsqu'elles sont appliquées à des spécimens rares ou précieux. En outre, plusieurs étapes de la méthode, telles que l'encastrement et la sectionnement, prennent du temps, et il peut prendre plusieurs jours pour observer un échantillon, selon le protocole. En outre, lors de la manipulation de nombreuses sections, il ya toujours une possibilité d'endommager ou de perdre certaines sections. Des techniques de ....