Identification des récepteurs d'orexine et d'endocannabinoïdes chez le poisson zèbre adulte à l'aide de méthodes d'immunoperoxidase et d'immunofluorescence

Roberta Imperatore; Livia D'Angelo; Paolo De Girolamo; Luigia Cristino; Marina Paolucci

doi:10.3791/59308

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Article de méthode

Identification des récepteurs d'orexine et d'endocannabinoïdes chez le poisson zèbre adulte à l'aide de méthodes d'immunoperoxidase et d'immunofluorescence

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DOI :

10.3791/59308

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25 juin 2019

Roberta Imperatore¹^,² , Livia D'Angelo³ , Paolo De Girolamo³ , Luigia Cristino² , Marina Paolucci¹

¹Department of Sciences and Technologies (DST), University of Sannio, ²Endocannabinoid Research Group, Institute of Biomolecular Chemistry, ³Department of Veterinary Medicine and Animal Productions, University of Naples Federico II

Dans cet article

Résumé

Présentés ici sont des protocoles pour la caractérisation immunohistochimique et la localisation du peptide d'orexine, des récepteurs d'orexin, et des récepteurs endocannabinoïdes dans l'intestin et les cerveaux des modèles normaux et induits par l'obésité de régime (DIO) de poissons zèbres adultes utilisant immunoperixidase et les méthodes d'immunofluorescence double.

Résumé

L'immunohistochimie (IHC) est une technique très sensible et spécifique impliquée dans la détection d'antigènes cibles dans les sections tissulaires avec des anticorps étiquetés. Il s'agit d'un processus en plusieurs étapes dans lequel l'optimisation de chaque étape est cruciale pour obtenir le signal spécifique optimal. Grâce au CSI, la distribution et la localisation de biomarqueurs spécifiques peuvent être détectées, révélant des informations sur la conservation évolutive. En outre, le CSI permet de comprendre les changements d'expression et de distribution des biomarqueurs dans des conditions pathologiques, comme l'obésité. IHC, principalement la technique d'immunofluorescence, peut être utilisé chez les poissons zèbres adultes pour détecter l'organisation et la distribution des molécules phylogénétiquement conservées, mais un protocole Standard IHC n'est pas estasblished. L'orexine et l'endocannabinoïde sont deux systèmes hautement conservés impliqués dans le contrôle de l'apport alimentaire et de la pathologie de l'obésité. Les protocoles utilisés ici sont utilisés pour obtenir des informations sur le peptide orexin (OXA), le récepteur de l'orexine (OX-2R) et la localisation et la distribution des récepteurs cannabinoïdes (CB1R) dans l'intestin et le cerveau des modèles de poissons zèbres adultes obèses normaux et induits par l'alimentation (DIO). Sont également décrits des méthodes pour l'immunoperoxidase et la double immunofluorescence, aussi bien que la préparation des réactifs, de fixation, de paraffin-embedding, et de cryoprotection du tissu de poisson zèbre et la préparation pour une étape et arrière-plan endogènes de blocage d'activité contre-staining. L'ensemble complet des paramètres est obtenu à partir d'expériences précédentes du CSI, grâce auxquelles nous avons montré comment l'immunofluorescence peut aider à comprendre les OX, l'OX-2R et la distribution, la localisation et la conservation de l'expression chez les poissons zèbres adultes. Tissus. Les images résultantes avec une intensité de signal très spécifique ont conduit à la confirmation que le poisson zèbre sont des modèles animaux appropriés pour les études immunohistochimiques de la distribution, de la localisation et de la conservation évolutive de biomarqueurs spécifiques dans conditions physiologiques et pathologiques. Les protocoles présentés ici sont recommandés pour les expériences du CSI chez les poissons zèbres adultes.

Introduction

L'immunohistochimie (IHC) est une technique classique bien établie utilisée pour identifier les composants cellulaires ou tissulaires (antigènes) par interaction antigène-anticorps¹^,². Il peut être utilisé pour identifier la localisation et la distribution des biomolécules cibles dans un tissu. Le CSI utilise des réactions immunologiques et chimiques pour détecter les antigènes dans les sections tissulaires³. Les principaux marqueurs utilisés pour la visualisation des interactions antigène-anticorps comprennent les colorants fluorescents (immunofluorescence) et les réactions de couleur ....