L'hybridation in situ chromogénique est un outil pour le diagnostic du cancer de la tête et du cou lié au VPH

Sophie Outh-Gauer; Jérémy Augustin; Marion Mandavit; Ophélie Grard; Thomas Denize; Marine Nervo; Charles Lépine; Marc Rassy; Eric Tartour; Cécile Badoual

doi:10.3791/59422

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Article de méthode

L'hybridation in situ chromogénique est un outil pour le diagnostic du cancer de la tête et du cou lié au VPH

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DOI :

10.3791/59422

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14 juin 2019

Sophie Outh-Gauer¹ , Jérémy Augustin¹ , Marion Mandavit² , Ophélie Grard² , Thomas Denize¹ , Marine Nervo¹ , Charles Lépine¹ , Marc Rassy² , Eric Tartour²^,³ , Cécile Badoual¹^,²

¹Department of Pathology, Georges Pompidou European Hospital, Assistance publique - Hôpitaux de Paris (APHP), Paris Descartes University, ²Paris Cardiovascular Research Center (PARCC), Institut national de la santé et de la recherche médicale (Inserm) U970, ³Laboratory of Immunology, Georges Pompidou European Hospital, APHP, Paris Descartes University

Dans cet article

Résumé

L'hybridation in situ de l'ARN de papillomavirus humain (HPV) est considérée comme l'une des normes d'or pour la détection active d'infection par le papillomavirus humain dans les tumeurs. Il permet la visualisation de l'expression de l'ARNm HPV E6-E7 avec la localisation et l'évaluation semi-quantitative de son signal.

Résumé

L'infection par le virus du papillome humain (VPH) est un facteur de risque majeur pour un sous-type de carcinome épistologique oropharyngé (OPSCC), qui tend à être associé à de meilleurs résultats que l'OPSCC lié à l'alcool et au tabac. L'hybridation in situ chromogénique (CISH) de l'ARN viral du VPH pourrait permettre l'évaluation semi-quantitative des transcriptions virales des protéines oncogènes E6 et E7 et une visualisation in situ avec une bonne résolution spatiale. Cette technique permet de diagnostiquer une infection active avec la visualisation de la transcription du VPH dans les cellules infectées par le VPH tumoral. Un avantage de cette technique est l'évitement de la contamination des cellules non-néoplastiques HPV-infectées adjacentes à la tumeur. Dans l'ensemble, ses bons résultats en matière de diagnostic ont été considérés comme l'étalon-or pour l'identification active de l'infection par le VPH. Étant donné que l'interaction des protéines virales E6 et E7 avec les protéines cellulaires pRb et p53 est obligatoire pour la transformation cellulaire, l'ARN HPV CISH est fonctionnellement pertinent et reflète vivement l'infection oncogène active par le VPH. Cette technique est également pertinente sur le plan clinique puisque des niveaux de transcription du VPH « faibles » ou « élevés » ont aidé à identifier deux groupes de pronostic chez les patients atteints d'un cancer de la tête et du cou positif au VPH. Ici, nous présentons le protocole pour l'ARN HPV manuel CISH effectué sur formaline-fixe paraffine-embedded (FFPE) diapositives avec un kit obtenu auprès du fabricant. Au lieu de la révélation chromogénique, l'hybridation in situ d'ARN peut également être exécutée avec la révélation fluorescente (RNA FISH). Il peut également être combiné avec l'immunostaining conventionnel.

Introduction

L'ARN VPH CISH est un outil puissant pour la détection de l'infection active par le VPH, qui peut s'avérer cruciale dans les lésions bénignes ou malignes à divers endroits tels que l'oropharynx ou le col utérin. La détection d'une infection active au VPH peut appuyer le diagnostic d'une lésion induite par le VPH et, par conséquent, influencer son traitement et son pronostic.

Le VPH est l'infection sexuellement transmissible la plus fréquente, et plus de 100 génotypes viraux ont été décrits¹. Schématiquement, on sait que les génotypes à faible risque comme les génotypes 6 et 11 induisent des verrues génitales, une pap....